Extração de DNA a partir de sementes

‘ de sucupira-branca
Stefany Lorrayny Lima1, Priscila Zei Melo1, Marcos Vinícius Pereira Pinto1, Jordana Gontijo Fernandes1,2 (Apresentadora) e Thannya Nascimento Soares1
1Laboratório de Genética & Biodiversidade, Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Goiás; 2Escola de Ciências agrárias e biológicas,

Pontifícia Universidade Católica de Goiás. E-mail: stefany_sll@hotmail.com

INTRODUÇÃO RESULTADOS E DISCUSSÃO

Em estudos genéticos, quando o objetivo é avaliar progênies, é
necessário germinar a semente para a obtenção de tecido foliar das
plântulas geradas, tecido que usualmente é usado para extração de DNA.
No entanto, algumas espécies exibem problemas de formação de
sementes viáveis e baixa taxa de germinação e desenvolvimento inicial,
o que dificulta a obtenção de plântulas para os estudos genéticos, como
é o caso da espécie Pterodon emarginatus Vogel (sucupira-branca).
Pterodon emarginatus Vogel é uma espécie arbórea do Cerrado
brasileiro com potencial de uso, principalmente na construção civil e
medicina popular (Figura 1).
No teste 1 não houve DNA com qualidade, verificou-se apenas
material com “arraste” em algumas sementes e algumas amostras não
migraram pelo gel, ficando retidas no “poço” (Figura 2). O teste 2 se
mostrou o mais eficiente, apresentando o DNA com melhor integridade.
O teste 3 produziu boa quantidade de DNA, mas com baixa integridade,
visto que estavam degradadas. A lavagem com NaCl não melhorou a
qualidade do DNA extraído, pois mostrou o mesmo padrão das amostras
não lavadas. Houve amplificação do DNA de 3 sementes, apenas do
teste 2 (Figura 3).

200 ng/ul
100 ng/ul
10 ng/ul

20 ng/ul

50 ng/ul
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17

Figura 01. A espécie Pterodon emarginatus: Árvore (A e B); Folhas e frutos (C);
Floração (D); Fruto (E); Semente madura e abortada (F). Foto: Lima, S.L.

OBJETIVO Figura 02. Concentração e integridade do DNA de Pterodon emarginatus extraído

O objetivo deste estudo foi testar a extração de DNA a partir de
sementes da espécie Pterodon emarginatus, com tempos diferentes de
macerações e lavagem com NaCl.
pelo Teste 1 (A), Teste 2 (B) e Teste 3 (C) com o uso da técnica de eletroforese
horizontal em gel de agarose (1%). Padrões morfológicos de sementes usadas nos
testes de extração de DNA (D). Foto: Lima, S.L.

MATERIAL E MÉTODOS
Foram realizados três testes de extração com 15 sementes cada,
baseados no protocolo “CTAB 2%”. No 1° teste, o endosperma foi
mantido em todas as sementes, estas foram cortadas e maceradas em
macerador automático por dez segundos. No 2° teste, o endosperma foi Figura 03. Qualidade do DNA de Pterodon emarginatus nos 3 testes de extração,
retirado em todas as sementes, estas foram apenas maceradas, em amplificados via PCR com o marcador microssatélite DaE12 e visualizados pela
técnica de eletroforese horizontal em gel de agarose (3%). Foto: Lima, S.L.
macerador automático por dois minutos, ou até completa degradação.
No 3° teste, as sementes foram cortadas e maceradas por cerca de dois CONCLUSÃO
minutos e testou-se a lavagem com NaCl em uma amostra de oito É possível realizar a extração de DNA a partir de sementes de Pterodon
sementes. A concentração e integridade do DNA extraído foram emarginatus. A melhor forma de tratar as sementes para a extração de
avaliadas com o uso da técnica de eletroforese horizontal em gel de DNA é retirar o endosperma e macerar diretamente até completa
agarose (1%), utilizando-se marcadores de massa molecular conhecida deterioração, sem cortar previamente. Outras técnicas de purificação do
como padrões. A qualidade do DNA extraído foi avaliada, com uma DNA podem ser empregadas, pois as sementes apresentam substâncias,
amostra de oito dos melhores DNA de cada teste, pela amplificação, via como lipídeos, que podem interferir na amplificação do DNA.
PCR, utilizando-se o marcador microssatélite DaE12, para o qual é APOIO FINANCEIRO
relatado sucesso de amplificação do DNA na sucupira-branca. Os
produtos de amplificação foram submetidos à eletroforese horizontal em
gel de agarose (3%).