INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

SISTEMAS DE CONTROL DE CALIDAD

Profesores:
M en C Aura Hernández Olicón
M en C Elizabeth Jiménez Gutierrez
M en C Hilda Pérez Cervantes
Dr. Luis R. Carreno Durón

Autor: Suarez Gómez Alexis Gabriel

Práctica: Determinación del volumen mínimo de lectura.
Observación del “efecto menisco” y evaluación del efecto de
arrastre y acarreo
Grupo: 5QM2
Sección: 4
Equipo: 10

Ciclo escolar 2019

Fecha de entrega
Ciudad de México, 22 de febrero de 2018
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INTRODUCCIÓN
En fotómetros que utilizan celdas, el adicionar un volumen menor al
adecuado ocasiona lecturas erróneas y como resultado se obtienen resultados incorrectos.
En las determinaciones fotométricas es importante que el volumen de la muestra que se
deposita en la celda de lectura sea el suficiente para asegurar que el haz de luz incida en
la solución en la zona donde no interfiera el menisco, ya que cuando se coloca un volumen
de muestra insuficiente, el haz de luz incide directamente en el menisco provocando que la
luz se difracte, lo que se conoce como efecto menisco. Cabe mencionar que en los
instrumentos automatizados igualmente se da dicho efecto análogo al del menisco el cual
es llamado efecto burbuja.
Otro de los factores que afectan la calidad analítica, es la interferencia entre dos
mediciones. Cuando el reactivo de la muestra previamente realizada, no ha sido bien
eliminado, interfiere con la siguiente determinación, lo que se conoce como “efecto acarreo”.
El efecto acarreo es muy evidente en equipos automatizados, aunque también puede
manifestarse en equipos semiautomatizados si no te tienen los cuidados necesarios.

OBJETIVO
• Determinar el volumen mínimo que un fotómetro puede utilizar, para obtener lecturas
confiables
• Evaluar la magnitud del efecto con que el menisco afecta las mediciones, cuando se
utilizan volúmenes inferiores al mínimo
• Determinar si un sistema analítico o equipo presenta o no el efecto acarreo, a partir
del empleo de soluciones coloridas de 2 diferentes concentraciones, mediante un
procedimiento sencillo.
FUNDAMENTO
Los fotómetros y espectrofotómetros utilizan celdas de diferente volumen, que van desde
menos de 200 µL hasta 3mL, los espectrofotómetros, la fuente de luz que proporciona es
un haz policromático que es colimado al atravesar la ranura de entrada. Este haz llega al
selector de longitud de onda, el cual permite generar un haz monocromático de la longitud
de onda deseada. El rayo de luz monocromático atraviesa la segunda ranura e incide
perpendicularmente sobre la cara lateral de la cubeta, la cual contiene la muestra. El haz
de luz transmitido por la muestra es detectado al impactar sobre el detector. Los
espectrofotómetros son una herramienta importante del laboratorio, y de su buen
funcionamiento depende la calidad de los resultados que se obtienen. Por lo tanto es
importante conocer y controlar determinados parámetros, analizarlos y verificar si se
encuentran dentro de los rangos de aceptabilidad permitidos y en caso contrario, proceder
a calibrar, reparar, llamar el servicio técnico. Algunos controles espectrofométricos se les
realizan a los equipos cada vez que se los usa, y otros periódicamente son:
Control de volumen mínimo. Este control asegura que toda la luz pase por la solución y no
“por arriba” o por el menisco, lo que produciría resultados erróneos. Desde el punto de vista
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económico, este control es importante ya que cuanto menor sea el

