Facultad De Ciencias De La Salud

Departamento de Morfología y Función

Guía No1
Laboratorio de Fisiología General

Tema: Mecanismos de transporte y permeabilidad celular

Objetivos:
- Entender la función de la permeabilidad selectiva de la membrana plasmática
- Entender y describir mecanismos de transporte activo y pasivo

Actividades

Visión general

La composición molecular de la membrana plasmática le permite ser selectiva respecto a lo que pasa a través de ella.
Deja que los nutrientes y cantidades adecuadas de iones entren en la célula y evita la entrada de sustancias
indeseables. Por esta razón, decimos que la membrana plasmática es selectivamente permeable. Proteínas celulares
valiosas y otras sustancias se conservan en el interior de la célula, y los desechos metabólicos salen al exterior.

El transporte a través de la membrana plasmática se produce de dos maneras básicas: de forma pasiva o de forma
activa. En los procesos pasivos, el transporte se debe a las diferencias de concentración o de presión (gradiente) entre
el interior y el exterior de la célula. En los procesos activos, la célula proporciona energía (ATP) para impulsar el
transporte.

Dos procesos clave de transporte pasivo a través de la membrana son la difusión y la filtración. La difusión es un
proceso de transporte importante en todas las células del organismo. La difusión simple se produce sin la ayuda de
proteínas de membrana, y la difusión facilitada requiere una proteína transportadora de membrana que ayuda al
transporte.

Tanto en la difusión simple como en la facilitada, la sustancia transportada se mueve con (o a lo largo de o a favor
de) el gradiente de concentración del soluto (desde una región de mayor concentración a otra de menor
concentración). El proceso no requiere energía de la célula. En cambio, la energía, en forma de energía cinética,
procede del constante movimiento de las moléculas. El movimiento de los solutos continua hasta que estos se
dispersan de forma uniforme en toda la solución. En este punto, la solución ha alcanzado el equilibrio.

Un tipo especial de difusión a través de una membrana es la osmosis. En la osmosis, el agua se mueve con su gradiente
de concentración, desde una mayor concentración de agua a una concentración menor. Se mueve en respuesta a una
mayor concentración de solutos en el otro lado de una membrana.
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En el organismo, el otro proceso pasivo clave, la filtración, se produce, por lo general, solo a través de las paredes
capilares. La filtración depende de un gradiente de presión como fuerza impulsora. No es un proceso selectivo.
Depende del tamaño de los poros del filtro.

Los dos procesos activos clave (recuerda que los procesos activos requieren energía) son el transporte activo y el
transporte vesicular. Al igual que la difusión facilitada, el transporte activo utiliza una proteína transportadora de
membrana. El transporte activo difiere de la difusión facilitada en que los solutos se mueven en contra de su gradiente
de concentración y en que el ATP se usa p ara impulsar el transporte. El transporte vesicular incluye la fagocitosis, la
endocitosis, la pinocitosis y la exocitosis. Estos procesos no se tratan en este ejercicio. Las actividades de este ejercicio
exploraran los mecanismos de transporte celular individualmente.

Actividad 1: Simulación de la diálisis (difusión simple)

OBJETIVOS

1. Entender que la difusión es un proceso pasivo que depende del gradiente de concentración de un soluto.

2. Comprender la relación entre el peso molecular y el tamaño molecular.

3. Entender cómo afecta la concentración del soluto a la velocidad de difusión.

4. Comprender como afecta el peso molecular a la difusión.

Introducción

Hay que recordar que todas las moléculas poseen energía cinética y se encuentran en constante movimiento. Como
las moléculas se mueven al azar a gran velocidad, chocan y rebotan entre sí, cambiando de dirección con cada colisión.
Para una temperatura dada, toda la materia tiene aproximadamente la misma energía cinética media. Las moléculas
más pequeñas tienden a moverse más rápidamente que las moléculas mas grandes, porque la energía cinética está
directamente relacionada tanto con la masa como con la velocidad (Ec = 1/2 mv 2 ).

Cuando existe un gradiente de concentración (diferencia de concentración), el efecto neto de este movimiento
molecular al azar es que las moléculas con el tiempo se distribuyen uniformemente en todo el entorno -en otras
palabras, se produce su difusión. La difusión es el movimiento de las moléculas desde una región donde su
concentración es mayor a otra donde su concentración es menor. La fuerza impulsora de la difusión es la energía
cinética de las propias moléculas.

La difusión de las partículas dentro y fuera de las células se ve modificada por la membrana plasmática, que es una
barrera física. En general, las moléculas difunden pasivamente a través de la membrana plasmática si son lo
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suficientemente pequeñas como para pasar a través de sus poros (y son ayudadas por un gradiente eléctrico y/o de
concentración) o si se pueden disolver en la porción lipídica de la membrana (como en el caso del C0 2 y 02). Una
membrana se denomina selectivamente permeable, diferencialmente permeable, o semipermeable si deja pasar
algunas articulas de soluto (moléculas), pero no otras.

