UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES IZTACALA

PSICOLOGÍA A DISTANCIA

(0102) Introducción a las Neurociencias de la Conducta

TUTOR: DRA. VICENTA REYNOSO ALCÁNTARA

Unidad I. Técnicas y métodos neurobiológicos

para el estudio de la relación entre cerebro y
conducta

ACTIVIDAD 4. REPORTE DE LECTURA

Métodos neuroquímicos

ALUMNA:

WENDY MARLEEN RODRIGUEZ GUTIERREZ. 9227

 1. Microdialisis
MÉTODO
OBJETIVO Y EN QUÉ CONSISTE
VARIANTES DEL MÉTODO
ALCANCES
LIMITACIONES
MATERIALES E INSTRUMENTOS
PREGUNTAS DE INVESTIGACIÓN
RESULTADOS RELEVANTES PARA LAS
NEUROCIENCIAS
MÉTODOS QUE LO COMPLEMENTAN
CONCEPTOS CLAVE PARA
COMPRENDER EL MÉTODO
INFORMACIÓN RELEVANTE
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Microdialisis
 Proceso mediante el cual se separan sustancias mediante una membrana artificial que es permeable
solo para algunas moléculas. Se pueden analizar las sustancias químicas que se hallan en el líquido
intersticial gracias a un pequeño tubo, hecho con una membrana semipermeable, que se implanta en el
encéfalo.
 Su objetivo es estimar los neurotransmisores o neuromoduladores liberados por las neuronas.
 Se utiliza cirugía estereotáxica para colocar una sonda de microdiálisis en el encéfalo, el extremo de la
sonda se sitúa en la región a estudiar. Luego se bombea lentamente una cantidad pequeña de solución
salina muy parecida al líquido extracelular a través de una de las pequeñas cánulas metálicas en el tubo
de microdiálisis, el líquido circula por este y atraviesa la segunda cánula metálica, donde capta 1
moléculas del líquido extracelular que se difunden en él. Después se analiza el contenido del líquido.
 Administrar sustancias exógenas (drogas, fármacos, toxinas, etc) localmente (in situ) en cualquier de
esas regiones.
 Se ha aplicado el procedimiento de microdiálisis al estudio del cerebro humano. Existen algunos casos
excepcionales (por ejemplo, cuando se requiere determinar las sustancias químicas presentes en el
cerebro de personas con una hemorragia cerebral o un traumatismo craneoencefálico).
 Este método es tan sensible que puede detectar neurotransmisores (y sus productos de degradación)
que han sido liberados por los botones terminales y desde el espacio sináptico se han dispersado en el
resto del líquido extracelular.
 Es una técnica de gran alcance con muchas aplicaciones potenciales para cualquier molécula lo
suficientemente pequeña para atravesar la membrana.
 Técnica invasiva, no obstante el daño cerebral no es demasiado grave y el animal se recura en 24-48
horas después de implantación de la cánula.
 No se ha conseguido incorporar la Microdiálisis cerebral a la neuromonitorización rutinaria, quedando
reservada todavía como un instrumento de investigación clínica.
 Método de alto coste.
 Se requiere cierto entrenamiento para la inserción de las sondas.
 No se dispone de los resultados de forma inmediata.
Sonda de microdialisis, tubo de microdialisis, solución salina, cánulas, catéteres.
¿Cómo contibuye la microdiálisis al diagnóstico de trastornos neurobiológicos ¿Existe alguna limitación en el
estudio de los neurotransmisores con el método Microdialisis?
 La microdiálisis cerebral ha sido empleada en la clínica desde 1992 para la monitorización neuroquímica
de pacientes en unidades de cuidados intensivos. A pesar de sus limitaciones actuales, esta técnica
aporta información relevante para la investigación y el abordaje clínico de los pacientes neurocríticos.
 Permite conocer in vivo, con extremada sensibilidad, los fenómenos metabólicos cerebrales.
Cirugía esterotáxica.
 Diálisis: es un proceso mediante el cual se separan sustancias por medio de una membrana artificial
que es permeable para unas moléculas y no para otras.
 Neurotransmisor: sustancia química cuya principal función es la transmisión de información de una
neurona a otra a travesando aquel espacio denominado como sináptico que separa dos neuronas
consecutivas.
 Membrana Semipermeable: Es una membrana que permitirá que ciertas moléculas o iones pasen a
través de ella por difusión, y ocasionalmente especializada en "difusión facilitada".
Mediante la MC podemos obtener neurotransmisores, sus metabolitos o cualquier sustancia endógena del
líquido extracelular de cualquier región o área cerebral, en un animal consciente y en libre movimiento.
 MICRODIALISIS

