Acção de Formação

O admirável mundo dos Micróbios: pequenos no

tamanho, grandiosos na acção

Propostas de trabalhos laboratoriais/computacionais

apresentados pelos Formandos.
 Acção de Formação

O admirável mundo dos Micróbios: pequenos

no tamanho, grandiosos na acção!
Mª Isabel M. Teixeira isabel.moura@esjoseafonso.com
Cristina Correia cristina.correia@esjoseafonso.com
Salomé Castanhas salome.castanhas@cad.edu.pt
22 Setembro 2018
Proposta de trabalho 1 - actividade experimental de
microbiologia
Objetivo: estudo da microdiversidade numa gota de água/amostra
de lama do Sapal
 Proposta de trabalho 2 - actividade experimental de
microbiologia
Objetivo: estudo do papel dos microrganismos do solo na recuperação
de solos degradados
 Proposta de trabalho 3 - actividade experimental de
microbiologia
Objetivo: estudo da microdiversidade em diferentes marcas de iogurte,
comparativamente ao Kefir
O admirável mundo
dos micróbios
Céu Pinto
Cristela Romão
Isa Alves

Dia Internacional do microrganismo

 Metodologia do Trabalho de Projeto

População:
Alunos do curso Científico-Humanístico de Ciências e
Tecnologias
Disciplina de Biologia – 12.º ANO

Módulo 3 — RECURSOS NATURAIS E SUSTENTABILIDADE

Como melhorar a qualidade de vida dos seres humanos?

Como resolver problemas de alimentação da população humana?

Que soluções para os efeitos da atividade humana sobre o ambiente?

 Isolamento e caracterização de bactérias
autóctones de nódulos de Pisum sativum

Fig. 2: Bactérias não-simbióticas.

(cianobactérias)

Fig.1: Leguminosa (A) nas raízes da qual é

possível encontrar nódulos (B) provocados por
bactérias.

Fig. 3:
Bactéria - Rhizobium leguminosarium
Formação de nódulos nas raízes de leguminosas
 Fases de desenvolvimento do projeto

I. Introdução
II. Breve reflexão teórica
. O que são leguminosas
. A cultura da ervilheira
. Adaptações nutricionais
. Nódulos de leguminosas
.Bactérias fixadoras de azoto:
- Simbióticas – Bactérias de género Rhizobium
- Não simbióticas
. Fixação biológica do azoto

III Prática laboratorial I

. “Encontrar e contar micróbios”

IV Prática computacional
.Genomas bacterianos, genes e proteínas: análise
bioinformática

V Prática Laboratorial II
“Do DNA da bactéria à proteína purificada”

VI Conclusão
Do DNA à proteína...
 Investigar o uso de detergentes
enzimáticos (biológicos)
Os principais tipos de enzimas
utilizadas na indústria de detergentes
incluem:
a)amilases, degradam amido e outros
hidratos de carbono;
b) proteases, degradam ligaçõespeptídicas
(proteínas);
c) lipases, degradam lípidos;
d)celulases, degradam celulose.

Vantagem da formulação de detergentes que contenha enzimas:

a substituição de produtos cáusticos, ácidos e solventes tóxicos, que agridem o meio
ambiente e que provocam o desgaste de materiais e de instrumentos.
O uso diversificado das enzimas deve-se à sua característica de atuar como
biocatalisadores especializados, removendo mais eficazmente as manchas.
 Protocolo experimental
■ Partir um ovo num copo e desfazer com um garfo ou vareta de vidro
■ Cortar 4 pedaços de tecido branco10 cm × 10 cm, espalhar o ovo em cada um e
deixar secar
■ Preparar 4 copos de 250 cm3
A 100 cm3 água morna, sem detergente.
B 5 cm3 (1colher de chá) de detergente de roupa não biológico dissolvido em 100
cm3 de água morna.
C 5 cm3 (1 colher de chá) de detergente de roupa biológico (ex: OMO) dissolvido
em 100 cm3 de água morna.
D 5 cm3 (1 colher de chá) de detergente de roupa biológico dissolvido em 100 cm3
de água e ferver durante 5 min, deixar arrefecer até ficar morno.
■ Colocar um pedaço de tecido manchado com ovo em cada copo e deixar durante
30 minutos.
■ Retirar os pedaços de tecido e comparar a eficácia de cada processo de lavagem.
Resultados e discussão
O pedaço de tecido do copo C está mais eficazmente limpo, seguido
do B e do D. O tecido em A está praticamente inalterado.

