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Tinción de reticulocitos
Objetivos
Aprender a realizar la tinción de reticulocitos.
Realizar un recuento de reticulocitos.
Fundamento
Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros presentes en sangre periférica, lugar donde terminan
su maduración a hematíes. Contienen restos de ARN y ribosomas que precipitan en presencia
de los coloranes vitales como el azul de metileno o el azul de cresil brillante.
El recuento de reticulocitos puede realizarse mediante método manual o por citometría de flujo.
En el caso que nos ocupa realizaremos el recuento manual. Y para ello utilizaremos el
colorante azul de cresil brillante.
Los valores normales de reticulocitos se sitúan entre el 0.5% y el 2% del total de hematíes
presentes en la sangre. La cifra obtenida permite catalogar una anemia como regenerativa o
arregenerativa. Se trata de un parámetro útil para comprobar la respuesta del organismo al
tratamiento de algunas anemias.
Material
Sangre anticoagulada con EDTA o, en su defecto, sangre capilar.
Tubo de ensayo o tubo de hemólisis.
Parafilm.
Portaobjetos.
Portaobjetos esmerilado.
Pipetas pasteur.
Colorante azul de cresil brillante (1 gramo de azul de cresil brillante y 100 ml de NaCl al
0.85%).
Aceite de inmersión.
Microscopio.
En caso de punción capilar hará falta guatis, alcohol de 70º y el contenedor de residuos
biológicos.
Técnica
1. En un tubo de hemólisis debidamente rotulado, se mezclan tres gotas de sangre con
tres gotas de colorante.
2. Mezclar suavemente, para evitar la hemólisis de los hematíes.
3. Dejar en reposo durante 15 minutos a temperatura ambiente.
4. Homogeneizar la mezcla.
5. Realizar una fina extensión sanguínea.
6. Rotular el portaobjetos.
7. Dejar secar al aire.
8. Realizar el recuento de reticulocitos utilizando el objetivo de inmersión del microscopio
óptico.
Resultados
En esta imagen podemos apreciar parte del material necesario para el correcto desarrollo de la
técnica.
Aquí podemos apreciar a un compañero depositando tres gotas de sangre capilar, previa
punción.
Mezcla de sangre con el colorante azul de cresil brillante. Imagen captada durante el reposo de
15 minutos a temperatura ambiente.
En esta imagen vemos parte del material utilizado después del tiempo de reposo y de la
creación de las extensiones sanguíneas.
Observaciones
El resultado será más fiable cuanto mayor sea el número de células contadas haciendo uso del
método manual.
Una reticulocitosis puede manifestarse en situaciones no patológicas. Por ejemplo tras una
donación de sangre o tras una hemólisis acaecida tras un ejercicio físico muy intenso.
También existen fármacos que pueden inducir la aparición de una reticulocitosis, como el ácido
acetilsalicílico o la penicilina, y la aparición de una reticulopenia, como el cloranfenicol y el
metrotexato.