INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA

“DR. GUILLERMO CARVAJAL SANDOVAL”

LABORATORIO DE MÉTODOS DE ANÁLISIS

PROFESOR:ROSAS SANDOVAL GUILLERMINA

ALUMNO: ANDRADE CELIS HOLDAIR

4IM2

SECCIÓN 1

PRÁCTICA: ANÁLISIS ESPECTROFOTOMÉTRICO DE UN

SISTEMA MÚLTIPLE

MARTES 17 DE ABRIL DE 2018

Objetivos.
El alumno:

a) Comprobará la ley de aditividad de un sistema múltiple.

b) Determinará constantes fotométricas y las aplicará en el cálculo de la
concentración de los componentes de un sistema.

Resultados.
Determinación de las longitudes de onda de trabajo ( λ1 y λ2)

Tabla 1. Valores de absorbancia para construir los espectros de absorción deK2Cr2O7 y

KMnO4

Longitud de A A
onda (nm) K2Cr2O7 KMnO4
340 3 0,468
350 3 0,413
360 3 0,35
370 2,06 0,267
380 1,757 0,214
390 1,242 0,152
400 0,823 0,151
410 0,602 0,142
420 0,558 0,112
430 0,582 0,138
440 0,599 0,128
450 0,573 0,15
460 0,519 0,159
470 0,439 0,177
480 0,345 0,194
490 0,233 0,297
500 0,179 0,255
510 0,093 0,258
520 0,075 0,26
530 0,044 0,264
540 0,025 0,266
550 0,016 0,268
560 0,013 0,235
570 0,011 0,229
580 0,01 0,189
590 -0,02 0,126
600 -0,021 0,07
 Grafica 1. Espectros de Absorción de K2Cr2O7 y KMnO4

3.5
3
2.5
Absorbancia

2
1.5 A K2Cr2O7

1 A KMnO4

0.5
0
0 200 400 600 800
-0.5
Longitud de onda (nm)

Tabla 2. Valores de λmax para K2Cr2O7 y KMnO4

Compuesto λmax
K2Cr2O7 470 nm
(λ1)
KMnO4
500 nm
(λ2)
¿Por qué se eligen estas longitudes de onda y no otras?
R= Se tomaron estas longitudes de onda debido a que son en las cuales cada
compuesto presenta su máxima absorción y la absorbancia del otro compuesto
es la mínima, de tal forma que no interfieren en el análisis de los mismos.

Compuesto Dilución Concentración A λ1 A λ2

molar (Cm)
1:7 2.28x10-4 0.068 0.025
1:6 2.66x10-4 0.074 0.029
1:5 3.2x10-4 0.093 0.037
K2Cr2O7 1:4 4.0x10-4 0.114 0.044
1:3 5.3x10-4 0.151 0.059
1:2 8.0x10-4 0.237 0.095
Sin diluir 0.0016 0.439 0.179
1:7 5.71x10-5 0.040 0.061
1:6 6.66x10-5 0.021 0.065
1:5 8.0x10-5 0.027 0.077
KMnO4 1:4 1.0x10-4 0.036 0.103
1:3 1.3x10-4 0.049 0.139
1:2 2.0x10-4 0.074 0.213
Sin diluir 0.0004 0.177 0.255
 Grafica 2. Curva de Calibración de K2Cr2O7 0.0016M

0.5
0.45 y = 280.02x
R² = 0.9973
0.4
0.35
Absorbancia

0.3
A λ1
0.25
A λ2
0.2
Linear (A λ1)
0.15
0.1 y = 112.91x Linear (A λ2)
R² = 0.9984
0.05
0
0.00E+00 5.00E-04 1.00E-03 1.50E-03 2.00E-03
Concentracion Molar (Cm)

Grafica 3. Curva de Calibración de KMnO4 0.0004 M

0.3
y = 589.92x + 0.0433
0.25 R² = 0.8755

0.2
Absorbancia

A λ1
0.15
y = 267.81x + 0.0125 A λ2
0.1 R² = 0.9452 Linear (A λ1)
Linear (A λ2)
0.05

0
0.00E+00 1.00E-04 2.00E-04 3.00E-04 4.00E-04 5.00E-04
Concentracion Molar (Cm)

Al obtener las ecuaciones de la recta a cada una de las longitudes de las

curvas de calibración anteriores y de acuerdo a la ley de Bouger and Beer y la
ley de la aditividad, donde la pendiente corresponde al valor de las
absortividades molares, se completó la siguiente tabla.