DEFINICIÓN Este método es tan sensible que puede

Proceso mediante el cual se separan
sustancias mediante una membrana
semipermeable. Estas sustancias
químicas halladas en el líquido
intersticial posteriormente se pueden
estudiar.
detectar neurotransmisores (y sus
productos de degradación) que han sido
liberados por los botones terminales y
desde el espacio sináptico se han
dispersado en el resto del líquido
extracelular. 2

OBJETIVO
Estimar los neurotransmisores o No se dispone de los resultados de
neuromoduladores liberados por las forma inmediata.
neuronas.

CONSISTE EN: ALCANCES LIMITACIONES

Se utiliza cirugía estereotáxica para

Método muy sensible que puede
colocar una sonda de microdiálisis en el
detectar neurotransmisores y Técnica invasiva y de alto coste
encéfalo, el extremo de la sonda se
metabolitos del líquido extracelular.
sitúa en la región a estudiar.

Luego se bombea lentamente una No se ha conseguido incorporar

cantidad pequeña de solución salina la Microdiálisis cerebral a la
Método de gran alcance con muchas
muy parecida al líquido extracelular a
aplicaciones potenciales para cualquier neuromonitorización rutinaria,
través de una de las pequeñas cánulas
molécula lo suficientemente pequeña quedando reservada todavía como
metálicas en el tubo de microdiálisis, el
para atravesar la membrana. un instrumento de investigación
líquido circula por este y atraviesa la
segunda cánula metálica. clínica.

Aquí se captan moléculas del líquido

Permite conocer in vivo, con extremada
extracelular que se difunden en él. Se requiere cierto entrenamiento
sensibilidad, los fenómenos
Después se analiza el contenido del para la inserción de las sondas.
metabólicos cerebrales.
líquido.

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 2. Localización mediante inmunocitoquímica de un
péptido o una proteina
MÉTODO
OBJETIVO Y EN QUÉ CONSISTE
VARIANTES DEL MÉTODO
ALCANCES
LIMITACIONES
MATERIALES E INSTRUMENTOS
PREGUNTAS DE INVESTIGACIÓN
RESULTADOS RELEVANTES PARA LAS
NEUROCIENCIAS
MÉTODOS QUE LO COMPLEMENTAN
CONCEPTOS CLAVE PARA
COMPRENDER EL MÉTODO
INFORMACIÓN RELEVANTE
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Localización mediante inmunocitoquímica de un péptido o una proteina
 Es un procedimiento para localizar determinadas neuroproteínas en el cerebro por medio del marcaje
radioactivo o de la tinción de los anticuerpos.
 Su objetivo es identificar las neuronas que producen un neurotransmisor o neuromodulador
determinado. Por medio de la localización del péptido o la proteína que produce este neurotransmisor,
y esto se logra con la inmunocitoquímica.
 Consiste en: Exponer secciones de tejido cerebral a un anticuerpo adecuado para el péptido, asociado a 3
un tinte (generalmente es fluorescente), y posteriormente se examinan las secciones al microscopio.
 Inmunocitoquímica para detectar la presencia de los receptores mismos, que son proteínas.
 Autorradiografía: Se exponen secciones de tejido cerebral a una solución que contiene un ligando
radioactivo para un receptor (proteína) específico. Después se enjuagan las secciones, de manera que
la única radioactividad que queda en ellas es la de las moléculas del ligando que se ha unido a sus
receptores. Por último, se utilizan métodos autorradiográficos para localizar el ligando radioactivo y,
por lo tanto, los receptores.
 Los investigadores no sólo pueden determinar cuáles son las sustancias químicas que contiene una
determinada neurona, sino también las conexiones de esa neurona con otras zonas del encéfalo.
 Utilizada en el diagnóstico y tratamiento de diversas enfermedades en el a´rea médica-
 No se pueden utilizar métodos inmunocitoquímicos para localizar neurotransmisores.
Anticuerpos, Tintes. Microscopio.
 ¿Cómo localizaríamos a los neurotransmisores o sustancias específicas por medio de las proteínas?
Los métodos neuroquímicos pueden utilizarse para determinar la localización de una enorme variedad de
sustancias químicas en el encéfalo.
Tinción cerebral, Inmunocitoquimica, Microscopía.
 Inmunohistoquímica: es un procedimiento histopatológico que se basa en la utilización de anticuerpos
que mediante reacciones antígeno-anticuerpo, posteriormente reveladas enzimáticamente, permiten
identificar marcadores antigénicos en los tejidos embebidos en parafina y que luego se observan en el
microscopio óptico.
 Anticuerpo: Es una proteína producida por el sistema inmunitario del cuerpo cuando detecta sustancias
dañinas, llamadas antígenos. Los ejemplos de antígenos abarcan microorganismos (tales como
bacterias, hongos, parásitos y virus) y químicos.
 Péptidos: son moléculas compuestas a partir de los vínculos que entablan ciertos aminoácidos (que, a
su vez, son ciertas clases de moléculas de carácter orgánico). La relación entre los aminoácidos quedaba
establecida a través de lo que se conoce como un enlace peptídico.
Los métodos neuroquímicos pueden utilizarse para determinar la localización de una enorme variedad de
sustancias químicas en el encéfalo.
 mediante Inmunocitoquímica
4
Localización de un péptido