volumen mínimo, más economía se puede lograr en el uso de reactivos.
Puede realizarse con agua o con una solución coloreada transparente. Se
considerará volumen mínimo aquel en el cual la lectura no varía con el agregado de más
líquido.
La contaminación de reactivos entre determinaciones, provoca interferencias por el efecto
de acarreo, el cual se produce por un deficiente lavado de las celdas. Estas interferencias
pueden causar: que la concentración del mensurado anterior sea elevada y el residuo que
queda aumente la concentración de la siguiente determinación; que la concentración sea
baja debido a residuos de agua de lavado que diluye la concentración de la muestra; que
la matriz que contiene la reacción previa tenga la capacidad de afectar alguna prueba
siguiente.
PREGUNTA EXTRA
Incerto de glucosa oxidasa de Randox:
De acuerdo al inserto de la determinación de glucosa menciona que para dicha prueba se
usan 20 µL de muestra/patròn con 2000 µL de reactivo y el blanco usando una cubeta de
volumen completo (macro), por el contrario si se requieren volúmenes menores igualmente
se pueden usar 10 µL de muestra/patròn con 1000 µL de reactivo y el blanco usando una
cubeta de volumen reducido (semi-micro).
Volumen mínimo que miden los siguientes equipos
SpinLab: 220 µL
MicroLab: 32 µL
Selectra XL: 200 µL
RESULTADOS

Bitácora de resultados Fecha: 08/03/2019

Determinación del volumen mínimo, evaluación y observación del efecto acarreo
Resultados y observaciones:

Efecto menisco

Tabla 1 Determinación de efecto menisco

Vol μL Absorbencia
100 0
200 0
300 0
400 0.002
500 0.002
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600 0.003
700 0.001
800 0
900 0
1000 0.095
1100 0.169
1200 0.198
1300 0.277
1400 0.333
1500 0.274
1600 0.247
1700 0.248
1800 0.246

0.4

0.35

0.3

0.25
Absorbencia

0.2

0.15

0.1

0.05

0
0 500 1000 1500 2000
-0.05
Vol μL

Figura 1. Volumen mínimo y efecto menisco (celda de volumen completo).

Espectro utilizado: DLAB SD-V100 Laboratorio 3

Reactivo utilizado: K2Cr2O7 Tipo de celda: Celda de vol. Completo
Longitud de onda utilizado: 500 nm
Volumen seleccionado: Vol. de 100 en 100 µL
Absorbancia a la que se leyó el menisco: 500 nm
Volumen al que se observa el menisco: 1400 µL
Volumen mínimo: 1500 µL
Volumen necesario para obtener lecturas adecuadas: 1800 µL
% de error: 21.53 %
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Efecto acarreo

Tabla 2 Soluciones sin intercalar

Solución A Absorbancia Solución B Absorbancia

1 0.342 1 1.566
2 0.340 2 1.570
3 0.340 3 1.577
4 0.338 4 1.565
5 0.338 5 1.564
Media 0.3396 Media 1.5684
%CV 0.492 %CV 0.339

Reactivo utilizado: K2Cr2O7

Longitud de onda utilizado: 500 nm
Concentración de la solución A: 0.08%
Concentración de la solución B: 0.32%

Tabla 3 Soluciones intercaladas

Solución A Absorbancia Solución B Absorbancia

1 0.329 1 1.479
2 0.388 2 1.492
3 0.432 3 1.463
4 0.427 4 1.479
5 0.450 5 1.493
Media 0.4052 Media 1.4812
%CV 11.895 %CV 0.824
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0.5
0.45
0.4
0.35
Absorbanica

0.3
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 1 2 3 4 5 6
Solución A

Figura 2. Relación de absorbancias de la solución A intercaladas (líneas rojas) y

sin intercalar.
1.6

1.58

1.56
Absorbancia

1.54

1.52

1.5

1.48

1.46

1.44
0 1 2 3 4 5 6
Solución B

Figura 3. Relación de absorbancias de la solución B intercaladas (líneas rojas) y

sin intercalar.