La difusión de las partículas de soluto disueltas en agua a través de una membrana selectivamente permeable se
denomina difusión simple. La difusión de agua a través de este tipo de membranas se denomina osmosis. Tanto la
difusión simple como la osmosis implican movimiento de una sustancia desde un área donde su concentración es
mayor a otra donde es menor, es decir, con (o a lo largo de o a favor de) su gradiente de concentración.

Esta actividad proporciona información sobre el paso de agua y solutos a través de membranas selectivamente
permeables. Puedes aplicar lo que aprendas al estudio de los mecanismos de transporte en células vivas, limitadas
por membrana. Cada una de las membranas de diálisis utilizadas tiene un límite de peso molecular (MWCO, Molecular
weight cutoff) diferente, indicado por el numero situado debajo de ella. Puedes entender el MWCO en términos de
tamaño de poro: cuanto mayor sea el número de MWCO, mayores serán los poros de la membrana. El peso molecular
de un soluto es el número de gramos por mol, donde un mol es el número de Avogadro 6,02 X 10 23 moléculas/mol.
Cuanto mayor sea el peso molecular, mayor será la masa de la molécula. El termino masa molecular se utiliza a veces
en lugar de peso molecular.

EQUIPO UTILIZADO:

En la pantalla aparecerá el siguiente equipamiento: recipientes izquierdo y derecho -utilizados para la difusión
de solutos; membranas de diálisis con diferentes límites de peso molecular (MWCO).

Instrucciones para realizar el experimento

Accede a la página de inicio del programa PhysioEx y selecciona el Ejercicio 1: Mecanismos de transporte y
permeabilidad celular (Cell Transport Mechanisms and Permeability). Pulsa en la Actividad 1: Simulación de la
diálisis (difusión simple) [Simulating Dialysis (Simple Diffusion)] y luego accede a la pestaña Cuestionario previo (Pre-
lab Quiz).

- ¿Cuál es la fuerza motriz para la difusión?

a) ATP
b) La energía cinética de las moléculas en movimiento
c) Las proteínas transportadoras de membrana
d) La membrana de diálisis
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- En la difusión simple, ¿Cómo es el movimiento de las moléculas?

a) De zonas de mayor a menor concentración

b) De zonas de menor a mayor concentración
c) Es independiente de la concentración
d) Contra la gradiente de concentración

- ¿Cuál de las siguientes membranas de diálisis tiene el mayor tamaño de poros?

a) 20 MWCO
b) 50 MWCO
c) 100 MWCO
d) 200 MWCO

- El número de Avogadro es una constante correspondiente a:

a) Moles
b) Moléculas
c) Milímetros
d) Atomos
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Después de responder al cuestionario en línea, pulsa en la pestaña Experimento (Experiment) para comenzar. Aunque
en la pantalla aparecen las instrucciones que debes seguir para realizarlo, también puedes consultarlas en el texto
que sigue. A continuación, se muestra la pantalla de inicio del experimento.

1. Arrastra la membrana MWCO 20 al soporte de membranas situado entre los recipientes.

2. Aumenta la concentración de Na+Cl- que se administrara al recipiente de la izquierda a 9,00 mM, pulsando el botón
(+) situado al lado del indicador Na+Cl-. Pulsa en Dosificar (Dispense) para llenar el recipiente de la izquierda con la
solución de Na+Cl- 9,00 mM.

3. Observa que la concentración de Na+Cl- del recipiente de la izquierda se muestra en el indicador de concentración,
a la izquierda del recipiente. Pulsa en Agua desionizada (Deionized Water) y luego en Dosificar (Dispense) para llenar
el recipiente de la derecha con agua desionizada.

4. Después de iniciar el experimento, la barrera entre los recipientes descenderá, permitiendo que las soluciones de
cada recipiente tengan acceso a la membrana de diálisis que los separa. Podrás determinar la cantidad de soluto que
pasa a través de la membrana observando el indicador de concentración situado junto a cada recipiente. Un nivel por
encima de cero en la concentración de Na+Cl- en el recipiente de la derecha indica que los iones Na+Cl- difunden del
recipiente de la izquierda al de la derecha a través de la membrana de diálisis selectivamente permeable. Observa
que el temporizador esta ajustado en 60 minutos. La simulación comprime el periodo de tiempo de 60 minutos en
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10 segundos de tiempo real. Pulsa en Iniciar (Start) para comenzar el experimento
y observa cualquier movimiento en el indicador de concentración situado junto a cada recipiente.