As enzimas do detergente biológico degradam proteínas e lípidos

em aminoácidos, ácidos gordos e glicerol. Estas são pequenas
moléculas solúveis que podem escapar do tecido e dissolver na água.
Detergentes não biológicos são menos eficazes porque não contêm
enzimas.
Detergentes em pó biológicos fervidos são menos eficazes porque
as ezimas foram desnaturadas.
O copo A serviu de controlo, sem detergente ou enzimas. Mergulhar
o tecido apenas em água morna não permitiu remover as manchas.
 Centro de Formação de Professores da Ordem dos Biólogos
Ação de Formação
O admirável mundo dos Micróbios: pequenos no tamanho, grandiosos na ação

Disciplina – Biologia – 12.º ano

Conteúdos: Unidade 4 – Produção de alimentos e sustentabilidade
4.1. – Microrganismos e indústria alimentar.

Realização da atividade laboratorial:

Parte A – A influência da Temperatura na produção de iogurte

Cristina Maria Águas Carrajola e Maria Manuela de Fátima Fernandes de Sá Lourenço

 Centro de Formação de Professores da Ordem dos Biólogos
Ação de Formação
O admirável mundo dos Micróbios: pequenos no tamanho, grandiosos na ação

Disciplina – Biologia – 12.º ano

Conteúdos: Unidade 4 – Produção de alimentos e sustentabilidade
4.1. – Microrganismos e indústria alimentar.

Realização da atividade :
Parte B – Análise bioinformática do genoma das bactérias
envolvidas na produção de iogurte: Lactobacillus bulgaricus e
Streptococcus thermophilus

Cristina Maria Águas Carrajola e Maria Manuela de Fátima Fernandes de Sá Lourenço

Parte A - A influência da Temperatura na produção de iogurte
Material
Banho-Maria
Estufa
Frigorífico
Termómetro
3 gobelés de 200 cm³
1 vidro de relógio
1 espátula
Folha de alumínio
Papel indicador ou medidor de pH
Iogurte natural
Leite gordo pasteurizado
Métodos
•Coloque em cada um dos gobelés (A, B e C), de 200 cm³, cerca de 100 cm³ de leite.
•Cubra os gobelés com folha de alumínio.
•Aqueça o leite, em banho-maria, até cerca de 45°C.
•Com o auxílio do papel indicador ou medidor de pH, determine o pH do leite.
•A cada gobelé, adicione cerca de 5 g a 6 g de iogurte natural.
•Misture o iogurte com leite, evitando a formação de espuma.
•Coloque os três gobelés a temperaturas diferentes:
A: Estufa a 40°C
B: Frigorífico
C: Estufa a 60°C
•Determine o pH do conteúdo de cada gobelé em intervalos de tempo regulares.
•Apresente os valores obtidos numa tabela de resultados.
Nota: O iogurte estará pronto quando o pH atingir o valor 4, o que poderá demorar um período de
tempo superior a 3 horas. De seguida o produto deverá arrefecer e posteriormente deve ser
refrigerado para garantir a sua textura.
Discussão:
•Qual a função do iogurte natural adicionado?
•Qual a importância da temperatura neste processo?
•A que se deve o abaixamento do pH durante a produção de iogurte?
Parte B – Análise bioinformática do genoma das bactérias envolvidas na produção de iogurte: Lactobacillus bulgaricus e
Streptococcus thermophilus

Material
Computador e acesso à internet.
Métodos:
•Insere no browser o endereço http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Genomes/
•Na coluna “Custom resources” seleciona o botão “Microbes”. De seguida, na coluna da esquerda seleciona o botão “Browse microbial
genomes”.
•Na janela disponível escreve nome da bactéria Lactobacillus bulgaricus e de seguida carrega no botão “Search”. Tens deste modo
acesso à listagem de projetos de sequenciação de estirpes pertencentes à espécie em causa.
•Seleciona o primeiro organismo da lista.
•A página apresenta agora um sumário da referida estirpe (sua biologia, características, etc.) bem como uma análise global da
sequenciação do seu genoma [tamanho do cromossoma em mega bases (Mb), conteúdo GC (%), números de genes/proteínas anotados].
•Preenche a tabela de resultados.
•Repete o procedimento para a bactéria Streptococcus thermophilus.
Resultados
Tabela resumo dos resultados obtidos com a análise computacional realizada
Tarefa Resultados
Tamanho do genoma:
Dados do genoma da bactéria Conteúdo G/C (%) do genoma:
Lactobacillus bulgaricus Número de genes anotados:
Número de proteínas anotadas:
Tamanho do genoma:
Dados do genoma da bactéria Conteúdo G/C (%) do genoma:
Streptococcus thermophilus Número de genes anotados:
Número de proteínas anotadas:

Discussão:
•Compara os dados recolhidos relativos às duas bactérias.
 Ação de Formação
O admirável mundo dos
Micróbios: pequenos no tamanho,
grandiosos na ação

Módulo laboratorial

Trabalho realizado por:

Ana Cristina de Sousa Amaral
Carla Maria Martins Fonseca dos Santos Gouveia
17 e 22 Setembro 2018
Vera Vieira Gomes Instituto Superior Técnico
Laboratórios Virtuais
Sugestões para consulta (alunos 12.º ano):

http://www.glencoe.com/sites/common_assets/science/virtual_labs/LS08/LS08.html

http://learn.chm.msu.edu/vibl/content/antimicrobial.html#

http://learn.chm.msu.edu/vibl/content/streakplate/streak_plate/streak_plate.html
http://learn.chm.msu.edu/vibl/content/antimicrobial/kirbybauer/index.html
Proposta de trabalho para alunos de Biologia (12º ano)

Elaboração de um protocolo experimental (em grupo) - sugestões

* Produção de insulina por bactérias.