Tabla 4 Coeficientes de variación obtenidos:

Sol Sin/Int Sol. Int

Sol. A Sol. B Sol. A Sol. B
Media 0.3396 1.5684 0.4052 1.4812
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%CV 0.492 0.339 11.895 0.824

%V -- -- 14.31 -5.55

Cálculos:

Efecto acarreo

Fórmula del coeficiente de variación:

S
CV= x 100
̅
X
Solución A sin intercalar:
S 1.67𝑥10−3
CV= X̅ x 100 = 0.3396
x 100= 0.492

Solución B sin intercalar:

S 5.31𝑥10−3
CV= X̅ x 100 = 1.5684
x 100 = 0.339

Solución A intercaladas:
S 0.0482
CV= X̅ x 100 = 0.4052
x 100= 11.895

Solución B intercaladas:
S 0.01221
CV= X̅ x 100 = 1.4812
x 100 = 0.824

%Error:

Solución A:
valor observado- valor real 0.4052- 0.3396
%E= = x100= 19.31%
valor real 0.3396

Solución B:
valor observado- valor real 1.4812-1.5684
%E= = x100= -5.55%
valor real 1.5684
¿El sistema analítico presenta efecto acarreo? Si.

Identificaciòn de puntos críticos del Acciones correctivas

sistema analìtico
 El no lavado de las celdas en cada
lectura da efecto de acarreo.
 El manejo inadecuado del volumen
de las celdas puede dar un efecto
menisco
 En cada lectura con las cubetas es
necesario lavarlas y quitar lo màs
que se pueda los restos de agua.
 Tener en cuenta el tipo de celda a
utilizar para asì considerar el
volumen con el cual trabajar
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Observaciones:
 Para buenas prácticas de laboratorio llevar al volumen mínimo la muestra para una
buena lectura.
 Usar volumen mínimo considerando los costos de reactivo.
 Usar mayor volumen hace evitar de mejor manera el efecto menisco cuando no
son tan costosas las soluciones
Acciones preventivas para los procedimientos:
- En primera instancia hay que trabajar con celdas en buen estado y siempre
considerar el volumen mínimo que podemos colocar en cada celda para que
nuestro espectrofotómetro lo pueda leer.
- Lavar y secar entre cada lectura las celdas para evitar el efecto acarreo, evitando
que nuestras lecturas aumenten dado al acarreo de concentraciones de la lectura
pasada o que las lecturas disminuyan dado a la dilución de nuestra muestra debido
al mal secado
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Tabla 5 Resultados grupales

Efecto Menisco A Sin/Int B Sin/Int A Int B Int

Analista Tipo A del A cte % de Vol. Vol. X % X %CV X %CV %V X %C %V

de meni E Me Mini CV V
celda sco nisc mo
o µL
µL
Cris/Luis Vol. 0.27 0.24 10.0 140 1500 0.32 0.16 1.68 0 0.36 8.05 10.9 1.66 1.8 -
a Com 3 0 0 44 8 5 7 18 6 1.37
Dany/Ale Vol. 0.33 0.24 21.5 140 1500 0.33 0.49 1.56 0.33 0.40 11.8 19.3 1.48 0.8 -
x Com 3 2 3 0 96 2 84 9 52 95 1 12 24 5.55
Toño/Car Vol. 0.28 0.24 18.0 400 650 0.30 0 1.58 0.10 0.31 0.10 1.75 0.62 10. -
los Semi 6 4 3 7 2 9 24 9 36 1 60.5
8
Gabriel/A Vol. N/A 0.23 N/A N/A 1500 0.31 0.71 1.42 0.34 0.38 12.4 16.5 1.36 1.5 -
lex Com 8 8 9 86 4 2 8 3.41
Diana/Sh Vol. 0.66 0.21 207. 350 450 0.30 0.53 1.38 2.45 0.33 10.3 9.74 1.30 3.2 -
aron Semi 7 7 37 8 4 8 5 7 1 5.56
Andrea/ Vol. 0.51 0.23 116. 300 400 0.30 1.43 1.46 0.91 0.39 11.3 29.3 1.37 1.0 -
Merari Semi 2 6 94 76 2 03 8 8 6 17 5.88
Yolanda/ Vol. 0.26 0.23 0.00 800 1100 0.29 0.39 1.39 0.18 0.32 6.85 75 1.38 0.5 -
Abril Com 3 2 1 1 1 5 0.71

