INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL
INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA
MOLECULAR

MANEJO Y USO DEL EQUIPO E INSTRUMENTACIÓN DE LABORATORIO

(PARTICULARMENTE, MICROPIPETAS DE DIVERSOS VOLÚMENES)

Profesores:
 GUTIÉRREZ HERNÁNDEZ GERMÁN FERNANDO
 FLORES GÓMEZ ESTELA

Autores:
García Mendoza Erika Isabella
Mendoza Patiño Dulce María
Solache López Humberto Sared
Nájera Hernández Mariana Monserrath
Mariana

Semestre: 19/2
Grupo: 4BV1
Ubicación: Planta Piloto, Lab. De Biotecnología Molecular
Horario: Martes y Jueves 07:00-10:00

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I. ÍNDICE

3
INTRODUCCIÓN

OBJETIVOS 4

REVISIÓN DE LITERATURA 4

MATERIALES Y MÉTODOS 5

RESULTADOS Y DISCUSIÓN 7

CONCLUSIONES 8

BIBLIOGRAFÍA 8

ANEXOS 9

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INTRODUCCIÓN

En cualquier laboratorio, es de gran importancia tener conocimientos acerca del

manejo de la instrumentación y los equipos que se encuentran en el mismo.
Dependiendo del laboratorio en el que se estén ejerciendo labores de estudio e
investigación se hacen uso de diferentes y muy variados equipos, teniendo en
cuenta que unos serán más precisos y exactos que otros.

La utilización de estos, permiten que se lleve a cabo prácticas donde la exactitud y

la precisión son realmente necesarios para obtener resultados que hagan válida las
experimentaciones realizadas.

Pero ¿Qué es la precisión y la exactitud?

¿son estos lo mismo?, para entender esto, se
puede observar una representación gráfica
en la fig. 1, donde se destacan estos términos
y se pueden diferenciar.

Mientras la exactitud está definida como la

capacidad de un instrumento a acercarse al
valor real que este mide, la precisión es la
capacidad del instrumento a lanzar
magnitudes cercanas entre sí.

En los laboratorios, sobre todo, en los que

trabajan con cantidades muy pequeñas
Figura 1. Representación de los
(micro), como en el Laboratorio de
conceptos de exactitud y precisión
Biotecnología Molecular, estos dos
con el ejemplo del tiro al blanco.
conceptos mencionados siempre son
buscados, puesto que la mayoría de las
experimentaciones que se realizan, se necesitan medidas específicas para que se
puedan cultivar microorganismos o extraer de ellos ciertas sustancias y mantenerlas
estables.

El material de laboratorio debe ser previamente calibrado, posteriormente es

necesario saber cómo se maneja correctamente (pues es bastante delicado y debe
ser cuidado para que mantenga su precisión y exactitud con paso del tiempo).

Es por lo que se llevó a cabo esta práctica, para conocer el manejo de las
micropipetas (de varios volúmenes), para mantener la precisión y exactitud en las
experimentaciones en este laboratorio.

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OBJETIVO GENERAL
Conocer, adecuadamente, el manejo y uso del equipo e instrumentación del
Laboratorio de Biotecnología Molecular, principalmente, micropipetas de varios
volúmenes.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Investigar y conocer los tipos, partes y funcionamiento de las micropipetas
que se utilizaron en este laboratorio.
 Adquirir la destreza para manipular el equipo e instrumentación varia del
Laboratorio de Biotecnología Molecular.
 Calibrar adecuadamente las micropipetas de varios volúmenes según la
metodología propuesta.
 Determinar si la calibración de las micropipetas fue eficiente (exactos y
precisos), basándose en el CV (coeficiente de variabilidad) y el %E
(porcentaje de exactitud o error).

REVISIÓN DE LITERATURA

Las micropipetas.
Uno de los instrumentos de medidas pequeñas
más usados y que se debe conocer son las
micropipetas (fig. 2); estás permiten obtener
medidas de volúmenes en microlitros de ciertas
muestras.

