SERIE ERITROCITICA - PRÁCTICA

M.V. MSc. ZOLEIDA BASTIDAS

PRUEBAS Y ACTIVIDADES A REALIZAR:

1. RECUENTO TOTAL DE ERITROCITOS.
2. HEMATOCRITO.
3. HEMOGLOBINA.
4. VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR.
5. RECUENTO DE RETICULOCITOS.
6. ESTUDIO DE FROTIS SANGUINEO.
7. ESTUDIO MORFOLOGICO DE ERITROCITOS EN DIFERENTES ESPECIES.
8. ESTUDIO DE INCLUSIONES EN ERITROCITOS.

RECUENTO DE GLOBULOS ROJOS

Fundamento:
Se diluye la sangre con anticoagulante 1:200 con un líquido isotónico que impide la coagulación, la
formación de grumos y la de pilas de monedas; luego se cuentan las células en Cámara de Neubauer
modificada.
Técnica:
- Aspírese la sangre con cuidado hasta la marca 20 ul de la pipeta de Salhi o mida 20ul con una
micropipeta automática. Limpie las pipetas por fuera retirando el exceso de sangre. Se descarga la
sangre en 3, 98 cc de Líquido de Gower. Se agita la mezcla por 1, 2 minutos.
- Se debe limpiar muy bien con una gasa, la cámara en especial el retículo y el cubreobjetos hasta
quedar desprovistos de polvo o cualquier partícula extraña.
- Después de un pequeño reposo se agita nuevamente en forma manual y luego se procede a colocar
una gota en la cámara cuenta glóbulos, a nivel del borde del cubreobjetos entre las dos ranuras del
retículo. Cuando la gota es del tamaño adecuado llena por capilaridad la cámara. Si la gota es muy
grande o muy pequeña, el llenado es incorrecto y por consiguiente no debe practicarse el examen.
- Cargada la cámara, luego de un reposo de 2 a 3 minutos, se procede a observar al microscopio con
lente de poco aumento y con la luz diafragmática al mínimo para saber:
 Si los glóbulos están distribuidos uniformemente.
 Si no hay burbujas de aire.
 Que existan glóbulos aglutinados.
 Si existen partículas extrañas.
Si existe alguna de las alteraciones anteriores, se procede a limpiar la cámara y a cargarla de nuevo.
- Si todo esta correcto se procede a contar de la siguiente forma: Se cuentan todos los glóbulos que se
encuentren dentro de los cinco cuadros del milímetro central, los cuatro cuadros de los extremos y el
cuadro central; cada uno de los cuales tiene 16 pequeños cuadritos, contándose un total de 80
cuadritos.

Cálculos:
Nº eritrocitos / mm3. = N / 80 x 10 x 200x 400 = N x 10.000
DETERMINACION DE HEMOGLOBINA.
Fundamento:
Se basa en que la hemoglobina y la metahemoglobina, se combinan con el cianuro de potasio donde la
cianometahemoglobina de un color naranja apto para la determinación fotocolorimétrica. La
cianometahemoglobina es un pigmento estable cuya concentración es directamente proporcional a su
densidad óptica.

Técnica:
- En un tubo de ensayo o de Klett, colocar 5ml. De reactivo de Drabkin.
- Aspirar exactamente hasta la marca de 20 ul o 0.02ml de sangre, en la pipeta calibrada para este
volumen. Límpiese el exterior de la pipeta con gasa y en caso de sobrepasar la marca, proceder a
enrasar dándole toquecitos a la punta de la pipeta con la gasa.
- Colocar la sangre de las pipetas dentro del tubo con el reactivo y proceder a enjuagar la pipeta
aspirando la solución de Drabkin y volviendo a expulsarla. Mezclar bien y dejar en reposos durante 10
minutos.
- Leer en fotocolorímetro, espectrofotómetro, stat fax.

RECUENTO DE RETICULOCITOS.
Son eritrocitos no nucleados inmaduros, que contienen RNA y que continúan sintetizando hemoglobina
después de la pérdida del núcleo.

Técnica:
Se mezcla en un tubo tres gotas de azul de cresil brillante y tres gotas de sangre, se incuban durante 10-
15 minutos a 37 grados, se hacen dos extendidos en lámina y se miran con objetivo de 100 X. Se cuentan
aproximadamente 1.000 (20 campos) hematíes y se saca el promedio de reticulocitos.