Es un procedimiento para localizar determinadas

neuroproteínas en el cerebro por medio del marcaje
radioactivo o de la tinción de los anticuerpos.

Su objetivo es identificar las neuronas que

producen un neurotransmisor o neuromodulador
determinado. Por medio de la localización del péptido
o la proteína que produce este neurotransmisor, y esto
se logra con la inmunocitoquímica..

Consiste en: Exponer secciones de tejido cerebral a un

anticuerpo adecuado para el péptido, asociado a un
tinte (generalmente es fluorescente), y
posteriormente se examinan las secciones al
microscopio.

Los péptidos y las proteínas pueden localizarse

directamente, mediante métodos
Los métodos neuroquímicos pueden utilizarse para
inmunocitoquímicos: se expone el tejido a un
determinar la localización de una enorme variedad de
anticuerpo que está unido a una molécula que se hace
sustancias químicas en el encéfalo.
fluorescente bajo una luz de una determinada longitud
de onda.

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 3. Localización mediante inmunocitoquímica de la
enzima responsable de la síntesis de una sustancia
MÉTODO
OBJETIVO Y EN QUÉ CONSISTE
VARIANTES DEL MÉTODO
ALCANCES
LIMITACIONES
MATERIALES E INSTRUMENTOS
PREGUNTAS DE INVESTIGACIÓN
RESULTADOS RELEVANTES PARA LAS
NEUROCIENCIAS
MÉTODOS QUE LO COMPLEMENTAN
CONCEPTOS CLAVE PARA
COMPRENDER EL MÉTODO
INFORMACIÓN RELEVANTE
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Localización mediante inmunocitoquímica de la enzima responsable de la síntesis de una sustancia
 Igual que el método anterior su objetivo es identificar las neuronas que producen un neurotransmisor
o neuromodulador determinado.
 Una enzima, responsable de la síntesis de un neurotransmisor, se localiza mediante 5
Inmunocitoquímica.
 Consiste en: Exponer las secciones de tejido cerebral al anticuerpo adecuado (marcado con un tinte
fluorescente) y se observan las secciones al microscopio con una luz de una determinada longitud de
onda.
 Localización Inmunocitoquimica para péptidos o proteínas
 Localización mediante inmunocitoquímica para receptores
 Autorradiografía
 Los métodos inmunocitoquímicos pueden usarse para localizar cualquier enzima.
 Este método no es útil si la sustancia a estudiar es un péptido o una proteína.
Tinción, anticuerpos. Microscopio.
¿Cómo identificar a las neuronas que producen ciertos neurotransmisores por medio de las enzimas?
Inmunocitoquímica, Técnicas de tinción, Microscopía.
 Enzimas: son moléculas de proteínas que tienen la capacidad de facilitar y acelerar las reacciones
químicas que tienen lugar en los tejidos vivos, disminuyendo el nivel de la "energía de activación" propia
de la reacción.
 Neuromodulador: Son sustancias neuroreguladoras. Sustancias químicas endógenas que pueden
regular la neurotransmisión amplificándola o reduciéndola.