Figura 2. Partes de una

micropipeta.

Las micropipetas vierten volúmenes desde 1 a 1000 𝜇L. El líquido se aloja en una
punta de plástico desechable. Las puntas de propileno son estables a la mayoría de
las diluciones acuosas y de muchos disolventes orgánicos, excepto el cloroformo.
Las puntas no son resistentes a los ácidos nítricos o sulfuros concentrados.

Para usar una micropipeta, primero hay que acoplar una nueva punta a la caña de
la pipeta. Las puntas se guardan en una caja o en el dosificador, para que no se
contaminen al tocarlas con os dedos.

El volumen deseado se ajusta con el botón que se encuentra en el extremo de la

pipeta. Es una buena práctica acondicionar una punta nueva, tomando 2 o 3
porciones de reactivo y desecharlas antes de tomar la definitiva.
Las puntas se pueden tirar o lavar bien con un frasco lavador y volverse a usar.

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 MATERIALES Y MÉTODOS

Materiales
 Juego de micropipetas de varios volúmenes (Nichiryo Le p10 y p200,
Accupet Pro p100 y Fisherbrand p1000) NOTA: en este caso, la p200
presentó goteo y la p10 no pudo ser calibrada por falta de tiempo.
 Muestra de agua
 Muestra de glicerol
 Muestra de alcohol
 3 vasos de precipitados de 20, 30 y 40 mL.
 1 caja Petri
 1 balanza analítica

Metodología
Llenado de micropipetas con las muestras
1. Se colocó la punta correspondiente a la micropipeta que se estuvo
manejando (azul, amarilla, blanca).
2. Se verificó en la ventana de la micropipeta si se seleccionó el volumen
deseado. Sino fue así, se debe colocar magnitud que se quiere de la muestra.
3. Se posicionó pulgar en el embolo.
4. Se bajó el embolo hasta el primer tope de la micropipeta.
5. Se colocó la punta de la micropipeta en el interior de la muestra (agua,
alcohol, glicerol), que fue previamente colocada en uno de los vasos de
precipitado, 1mm al interior de la muestra.
6. Lentamente se subió el embolo. NOTA: en el caso de la muestra del
glicerol, se subió con más lentitud el embolo, y una vez que este se
detuvo, se esperó unos segundos, pues las sustancias más densas
tardan más en subir por completo. Si este paso no se seguía, era posible
que se introdujera pequeñas burbujas a la micropipeta que dañarán la
medición de la muestra.
7. No soltar el embolo drásticamente, pues se podía salpicar la muestra.
8. Se retiró la punta de la micropipeta de la muestra.

Expulsión de la muestra de las micropipetas

1. Se posicionó el pulgar en embolo.
2. Se introdujo la micropipeta, ligeramente inclinada, al recipiente donde se
colocó la muestra.
3. Se tocó pared del recipiente.
4. Se bajó, lentamente, el embolo al primer tope.
5. Luego de que bajó la mayoría de la muestra, se continuó al segundo tope de
la micropipeta para asegurarse de que bajó la muestra en su totalidad.
NOTA: por recomendación del profesor/laboratorista, también se podía
introducir la punta de la micropipeta al recipiente receptor en el líquido que
este contenía previamente. Al bajar al segundo tope, se podrían presenciar

5
burbujas, esto significaría que la expulsión de la muestra fue total y fue un
éxito.
6. Sin soltar el embolo de la posición del segundo tope, se retiró la micropipeta
(punta) del recipiente receptor de la muestra.
7. Lentamente, se soltó el embolo (para evitar que se descalibrará la
micropipeta).
8. Se Retiró o desechó la punta utilizada (dependiendo de la muestra medida).