DETERMINACIÓN DE HEMATOCRITO:
Fundamento:
Consiste en el volumen de células aglomeradas por centrifugación.

Método del Microhematocrito:

Técnica:
- Se procede al llenado del tubo capilar.
- Sellar el extremo vació del tubo con una arcilla especial (Plastilina) o a la llama del mechero con
cuidado de no calentar la sangre.
- Centrifúguese por espacio de 5 minutos a la velocidad de 10.000 a 11.000 r.p.m o de 2 minutos a la de
16.000 o 16.500 r.p.m.
- Enrasar los tubos por medio de la tabla graficadora, haciendo coincidir el menisco superior de plasma,
con el número 100 de la tabla y el inferior de la capa de eritrocitos con la línea cero.
- La altura del volumen aglomerado se lee y se reporta en tanto por ciento (%).
VELOCIDAD DE SEDIMENTACION.

Fundamento.
Consiste en un tubo que contiene sangre con anticoagulante, se mide la distancia recorrida en su
caída por los eritrocitos, durante un tiempo dado, estando el tubo en posición vertical.

1. Método de Westergreen: El tubo de Westergreen tiene una longitud de 300m.m se diámetro es de

2m.m. su capacidad de 1ml y su graduación de 0 a 200 siendo el intervalo de 1m.m.

Técnica:
- Se llena el tubo con sangre con anticoagulante, hasta la división “0”, se tapa el extremo y se coloca
verticalmente en una gradilla especial de Westergreen.
- Se lee la caída de eritrocitos en milímetros, a los intervalos diversos de tiempo indicados para cada
especie animal.

2. Método de Wintrobe.
Técnica.
- Se llena el tubo de hematocrito de Wintrobe, con sangre con anticoagulante por medio de la pipeta
especial, hasta la marca “0” de la escala de la izquierda.
- Se coloca el tubo en posición vertical, en el sedimentador de wintrobe y se lee a intervalos de tiempo
indicados para cada especie animal.
- El nivel superior del sedimento de eritrocitos se lee en milímetros, sobre la escala de la izquierda de
“0” a “10” hacia abajo.
 IMÁGENES DE LA MADURACIÓN DE LOS ERITROCITOS

Rubriblasto Prorubricito Rubricito

Eritrocito Policromatófilo Metarubricito

Reticulocito
 VELOCIDAD SEDIMENTACIÓN
Especie 10 min. 20 min. 30 min. 1 hora 24 horas 10 min. 1 horas
Wintrobe (mm) Westerg.

Bovino ……… ………. ……… …….. 2-4 - -

Equino 2-12 15-38 --- --- ---- 7-23

Ovino - - --- -- 3-8.5 - -

Caprino - - --- --- 2-2,5 - -

Porcino - - 0.6 1-14 - - -

Canino - - 1-6 5-25 - - -

INDICES HEMATIMÉTRICOS

Especie V:C.M. H.C.M C.H.C.M

Fl µµ gr. %

Bovino 40-60 11-17 26-34

Ovino 23-48 9-12 29-35
Caprino 19-37 5-7 30-35
Equino 34-58 12-18 31-37

Canino 60-77 19-25 31-34

Porcino 32-50 50-67 30-34
Felino 60-77 19-25 31-34

Diplomado en Laboratorio Clínico para Pequeños Animales.

Dra Zoleida Bastidas - Marzo 2019.
 DIPLOMADO EN LABORATORIO CLÍNICO VETERINARIO - DRA ZOLEIDA BASTIDAS. MARZO 2019.
Imágenes de Eritrocitos
MACROCITOS Y MICROCITOS ESTOMATOCITOS CPOS DE HOWELL- JOLLY

METARRUBRICITO HIPOCROMÍA CÉLULAS EN DIANA

PILAS DE MONEDAS, LINFOCITOS ACANTOCITOS ERITROCITOS CRENADOS

DACRIOCITOS QUERATOCITOS CPOS DE HEINZ

DIPLOMADO EN LABORATORIO CLÍNICO VETERINARIO - DRA ZOLEIDA BASTIDAS. MARZO 2019.
Leucocitos
Monocito de canino Monocito de felino Linfocito canino

Linfocitos de felino Neutrófilos segmentados Neutrófilo segmentado y em banda

Eosinofilos de canino Eosinófilo de felino