La microscopia convencional requiere que el tejido se corte en finas secciones, la invención del microscopio
confocal con láser permitió ver detalles en el interior de secciones gruesas de tejido o incluso en bloques de
tejido. El microscopio confocal requiere que se tiñan con un tinte fluorescente aquellas células o partes de la
célula que nos interesan. Si se realizan múltiples exploraciones mientras se mueve la localización de la abertura,
se puede obtener un cúmulo de imágenes de secciones a través del tejido.
 1.MARCADO DE CONEXIONES NEURONALES

6
Una vez que se sabe que una determinada región
del encéfalo interviene en el control de una Su objetivo es identificar los axones de una
determinada función debemos preguntarnos región determinada y los botones terminales
cuáles son las estructuras que le aportan de dichos axones.
información y cuáles la reciben de ella.

El trazado de vías neuroquímicas se logra por

medio de la inyección de una cantidad de
químicos en las áreas cerebrales blanco, una vez
más por medio del uso de cirugía estereotáxica MÉTODOS:
para implantar una cánula (p. ej., a menudo se
utiliza la peroxidasa de rábano picante, HRP,
para marcar estas vías).

Método de marcado anterógrado (p. ej. PHA-

L).
Las moléculas del químico se absorben por las Método de marcado retrógrado, (p.ej. oro
dendritas de la neurona y se transportan a través fluorado)
del soma hacia el axón, donde viajan hasta los
Métodos inmunocitoquímicos
botones terminales.
Método de marcado transneuronal

Varios días después, las neuronas de este circuito

están llenas de las moléculas de este químico.
Por este medio es posible determinar hacia
dónde viajan las neuronas en un área cerebral.

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 Glosario
 Anticuerpo: Es una proteína producida por el sistema inmunitario del cuerpo cuando detecta sustancias dañinas, llamadas antígenos. Los ejemplos de
antígenos abarcan microorganismos (tales como bacterias, hongos, parásitos y virus) y químicos.

 Diálisis: es un proceso mediante el cual se separan sustancias por medio de una membrana artificial que es permeable para unas moléculas y no para
otras.

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 Inmunohistoquímica: es un procedimiento histopatológico que se basa en la utilización de anticuerpos que mediante reacciones antígeno-anticuerpo,
posteriormente reveladas enzimáticamente, permiten identificar marcadores antigénicos en los tejidos embebidos en parafina y que luego se observan
en el microscopio óptico.

 Membrana Semipermeable: Es una membrana que permitirá que ciertas moléculas o iones pasen a través de ella por difusión, y ocasionalmente
especializada en "difusión facilitada".

 Neurotransmisor: sustancia química cuya principal función es la transmisión de información de una neurona a otra a travesando aquel espacio
denominado como sináptico que separa dos neuronas consecutivas.

 Péptidos: son moléculas compuestas a partir de los vínculos que entablan ciertos aminoácidos (que, a su vez, son ciertas clases de moléculas de carácter
orgánico). La relación entre los aminoácidos quedaba establecida a través de lo que se conoce como un enlace peptídico.

Bibliografía
 Carlson, R. N. (2014). Métodos y procedimientos de investigación. En N. Carlson (Ed.), Fisiología de la conducta (pp. 137-171). Madrid: Pearson
Educación.
 Corr P. J. (2008). Neurofisiología. En J. Corr (Ed.), Psicología biológica (pp. 322-344). México: Mc Graw Hill Interamericana.
 Revuelto-Rey, J., Egea-Guerrero, J. J., Muñoz-Sánchez, M. A., & Murillo-Cabezas, F. (2012). La microdiálisis cerebral en el ámbito clínico
actual. Medicina intensiva, 36(3), 213-219. Recuperado de: http://scielo.isciii.es/pdf/medinte/v36n3/revision.pdf

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