5. Pulsa en Guardar datos (Record Data) para mostrar tus resultados en la pantalla. Anótalos en la Tabla 1.

PRONOSTICA. Pregunta 1

El peso molecular de la urea es 60,07. ¿Crees que la urea difundirá a través de la membrana MWCO 20?

- ¿Por qué motivo no se generó difusión de Cloruro de Sodio hacia el recipiente de la derecha?

a) El tiempo no fue el suficiente

b) La carga de Sodio evitó que se genere difusión
c) El tamaño de los poros de la membrana fue muy pequeño
d) Se necesita una mayor gradiente de concentración para difundir

6. Pulsa en el botón Limpiar (Flush) que hay debajo de cada recipiente para preparar el siguiente experimento.
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7. Aumenta la concentración de urea que se administrara al recipiente de la
izquierda a 9,00 mM, pulsando el botón (+) situado al lado del indicador de urea. Pulsa en Dosificar (Dispense) para
llenar el recipiente de la izquierda con solución de urea 9,00 mM.

8. Pulsa en Agua desionizada (Deionized Water) y luego en Dosificar (Dispense) para llenar el recipiente de la derecha
con agua desionizada.

9. Pulsa en Iniciar (Start) para comenzar el experimento y observa cualquier movimiento en el indicador de
concentración que se encuentra junto a cada recipiente.

10. Pulsa en Guardar datos (Record Data) para mostrar tus resultados en la pantalla. Anótalos en la Tabla 1.

11. Pulsa en la membrana MWCO 20 del soporte de membranas para devolverla automáticamente al armario de
membranas y luego en el botón Limpiar (Flush) que hay debajo de cada recipiente para preparar el siguiente
experimento.

- La glucosa es un monosacárido compuesto por 6 átomos de carbono. Por otro lado, la albumina es una proteína
compuesta por una cadena de 607 aminoácidos. El peso promedio de 1 aminoácido es de 135 g/mol. La razón por
la cual no se puede generar difusión de estos 2 elementos por una membrana de 20 MWCO es:

a) La glucosa es un carbohidrato complejo, por lo tanto, es muy largo para difundir

b) La glucosa es una proteína, por lo tanto, es muy larga para difundir

c) La albumina es un carbohidrato simple, por lo tanto, es muy larga para difundir

d) Tanto glucosa como albumina son muy largas para difundir

12. Arrastra la membrana MWCO 50 al soporte de membranas localizado entre los recipientes. Aumenta la
concentración de Na+Cl- que se administrara al recipiente de la izquierda a 9,00 mM. Pulsa en Dosificar (Dispense)
para llenar el recipiente de la izquierda con solución de Na+Cl- 9,00 mM.

13. Pulsa en Agua desionizada (Deionized Water) y luego en Dosificar (Dispense) para llenar el recipiente de la
derecha con agua desionizada.

14. Pulsa en Iniciar (Start) para comenzar el experimento y observa cualquier movimiento en el indicador de
concentración situado junto a cada recipiente.

15. Pulsa en Guardar datos (Record Data) para mostrar tus resultados en la pantalla (y anotados en la Tabla 1).

16. Pulsa en el botón Limpiar (Flush) que hay debajo de cada recipiente para preparar el siguiente experimento.

17. Aumenta la concentración de Na + Cl~ que se administrara al recipiente de la izquierda a 18,00 mM. Pulsa en
Dosificar (Dispense) para llenar el recipiente de la izquierda con solución de Na+Cl- 18,00 mM.

18. Pulsa en Agua desionizada (Deionized Water) y luego en Dosificar (Dispense) para llenar el recipiente de la
derecha con agua desionizada.
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19. Pulsa en Iniciar (Start) para comenzar el experimento y observa cualquier
movimiento en el indicador de concentración situado junto a cada recipiente.

20. Pulsa en Guardar datos (Record Data) para mostrar tus resultados en la pantalla. Anótalos en la Tabla 1.

21. Pulsa en la membrana MWCO 50 del soporte de membranas para devolverla automáticamente al armario de
membranas y luego en el botón Limpiar (Flush) que hay debajo de cada recipiente para preparar el siguiente
experimento.

22. Arrastra la membrana MWCO 100 al soporte de membranas localizado entre los recipientes. Aumenta la
concentración de Na+Cl- que se administrara al recipiente de la izquierda a 9,00 mM. Pulsa en Dosificar (Dispense)
para llenar el recipiente de la izquierda con solución de Na+Cl- ~ 9,00 mM.

23. Pulsa en Agua desionizada (Deionized Water) y luego en Dosificar (Dispense) para llenar el recipiente de la
derecha con agua desionizada.

24. Pulsa en Iniciar (Start) para comenzar el experimento y observa cualquier movimiento en el indicador de
concentracion situado junto a cada recipiente.