Tabla 3. Valores de am para K2Cr2O7 y KMnO4

Absortividad Sustancia K2Cr2O7 KMnO4

am a λ1 280.02 267.81
am a λ2 112.91 589.92
 Tabla 4. Valores de Cm y absorbancia en las mezclas de K2Cr2O7 y KMnO4

Mezcla Cm Cm A observada
No. K2Cr2O7 KMnO4 λ1 λ2
1 8x10-4 4x10-4 0.216 0.089
2 4x10-4 1x10-4 0.192 0.136
3 1.6x10-4 2x10-4 0.121 0.236

Las concentraciones anteriores se obtuvieron de la siguiente manera:

C1 x V1 = C2 x V2  C2= (C1 x V1) / V2
Para K2Cr2O7:

1) C2= (0.0016 M x 5.0ml ) / 10ml = 8x10-4

2) C2= (0.0016 M x 2.5ml ) / 10ml = 4x10-4
3) C2= (0.0016 M x 1.0ml ) / 10ml = 1.6x10-4

Para KMnO4:

1) C2= (0.0004 M x 1.0ml ) / 10ml = 4x10-4

2) C2= (0.0004 M x 2.5ml ) / 10ml = 1x10-4
3) C2= (0.0004 M x5.0ml ) / 10ml = 2x10-4

Tabla 5. Valores de absorbancia observados y calculados de absorbancia de las

mezclas de K2Cr2O7 y KMnO4

Mezcla A observada A calculada

No. λ1 λ2 λ1 λ2
1 0.216 0.089 0.234 0.113
2 0.192 0.136 0.138 0.104
3 0.121 0.236 0.098 0.135
Cálculos de A calculada:
 Mezcla 1:
A λ1= AK2Cr2O7 + AKMnO4
AK2Cr2O7= abc = (280.02 1/M cm) (1 cm) (8x10-4 M) = 0.224
AKMnO4 = abc = (267.81 1/M cm) (1 cm) (4x10-5 M) = 0.0107
A λ1 = 0.224 + 0.0107 = 0.2347

A λ2= AK2Cr2O7 + AKMnO4

AK2Cr2O7= abc = (112.91 1/M cm) (1 cm) (8x10-4 M) = 0.0903
AKMnO4 = abc = (589.92 1/M cm) (1 cm) (4x10-5 M) = 0.0235
A λ2 = 0.0903 + 0.0235 = 0.1138

 Mezcla 2:
A λ1= AK2Cr2O7 + AKMnO4
AK2Cr2O7= abc = (280.02 1/M cm) (1 cm) (4x10-4 M) = 0.1120
AKMnO4 = abc = (267.81 1/M cm) (1 cm) (1x10-4 M) = 0.0267
A λ1 = 0.1120 + 0.0267 = 0.1387
A λ2= AK2Cr2O7 + AKMnO4
AK2Cr2O7= abc = (112.91 1/M cm) (1 cm) (4x10-4 M) = 0.0451
AKMnO4 = abc = (589.92 1/M cm) (1 cm) (1x10-4 M) = 0.0589
A λ2 = 0.0451 + 0.0589 = 0.104

 Mezcla 3:

A λ1= AK2Cr2O7 + AKMnO4

AK2Cr2O7= abc = (280.02 1/M cm) (1 cm) (1.6x10-4 M) = 0.0448
AKMnO4 = abc = (267.81 1/M cm) (1 cm) (2x10-4 M) = 0.0535
A λ1 = 0.0448 + 0.0535 = 0.098

A λ2= AK2Cr2O7 + AKMnO4

AK2Cr2O7= abc = (112.91 1/M cm) (1 cm) (1.6x10-4 M) = 0.0180
AKMnO4 = abc = (589.92 1/M cm) (1 cm) (2x10-4 M) = 0.1179
A λ2 = 0.0180 + 0.1179 = 0.1359
 Tabla 6. Valores de R y R2 a λ1 y λ2

λ1 λ2

R2

Determinación de la concentración de K2Cr2O7 y KMnO4 en la solución

problema.