* Resistência bacteriana a um determinado antibiótico.

Condição: num dos lotes é efetuada a extração do plasmídeo.

O protocolo experimental deve apresentar:

• objetivos,
• material,
• procedimento e
• bibliografia consultada para a elaboração
do protocolo experimental.
 Ação de Formação – “O Admirável Mundo dos Micróbios”

Formandas: Maria de Fátima Aguiar

Maria Manuela Gomes

Sugestão de uma atividade experimental – Influência dos

microrganismos presentes na casca da uva no processo de fermentação
alcoólica

A atividade proposta enquadra-se na disciplina de Biologia e Geologia do 10º

ano de escolaridade.

Enquadramento curricular: Domínio- Transformação e utilização de energia

pelos seres vivos.

Objetivos: - Planificar e realizar atividades laboratoriais/experimentais sobre

metabolismo, problematizando, formulando hipóteses e avaliando
procedimentos e resultados. (in Aprendizagens Essenciais Biologia e Geologia
10º ano)
Metodologia seguida:
Inicialmente, será apresentado à turma o problema que estará na base da
atividade experimental.

Problema: Em que local do fruto se encontram os microrganismos

responsáveis pela fermentação alcoólica?

Com base no problema apresentado, cada grupo irá planificar e executar uma
atividade experimental (formulando hipóteses, variáveis, controlo…).

Os resultados obtidos serão devidamente analisados e tirar-se-ão as

respetivas conclusões.

A resposta ao problema inicial trará, possivelmente, novas questões que

poderão servir de base a novas investigações como por exemplo: Quais os
microrganismos presentes na casca da uva?
Dos microrganismos identificados, qual/quais são fundamentais no processo
de fermentação alcoólica?

Formandas: Maria de Fátima Aguiar

Maria Manuela Gomes
 Formandos:

David Mendes
17 e 22 de setembro 2018 Fátima Pires
Instituto Superior Técnico Natália Martins
Atividade prática: Estudo do crescimento de colónias de microrganismos em
ambientes com diferentes temperatura e pH

Público alvo: alunos de Ciências Naturais do 8º ano de escolaridade.

Unidade Temática: “Funcionamento dos Ecossistemas/Fatores
abióticos: Composição dos Solos - Importância dos Microrganismos no
Ciclo da Matéria”
Objetivo: criar condições para que os alunos constatem a influência
do pH e da temperatura no crescimento de colónias.
Material: Amostra de solo; Luvas; Bicos de Bunsen/ Lamparinas;
Balança; Gobelés; Frascos; Caixas de Petri; Meio de cultura sólido;
medidor de pH do solo; Água destilada; Detergente Verde
Amoniacal; Vinagre; Frigorífico; Estufa; Autoclave/Panela de
Pressão.
Procedimento:
1- Recolher uma amostra de solo.
2 – Fazer uma suspensão em água destilada, decantar
e filtrar
3 - Medir pH do líquido remanescente.
4 - Preparar 1 caixa de Petri com meio de cultura adequado ao crescimento das
bactérias e pH semelhante ao do solo (caixa controlo)
5 - Preparar 9 caixas de Petri com meio de cultura adequado ao crescimento das
bactérias, mas com diferente pH (3 com pH neutro; 3 com pH básico e 3 com pH
ácido).
6 - Inocular as 10 das caixas referidas em 4. e 5. com bactérias do solo.
7 - Colocar a caixa de Petri referida em 1. à temperatura do solo.
8 - Colocar um lote de 3 caixas com diferentes pH (neutro, básico e ácido) no
frigorífico (2ºC);
9- Colocar um lote de 3 caixas com diferentes pH (neutro, básico e ácido) na
estufa a 35ºC.
10 - Observar a evolução durante uma semana e registar
o crescimento e tipo de colónias

Explorar com os alunos a importância de manter os solos libertos de poluentes

permitindo aos microrganismos crescer e desempenhar a sua função no
ecossistema
 O ADMIRÁVEL MUNDO DOS
MICRÓBIOS:
PEQUENOS NO TAMANHO,
GRANDES NA AÇÃO
Isabel Cristina Sobral
Maria do Rosário Sequeira
Agrupamento de Escolas D.Filipa de Lencastre
Trabalho 1 – Os micróbios vêm às aulas?