Experimentación-calibración
1. Se prendió balanza analítica 20min antes de ser utilizada, y se verificó que
esta esté calibrada.
2. Se coloco en la ventana de la micropipeta que se calibró, la capacidad máxima
de la misma.
3. Se colocó en la balanza analítica una tapa de caja Petri y se taró.
4. Se tomó muestra de agua con la micropipeta.
5. Se colocó y pesó muestra en la caja Petri.
6. Se realizó este proceso 3 veces (triplicado) con las pipetas de los diferentes
volúmenes y se obtuvo los pesos respectivos de las muestras tomadas.
7. Se tomaron los datos.
8. Se calculó el CV y %E con las fórmulas propuestas en el protocolo.

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RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Tabla de datos de la calibración de las micropipetas p100 y p1000

Volumen Marca %E %CV Conclusión

P100 Accupet pro 0.72 0.9209 Calibrada
3
P1000 Fisherbrand 4.62 0.6219 Calibrada

Memoria de cálculo: para la micropipeta p1000

a) Valor medio:
∑𝑥𝑖 0.9455 𝑔 + 0.9454 𝑔 + 0.9613 𝑔
𝑥̅ = = = 0.95073 𝑔
𝑛 3
𝑚𝐿
b) Volumen medio: 𝑧 = 1.0032
𝑔
𝑚𝐿
𝑣 = 𝑥̅ ⋅ 𝑧 = (0.95073 𝑔) (1.0032 ) = 0.95377 𝑚𝐿
𝑔
c) Exactitud:
0⁄ 𝐸 = 𝑣 − 𝑣𝑛 𝑥100 = 0.95377 − 1 ∗ 100 = 4.623%
0 𝑣𝑛 1
d) Desviación estándar:
∑(𝑥ⅈ − 𝑥̅ )2
𝑠 =𝑧⋅√ =
𝑛−1

𝑚𝐿 (0.9455 − 0.95073 )2 + (0.9454 − 0.95073 )2 + (0.9613 − 0.95073 )2

1.0032 ⋅√
𝑔 2
−3
= 9.15114𝑥10 𝑚𝐿 = 9.151 𝜇𝐿
100
e) Coeficiente de variación 𝐶𝑉 = 9.151 𝜇𝐿 ∗ 1000𝜇𝐿 = 0.9151 %

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CONCLUSIONES

BIBLIOGRAFÍA
 Harris, D. (2007) “Análisis químico cuantitativo” 3ª edición. Editorial
Revertè. España, p.33-34.

ANEXOS

Tabla 1. Resultados de todas las micropipetas disponibles en el laboratorio de

biotecnología molecular

Equipo Volumen Marca %E %CV Conclusión

P10 Nichiryo 72.0 17.741 No calibrada
1 P100 Accumax 16.6 15.266 No calibrada
P200 Nichiryo 2.3 0.992 No calibrada

8
 P10 Nichiryo 6.41 4.06 No calibrada
P100 Nichiryo 31 1.328 No calibrada
2
P200 Fisherbrand 1.45 1.187 No calibrada
P1000 Fisherbrand 0.63 0.1829 No calibrada
P100 Accupet pro 0.72 0.9209 Calibrada
3
P1000 Fisherbrand 4.62 0.6219 Calibrada
P10 Nichiryo 3,043 1.5801 No calibrada
P100 Accupet pro 1.1024 0.8817 No calibrada
4 Solo cumple
P200 Nichiryo 1.0856 0.0572
CV
P1000 Accupet pro 3.4093 0.3879 No calibrada
P10 Nichiryo 6.000 1.823 No calibrada
P20 Nichiryo 1.000 1.741 Calibrada
5 P200 Accumax 5.800 0.2423 No calibrada
Transferpette
P1000 0.010 0.2007 Calibrada
brand
P10 Accumax 0.3488 0.5812 Calibrada
P50 Finnipipette 1.5238 1.2959 No calibrada
6
P200 Accumax 5.6490 0.1594 No calibrada
P1000 Sciencemed 0.9039 0.2567 No calibrada
P1000 Buero 0.48 0.00071279 Calibrada
7 P200 Accumax 0.2525 0.0284 Calibrada
P100 Accumax 0.023 24.43 No calibrada