25. Pulsa en Guardar datos (Record Data) para mostrar tus resultados en la pantalla. Anótalos en la Tabla 1.

26. Pulsa en el botón Limpiar (Flush) que hay debajo de cada recipiente para preparar el siguiente experimento.

27. Aumenta la concentración de urea que se administrara al recipiente de la izquierda a 9,00 mK. Pulsa en Dosificar
(Dispense) para llenar el recipiente de la izquierda con solución de urea 9,00 mM.

28. Pulsa en Agua desionizada (Deionized Water) y luego en Dispensar (Dispense) para llenar el recipiente de la
derecha con agua desionizada.

29. Pulsa en Iniciar (Start) para comenzar el experimento y observa cualquier movimiento en el indicador de
concentración situado junto a cada recipiente.

30. Pulsa en Guardar datos (Record Data) para mostrar tus resultados en la pantalla. Anótalos en la Tabla 1.

- ¿Cómo se comporta la tasa de difusión de la Urea en comparación al Cloruro de Sodio?

a) Es más rápido que NaCl debido a que es una molécula de mayor tamaño

b) Es más lento que NaCl debido a que es una molécula de mayor tamaño

c) Es más rápido que NaCl debido a que es una molécula de menor tamaño

d) Es más lento que NaCl debido a que es una molécula de menor tamaño

31. Pulsa en la membrana MWCO 100 del soporte de membranas para devolverla automáticamente al armario de
membranas y luego pulsa en Limpiar (Flush) debajo de cada recipiente para preparar el siguiente experimento.
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- Recuerda que la glucosa es un monosacárido y la albumina es una proteína compuesta por 607
aminoácidos, además, el peso molecular de cada aminoácido es de 135 g/mol. ¿Cuál de estos 2 elementos
podrá difundir a través de la membrana de 200 MWCO?

a) Ninguno de los 2
b) Los 2 elementos
c) Glucosa únicamente
d) Albumina únicamente

32. Arrastra la membrana MWCO 200 al soporte de membranas localizado entre los recipientes. Aumenta la
concentración de glucosa que se administrara al recipiente de la izquierda a 9,00 mM. Pulsa en Dosificar (Dispense)
para llenar el recipiente de la izquierda con solución de glucosa 9,00 mM.

33. Pulsa en Agua desionizada (Deionized Water) y luego en Dosificar (Dispense) para llenar el recipiente de la
derecha con agua desionizada.

34. Pulsa en Iniciar (Start) para comenzar el experimento y observa cualquier movimiento en el indicador de
concentración situado junto a cada recipiente.

35. Pulsa en Guardar datos (Record Data) para mostrar tus resultados en la pantalla. Anótalos en la Tabla 1.

36. Pulsa en el botón Limpiar (Flush) que hay debajo de cada recipiente para preparar el siguiente experimento.

37. Aumenta la concentración de albumina que se administrara al recipiente de la izquierda a 9,00 mM. Pulsa en
Dosificar (Dispense) para llenar el recipiente de la izquierda con solución de albumina 9,00 mM.

38. Pulsa en Agua desionizada (Deionized Water) y luego en Dosificar (Dispense) para llenar el recipiente de la
derecha con agua desionizada.

39. Pulsa en Iniciar (Start) para comenzar el experimento y observa cualquier movimiento en el indicador de
concentración situado junto a cada recipiente.

40. Pulsa en Guardar datos (Record Data) para mostrar tus resultados en la pantalla. Anótalos en la Tabla 1.
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Una vez finalizado el experimento, pulsa en la pestaña Cuestionario final (Post-lab Quiz) de esta actividad y
responde las preguntas.

¿Qué efecto generó aumentar la concentración de NaCl de 9 mM a 18 mM en el compartimiento de la izquierda?

a) Disminución de la tasa de difusión

b) Aumento de la tasa de difusión
c) No generó cambios

¿Qué diferencia hubo en la tasa de difusión entre el Sodio y Urea?

a) Urea difundió más rápido debido a que es más largo que el Sodio
b) Urea difundió más rápido debido a que es más corto que el Sodio
c) Urea difundió más lento debido a que es más largo que el Sodio
d) Urea difundió más lento debido a que es más corto que el Sodio

¿Qué elemento no difundió en ninguna de las membranas?

a) Glucosa
b) Albumina
c) Urea
d) Ni glucosa ni albumina generaron difusión

Cuando se detuvo la difusión, ¿Qué se logró?

a) Equilibrio
b) Saturación
c) Concentración
d) Maduración
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Preguntas de la actividad
1. ¿Se movió alguno de los solutos a través de la membrana MWCO 20? Razona tu respuesta.

2. ¿Se movió el Na+Cl- a través de la membrana MWCO 50?

3. Describe como afecta el tamaño de una molécula (peso molecular) a su velocidad de difusión.
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4. ¿Qué paso con la velocidad de difusión cuando aumentaste la concentración del soluto Na+Cl-?