Problema: #2

A λ1= 0.268
A λ2= 0.297

A λ1= (aλ1 x b x CK2Cr2O7) + (aλ1 x b x C KMnO4)

A λ2 = (aλ2 x b x CK2Cr2O7) + (aλ2 x b x C KMnO4)

Al ser el valor de b igual a 1 cm:

0.268= (280.02 x CK2Cr2O7) + (267.81 x C KMnO4)

0.297= (112.91 x CK2Cr2O7) + (589.92 x C KMnO4)

Al resolver el sistema de ecuaciones con dos incógnitas obtenemos:

X= CK2Cr2O7 = 5.8212 x10-4

Y= C KMnO4 = 3.9203 x10-4
Discusión.

Un sistema multiple ocurre cuando se prepara una solución de dos sustancias

coloridas, y sus componentes no interactúan entre sí de ese modo la presencia
de uno no afecta ninguna de las propiedades de absorción del otro. En tal caso
la absorción de luz de estos componentes es aditiva, es decir, que la
absorbancia total de la solución es la suma de las absorbancias individuales
que tendrían ambas sustancias si estuvieran en soluciones separadas y fuesen
medidas bajo las mismas condiciones. Cuando esto se cumple es posible
realizar un análisis espectrofotométrico simultáneo para ambos componentes.
Para descartar posibles interacciones es necesario previamente investigar, los
espectros de absorción de cada una de las sustancias en soluciones separadas
y el espectro de una solución mezcla y comprobar la condición de aditividad. Si
del análisis de los espectros de los componentes individuales encontráramos
una longitud de onda en donde uno de los componentes absorbe y mientras
que el otro no, y otra en que ocurriera lo contrario para el otro componente,
entonces estas dos longitudes de onda pueden ser usadas separadamente
para analizar cada uno de los componentes de la mezcla. En tal caso el
análisis de cada uno de ellos sería como si el otro componente no existiera y se
estuviera analizando por separado.

Para la determinación de las longitudes de onda de trabajo, se realizaron los

espectros de absorción para K2Cr2O7 y KMnO4, al observar el grafico obtenido,
no fue completamente el deseado, debido a que el espectrofotómetro utilizado
presentaba constantes fallos en las lecturas, a pesar de ello con ayuda de la
profesora pudimos determinar las longitudes máximas de ambos compuestos,
para poder hacer las siguientes determinaciones que fueron a 470 y 500 nm
respectivamente, debido a que son en las cuales cada compuesto presenta su
máxima absorción y la absorbancia del otro compuesto es la mínima, de tal
forma que no interfieren en el análisis. Posteriormente se construyeron las
curvas de calibración de K2Cr2O7 y KMnO4 a las longitudes de onda antes
seleccionadas para poder determinar las absortividades molares, las cuales
según la ley general de la fotometría y la ley de la aditividad son la pendiente
de la curva de calibración, para esto, utilizamos otro espectrofotómetro
diferente al que usamos para los espectros de absorción, las lecturas obtenidas
no variaron tanto como con el equipo anterior.

Lo siguiente que realizamos fue determinar las concentraciones y la

absorbancia en las mezclas de K2Cr2O7 y KMnO4, posteriormente comparamos
los valores de absorbancia obtenidos con los calculados mediante una grafica,
para que de esta forma al comparar los valores de R y R2 …

Para finalizar, se encontró la concentración de K2Cr2O7 y KMnO4 presente en la

muestra numero dos, proporcionada por la profesora, donde por medio de un
sistema de ecuaciones siguiendo la ley de la aditividad concluimos que tenia
mayor concentración de K2Cr2O7 que de KMnO4