*No aplica: N/A

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Discusión
Cabe mencionar en primera instancia que para poder evaluar las celdas o cubetas
manejadas experimentalmente e igualmente en un laboratorio clínico, es importante
conocer el volumen mínimo el cual puede ser detectado por mi método instrumental en este
caso el espectrofotómetro, para ello se llevo a acabo la prueba de efecto menisco, el cual
debe ser un control al momento de leer las muestras para evitar errores. De acuerdo a la
primera experiencia de la determinación del efecto menisco con respecto a la celda
trabajada de volumen completo se puede observar en la figura 1 que al inicio de las lecturas
de absorbancia se mantienen constante dado a que se transmite toda luz dado a que no es
absorbida ya que no hay muestra solo hay aire, por lo tanto pasa directamente al detector,
a medida que se va agregando 100 en 100 µL el reactivo utilizado dicromato de potasio
(K2Cr2O7), se observa un incremento de la absorbancia hasta llegar a un punto
donde se da un pico de absorbancia máxima el cual hace referencia al punto donde
se formo el menisco, dado a que en dicho punto se llegan a leer muestra y aire se
llega a difractar la luz disparando los valores de absorbancia, después desciende
llegando a una meseta con valores constantes los cuales refieren al volumen
mínimo necesario de la celda para poder ser detectada por el espectrofotómetro el
cual se encuentra en 1500 µL.
Con respecto a los datos de la Tabla 3, es posible observar que los valores observados con
respecto a los reales, es posible discernir el cambio drástico de absorbancia al no enjuagar
y limpiar las celdas en cada medición ya que se acarrea muestra de la anterior lectura
aumentando la concentración de la siguiente modificando las absorbancias con respecto a
las reales. Cabe mencionar que las concentraciones diluidas fueron las que se vieron màs
afectadas, dado al efecto de variación de soluciones, dicho efecto se puede observar en la
figura 2 de la relación entre las absorbancias intercalas y las no intercaladas, igualmente se
vio con el porciento de veracidad en donde cuyos valores fuera >5% presentaban acarreo
ese fue el caso con Cris/Luisa, Dany/Alexis, Toño/Carlos, Gabriel/Alex, Diana/Sharon y
Andrea/Merari, esta falta de veracidad en donde los resultados sean fidedignos se
comprueba que el trabajo de esa manera no es el adecuado, y menos en el laboratorio
clínico ya que una mala práctica de trabajo dado a la falta de diligencia del analista puede
comprometer los resultados del paciente llevàndolo a incrementar posiblemente sus niveles
de glucosa los cuales no están en esos niveles llevandolo a un mal diagnostico de posible
diabetes, cancer pancreàtico, hipertiroidismo.
Conclusiones

 El volumen minimo para la celda de vol. Completo fue de 1500µL

 El volumen del menisco registrado fue de 1400 µL
 El volumen para celdas de vol. Semireducido oscila entre 400-450 µL
 El no limpiar correctamente las celdas provoca que se dé el efecto acarreo
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 El efecto menisco
afecta considerablemente a las lecturas, disparándolas un hasta un 15% más que
el valor real.

Referencias
 Archivo PDF, Randox: insertos de laboratorio, disponible en:
http://sistemainterno.com/web/wp-
content/themes/aaaclientesflash/gaamsa2011/pdf/MANUAL_QC_2013.pdf
 Carla De Angelis. ESPECTROFOTOMETRÍA. [internet][consultado el 20 de marzo del 2019].
Disponible en:
file:///C:/Users/sixce/Downloads/1792222420.Espectrofotometr%C3%ADa.pdf