INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Departamento de Bioquímica

MÉTODOS DE ANÁLISIS

Informe de práctica.
DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE ENZIMAS PROTEOLÍTICAS.
MÉTODO DE KUNITZ

5QM1

Sección 2

Muñoz Domínguez Brenda Milenie

CICLO ESCOLAR ENERO- JUNIO 2019

RESULTADOS.
TABLA 1. ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA TRIPSINA Y ESPECÍFICA PARA LA
DIGESTIÓN DE CASEÍNA POR TRIPSINA
CONCENTRACIÓN A280
A280 UNIDADES
TUBO DE TRIPSINA PROBLEM TESTIG
CORREGIDA TRÍPTICAS
(mg/mL) A O
T1 y 1 0.04 0.492 0.025 0.467 0.0031
T2 y 2 0.08 0.432 0.039 0.393 0.0063
T3 y 3 0.12 0.599 0.015 0584 0.0094
T4 y 4 0.16 0.680 0.022 0.658 0.0126
T5 y 5 0.2 0.664 0.014 0.650 0.0157
PROBLEMAS
TI y I BROMELAÍNA 1:10 1.014 0.146 0.868 0.099
TII y II BROMELAÍNA 1:20 0.722 0.084 0.638 0.012
 TIII y III PAPAÍNA 1:2 0.888 0.329 0.559 0.003
TIV y IV PAPAÍNA 1:4 0.388 0.122 0.226 0.044
Muestra las absorbancias obtenidas por un espectrofotómetro a 280 nm a diferentes
concentraciones de la enzima tripsina y a diferentes diluciones de bromelaína y papaína,
éstas dos últimas enzimas a partir de muestras crudas. Las unidades trípticas de la
tripsina se calcularon con la ecuación modelo de la figura 1. Y las UT de las otras enzimas
a partir de una interpolación de la figura 2 tomando en cuenta sólo una dilución.

MATRIZ DE CÁLCULO
Absorbancia 280 corregida= AbsProblema− AbsTestigo

∴ 0.492−0.025=0.467
0.7
f(x) = 1.58x + 0.36
0.6 R² = 0.73
Absorbancia a 280 nm

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14 0.16 0.18 0.2 0.22
Concentración de Tripsina (mg/ml)

FIGURA 1. CURVA DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

ECUACIÓN DE MODELO. ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA TRIPSINA
y=1.5775x+0.3611
1.5775:Pendiente de la recta
0.3611 :Ordenada al origen

MATRIZ DE CÁLCULO.

Unidades trípticas por miligramo de tripsina

caseí na Pendiente de la recta 1 . 5775
[ Unidades Tripticas ] mg = = =0 . 0788 UT
Minutos de digesti ó n 20
Unidades trípticas por cada concentración de tripsina evaluada
0.0788 UT −1.0 mg/ml
x−0.04 mg/ml
 x=0.003152 UT
0.7
f(x) = 20.01x + 0.36
0.6 R² = 0.73

Absorbancia 280 0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 0 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.02 0.02
Unidades Tripticas

FIGURA 2. CURVA DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA ESPECÍFICA. Representa una

tendencia lineal por la actividad enzimática
ECUACIÓN DE MODELO. ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA TRIPSINA POR UNIDADES TRIPTICA
y=20.006x+0.3619
0. 3619:Ordenada al origen

MATRIZ DE CÁLCULO.
Volumen de extractos=27 ml
Peso de frutas=25g
Concentración del extracto:
25 g−27 ml x
0. 9259 g=x−1 ml
Interpolación para determinar la actividad proteolítica específica de las muestra problema
y−0.3619
∴ x=
20 .006
Cálculo de UT bromelaína :
0.146−0.3619
x= =0.0107 UT
20.006
UT∗Factor de dilución=0.0107∗10
¿ 0 .1079UT
 0.1079 UT −1.0 g/ml
0 .099UT de bromelaína=x−0.9259 g /ml
Cálculo de UT papaína :
0.329−0.3619
x= =0.0016UT de papaína
20.006
UT∗Factor de dilución=0.0016∗2
¿ 0. 0032UT

0.0032UT −1.0 g/ml

0. 0030UT de bromelaína=x−0.9259 g /ml
PREGUNTAS ADICIONALES
1. Defina actividad enzimática y actividad enzimática específica.
Se identifica como la velocidad de reacción en una cantidad de proteína
2. Escriba la clasificación de las proteasas en función de su mecanismo
de acción y diga en qué grupo se ubican las determinadas en la
práctica.
3. ¿Para qué se adiciona cisteína en las muestras de piña y papaya?
4. ¿Cuál es la especificidad de enlace de la tripsina?
CONCLUSIONES
• La actividad enzimática de la tripsina es de 0.0788 UT por miligramo
• La actividad enzimática de la bromelaína es de 0.099 UT por gramo
• La actividad enzimática de la papaína es de 0.003 UT por gramo
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS