Bioquímica Clínica Prof.

José Felipe Velázquez Hernández

· ·
Q. F. B. 701

Vanesa de los Santos Romero

Lucero Guarneros Victoriano

 ESTRUCTURA
Las proteínas y Se encuentran en
TODAS las partes de
Fundamentales
para
su importancia… cada célula FUNCIONES

Esenciales
Moléculas orgánicas más

para la
abundantes en células

vida
Existen muchas clases
de proteínas
La información genética
Especializadas en una en su mayor parte es
FUNCIÓN BIOLOGICA expresada por proteínas.
diferente
 Albúmina
Transporte
Mioglobina
Inmunoglobulinas

Colágeno
Señalización/
Estructura
Regulación

Elastina
Insulina Funciones
Miosina

Movimiento Catálisis
Polimerasa
de DNA
 Proteínas Comprende una mezcla
heterogénea de proteínas
6% - 8% en
mamíferos
plasmáticas simples y conjugadas.

No más
¿Qué son? del 1%

El plasma constituye el 55% del

volumen sanguíneo y está
compuesto el 90% de agua.

Se encuentran Sin tener acceso al

en disolución liquido intersticial
coloidal
 Mantiene

negativa, por ello atraen

• Presión osmótica

Las PP tienen carga

moléculas de agua.
• Membranas semipermeables.
la presión • Limita la función de “arrastrar” agua
oncótica hacia el “otro lado”

Función • Estabilidad pH sanguíneo

tampón • Comportamiento anfótero.

Funciones de
Receptoras de
las proteínas protones

plasmáticas Donan protones

Transporte • Sustancias originalmente insolubles.
de • Medicamentos.
sustancias • Albumina

• Cantidad de proteínas
Viscosidad • Si hay un aumento, se requiere
de la sangre mayor presión sanguínea.
Gracias a su
carga negativa
• Fibrina (precursor)
Coagulación • Complementando función de
y fibrinosis plaquetas.

“Defensa” • Ante cualquier agente infeccioso.

humoral • Inmunoglobulinas.
 50 – 80% Sintetizadas
Albúminas Fibrinógeno
globulinas por hígado

Útil en el diagnóstico y monitoreo De 30 minutos

de muchas enfermedades… a varias horas

Enfermedades Errores en la
Hígado alimentación El tiempo que tardan
metabólicas
en transportarse
Riñón Médula ósea

¿Para que ¿Donde se

se usan? sintetizan?
 Parte de su
Transitorias
metabolismo

No todas son
7%
estrictamente
Otras
“plasmáticas” Fibrinógeno
proteínas

Aunque en el 54% Globulinas 1%

plasma hay más de
200 proteínas
Albumina 37%
α1 globulina
Tipos de α2 globulina
β globulina
proteínas γ globulina

Que llevan a cabo

plasmáticas funciones especificas
en PLASMA
 Nutritivas
 Transporte
Solo a 50
moléculas
 Inmunitaria
 Paciente en
ayuno Muestra

Tubo rojo Características Venosa

Verificar:
Conservación • Turbidez
Para obtención Centrifugación Por 5 min a • Presencia
por 1 día a
temp. de suero 3000 r. p. m. de coagulo
ambiente • Fibrina
 Método de Biuret Se lee bajo
espectrofotometría
540 nm

Colorimetría
Se basa en la Enlaces
Grupo
formación de un peptídicos de
NH4
complejo entre: proteínas

Albúminas Globulinas
Ion Cu+2

Mide el volumen de dos

grupos importantes de Reactivo
proteínas de Biuret
En medio básico

Proteínas Pasa de un
Cambia a Proporcional a la
VIOLETA concentración de
totales color AZUL AZULADO proteínas
 540 nm
Procedimiento

• Luego de la
incubación
Leer la
absorbancia (A)
Pipetear en Mezclar e del Patrón y la
una cubeta incubar por 10 muestra, frente
min. (37°C) al Blanco
de reactivo
Blanco Patrón Muestra
R (mL) 1.0 1.0 1.0

• Transferir el
las cubetas
contenido a
Patrón (μL) - 5 -
Muestra (μL) - - 5

(A)Patrón x 5 (Conc Patrón) = g/dL proteínas en la muestra

(A)Muestra
 Linealidad • Hasta 15.0 g/dl

Sensibilidad • Desde 0.2 g/dl

• Hemolisis: con Hb > 6.5 g/l.

Interferencias • Ictericia: con bilirrubina > 21.0 mg/dl.
• Lipemia: con triglicéridos > 2000.0 mg/dl.

Valores de • Adultos 6.6-8.7 g/dl Prematuros 3.6-6.0 g/dl

referencia • Neonatos 4.6-7.0 g/dl Niños 6.0-8.0 g/dl
Proteínas
totales
  Esteroides anabólicos
Medicamentos que
lo pueden aumentar


Andrógenos
Hormona del crecimiento
Albúmina
los niveles:
 Insulina

Se determinan
Gran parte de la Transporta
los niveles en Más de la mitad de
presión oncótica sustancias menos
un paciente todas las proteínas
depende de ella solubles
para determinar
si hay una
enfermedad

 Enfermedad Se reduce cuando:

hepática Afecciones Concentración de
 Enfermedad hepáticas, 3.4 – 5.0 g/dL
renal glomerulonefritis
 Se lee bajo
Colorimetría espectrofotometría
630 nm Pasa de un
Cambia a
color
VERDE
AMARILLO
Verde de Patrón primario AZULADO
VERDOSO
bromocresol acuoso de
albúmina 5g/dL
Proporcional a la
concentración de
En un medio
albúmina
ligeramente pH reactivo: 4.2
ácido