• 10º ou 11º ano

Atividade: Pesquisar a presença de microrganismos nos objetos da
sala de aula
• Passar com cotonetes em vários locais e objetos da sala de aula
(mesas, computador, livros, quadro, porta, mãos….)
• Esfregar os cotonetes em meio de cultura previamente preparado e
colocado em caixas de petri devidamente identificadas
• Colocar as caixas de petri na estufa e observar o crescimento das
colónias
• Fazer o mesmo procedimento mas colocando as caixas de petri no
frigorífico
• Analisar os resultados e tirar conclusões (condições favoráveis para
a multiplicação dos micróbios, locais onde são mais abundantes)
Trabalho 2 – Genoma, genes e proteínas

• 11º ano - U 5 – Crescimento e renovação celular- DNA e síntese

proteica
Material: Computador com ligação à internet
Atividade:
Efetuar uma pesquisa sobre microrganismos patogénicos
• Selecionar um microrganismo e pesquisar o seu genoma
• Selecionar um gene e analisar a sequência de nucleótidos
• Analisar a correspondente proteína (sequência de a.a.)
• Pesquisar organismos onde se encontra o mesmo gene e
respetivas semelhanças
• Comparar os resultados com os dos outros grupos e tirar
conclusões
 Trabalho 3 – Os micróbios que degradam a
celulose
Introdução

• A celulose, um longo polímero de glicose, é o glícido mais abundante e é muito estável à temperatura
ambiente.

• Apenas alguns micróbios a podem decompor e, assim, reciclá-la, pelo que são extremamente importantes
para os ciclos de matéria orgânica e, consequentemente, para a vida – alguns fungos e bactérias do solo e
certas bactérias do rúmen de ruminantes.
• A celulose não é solúvel em água, pelo que os micróbios não podem absorvê-la. Ela é degradada fora das
células por enzimas produzidas pelos micróbios em produtos como a glicose, os quais são absorvidos e
utilizados.
• Em terra, os principais decompositores da celulose são fungos, auxiliados por algumas bactérias aeróbias e
anaeróbicas. Em habitats marinhos, as bactérias são as principais responsáveis pela degradação da celulose,
mas os fungos aquáticos de água doce desempenham essa função em zonas bem arejadas, com as
bactérias desempenhando um papel cada vez mais importante à medida que a quantidade de oxigénio
diminui. As bactérias celulolíticas incluem espécies de Cellulomonas, Pseudomonas e Ruminococcus. Os fungos
celulolíticos incluem Chaetomium, Fusarium, Myrothecium and Trichoderma.
 Atividade Laboratorial

• Usando a informação disponibilizada e outra resultante de pesquisa,

Testa a atividade celulolítica microbiana presente numa amostra de solo

Procedimento:
1.Etiquetar 6 tubos, de acordo com a tabela, identificar e datar.
2. Colocar 5cm3 de caldo nutritivo no tubo A.
3. Misturar o solo e 30cm3 de caldo nutritivo no erlenmeyer por forma a obter
uma
Tubosuspensão do solo e deixe repousar
Conteúdo Tipo de umpapel
minuto. Resultados
4. Pipetar 5cm3 do sobrenadante do caldo nutritivo / suspensão do solo em
A um
cada Caldo nutritivo
dos tubos (estéril)
restantes. Papel de filtro
5. Introduzir
B Caldouma tira de
nutritivo papel Papel
+ solo (1x2cm) do tipo indicado na tabela em cada um
de filtro
dos tubos.
C
6.Deixe Caldo
os nutritivo
tubos + solo
à temperatura Jornal (sem impressão)
ambiente por pelo menos uma semana.
7.Dê
D
a Caldo
cadanutritivo
tubo +um solo
toque com o dedo. Observe atentamente o que
Jornal (com impressão)
acontece com a tira de papel.
E
8.RegisteCaldo nutritivo
os seus + solo na tabela
resultados Capa de e revista (brilhante)
responda às questões.
F Caldo nutritivo + solo Cartão fino
 Planeia uma investigação para estudar fatores ambientais que influenciam
a atividade celulolítica microbiana
O efeito da temperatura na atividade enzimática das celulases microbianas
A atividade celulolítica de micróbios de diferentes solos
O efeito sobre a atividade celulolítica da adição de diferentes nutrientes às
amostras de solo
Identificação dos fungos ou bactérias mais importantes em termos de
atividade celulolítica num tipo de solo
No planeamento da sua
investigação, deve considerar as
seguintes etapas e elaborar o
respetivo relatório:

• Objetivos

• Material e Procedimento

• Resultados

• Discussão

• Conclusões

• Bibliografia