Blanco Patrón Muestra

(A)Patrón x 5 (Conc Patrón) = g/dL albúmina en la muestra
Reactivo (mL) 1.0 1.0 1.0 (A)Muestra
Patrón (μL) - 5 -
Muestra (μL) - - 5 Leer la
absorbancia (A)
Mezclar e
del Patrón y la
muestra, frente
Metodología
Tomar 5 μl de Pipetear en
muestra una cubeta
incubar por 10
min. (15 – 20°C
al Blanco
de reactivo
directa
 Método de
Globulinas Método de
Biuret
verde
bromocresol

Obtenidas
Proteínas totales - Albúmina = Globulinas
mediante la
prueba de
razón 5,95 g/dL - 2,99 g/dL = 2.95 g/dL globulinas

Ejemplo…

• Proteínas totales: 5.95 g/dL

• Albúmina: 2.99 g/dL

Mediante esta prueba

Se debe recurrir a
no es posible identificar
una electroforesis
el tipo de globulina
Relación A/G Índice de Hoffman

Concentración Antes de la Se determina si se

La relación A/G fue
de albúmina electroforesis o necesita realizar una
el mejor indicador
inmunoforesis electroforesis

Para ver la relación entre los

componentes de las proteínas
Concentración plasmáticas
de globulinas Ejemplo…

Albúmina/Globulina
2,99 g/dL =1.01
2,95 g/dL

Índice de Hoffman 1.01 Proporción A/G : 1.0 – 2.0

 Se puede verificar… Si hay un aumento

• Hepatopatías graves
En la síntesis • Cirrosis con disminución de albuminas Deshidratación
y aumento de globulinas grave

• Hemorragias
Causas endógenas • Diarrea masiva
Si hay disminución

• Enfermedad nefrótica
Mieloma múltiple

• Quemaduras
Causas exógenas • Hemorragias traumáticas
Displasia por
hiperproducción
Por • Hipertiroidismo proteica
hipercatabolismo • Neoplasia
Fraccionamiento electroforético de las
proteínas plasmáticas

Se basa en separar
Función de su
Gran diversidad de las proteínas por
tamaño y carga
proteínas medio de un campo
eléctrica
eléctrico.

Grupo de proteínas
Proteinograma
en forma de bandas
Procedimiento

1. Llenar una cubeta

con tampón/buffer
2. Introducir las tiras 3. Colocar las tiras
en el tampón en el puente
 5. Preparar la cubeta de
electroforesis

4. Preparar el
6. Aplicar la muestra en
dispensador con la
un extremo de la tira
muestra y agua destilada
 9. Pasar las tiras a
7. Cerrar la cubeta y aplicar decoloración con ácido
200v durante 30min citrico 5min

8. Introducir las tiras en el

colorante rojo ponceau
durante 5 min
 13.Ponee la tira en una
lámina Mylar y seque el
10. Transparentado
exceso de líquido con una
durante 5min varilla. Llevar a la estufa a 80
ºC durante 4 - 6 minutos.

11. Colocar las tiras

sobre una base

14. Lectura
 Fraccionamiento electroforético de
las proteínas plasmáticas
Separadas Tincion Fracciones
Fijarse Estudios proteicas Talasemias,
Diagnostico
no anemias, etc.
Calor
especificos
Quimica
Fraccionami
Hemoglobinas ento

Separa diferentes elementos que

componen una mezcla compleja
en función de la carga eléctrica de Diferenciaci Hemoglobina
los mismo.
on de fetal
 Valoración del Proteína mas abundante
>50% condiciones normales
proteinograma
Inmunoglobulinas
• IgG Albumina • α1-antitripsina %
• IgA • α1-glucoproteína
• IgM • Transcortina
• α1-lipoproteína
γ α1 • α-fetoproteína
globulinas globulinas
 Inflamatorios agudos
 Mayor interés deficit a.

 anemias
hemolíticas Transferrin
Hemopexina β α2 α2-macroglobulina
 reacciones ß-lipoproteína Haptoglobina
globulinas globulinas
agudas c3 nativo ceruloplasmina
Valoración del proteinograma

Geles de poliacrilamida se
utiliza tinción con plata, tinción de
Coomassie o tinción fluorescente

Una tinción sensible y barata es la

denominada "Blue Silver"
o Coomassie G250.

Interpretacion
Fotodensitometro
Indicaciones al paciente

Ayuno 12hrs Cualquier La orina puede La muestra de

Punción venosa medicamento ser una muestra LCR se obtiene
puede afectar aleatoria o una mediante una
los resultados recolección de punción lumbar.
24 horas.
Parámetros
Los rangos de los valores normales son:

Proteína total: 6.4 a 8.3 (g/dL) o 64 a 83 (g/L)

Albúmina: 3.5 a 5.0 g/dL o 35 a 50 g/L

Alfa-1 globulina: 0.1 a 0.3 g/dL o 1 a 3 g/L

Alfa-2 globulina: 0.6 a 1.0 g/dL o 6 a 10 g/L

Beta globulina: 0.7 a 1.2 g/dL o 7 a 12 g/L

Gammaglobulina: 0.7 a 1.6 g/dL o 7 a 16 g/L

Resultados anormales
Alfa1- Alfa2- Beta- Gamma-
Albumina
globulinas globulinas globulinas globulinas

Enfermedades Enf. Hepáticas Trastornos

Desnutrición Desnutrición
hepáticas graves graves genéticos

Estados
inflamatorios Estados de Artritis
Embarazo Cirrosis
agudos o hemólisis reumatoide
crónicos

Enfermedad Enfermedades Anemias por Enf. Crónicos del

renal, hepática renales falta de hierro hígado

Estados de
deshidratación
Proteinograma y su
relación clínica Valores normales
Mieloma múltiple
Síndrome nefrótico
Cirrosis hepática
Infección aguda
Gammapatía monoclonal