CONCLUSIONES

 La práctica se realizó de manera exitosa y con los resultados esperados aunque no

exactamente se esperaba que el arrastre de los aminoácidos por parte de la fase móvil
fuera en rangos tan pequeños.
 Las pruebas para identificar aminoácidos, como la cromatografía, se basan en
características propias de cada aminoácido, como es su punto isoeléctrico y su factor
de retención (RF). Mediante un buen uso de la técnica de cromatografía, se puede
separar una mezcla compleja de aminoácidos.
 Este método, aunque no es muy sensible, se emplea con frecuencia en los primeros
estudios de la composición de las proteínas. En la actualidad ha sido desplazado por la
cromatografía líquida de alta resolución, ya que esta última es más confiable para la
cuantificación y tiene mayor sensibilidad si los aminoácidos se detectan por
fluorescencia.

ANALISIS DE RESULTADOS
La cromatografía es una técnica analítica que permite separar sustancias químicamente
semejantes utilizando su distinta capacidad de ser arrastradas por una fase móvil y de ser
retenidas por una fase estacionaria.

En cromatografía de capa fina la fase estacionaria está hidratada, por lo que se le considera
como la fase polar.

Como sólo la base de la placa queda sumergida, el solvente comienza a mojar la fase
estacionaria y asciende por capilaridad. Al recorrer la placa la fase móvil va arrastrando a las
sustancias apolares y aquellas más polares son retenidas por la fase estacionario dando lugar a
la separación.

Separación de aminoácidos.

Las aminoácidos se desplazaron en la placa de capa fina de gel de sílica, empleando como fase
móvil butano: agua: ácido acético (4:1:1). Las manchas de los aminoácidos pueden detectarse
sobre la placa desarrollada, después de dejarla secar unos minutos se roció mediante
atomizadores con un con una solución de ninhidrina. Los aminoácidos aparecen como
manchas púrpura.

La α-aminoácidos en reacción con la ninhidrina genera un producto de condensación

coloreado. La intensidad del color está relacionada con la concentración del aminoácido, por lo
tanto la prueba tiene utilidad tanto para la valoración cuantitativa como para la valoración
cualitativa de los aminoácidos.

 La ninhidrina reacciona rápidamente con el grupo α -amino oxidándolo: entre la

ninhidrina y el aminoácido ocurre una reacción de adición núcleofilica, donde se
eliminan dos moléculas de agua (deshidratación).
  En medio alcalino y en presencia de calor, el compuesto formado se descarboxila,
produciendo dióxido de carbono y formando la imina correspondiente.

 La imina se hidroliza produciendo un anión diceto aminado y un aldehído.

 El producto formado reacciona con un exceso de ninhidrina para producir el complejo

coloreado (azul violeta) que se conoce con el nombre de púrpura de Ruhemann:


Excepto tres aminoácidos. Todos dan el color azul violeta con el reactivo de la ninhidrina. Los
tres aminoácidos son: la prolina y la hidroxiprolina que dan una coloración amarilla y el
aminoácido asparagina que da una coloración café, debido a la presencia del grupo amido en la
cadena lateral.

La constante RF (Ratio of Front) es simplemente una manera de expresar la posición de un

compuesto sobre una placa como una fracción decimal, mide la retención de un componente.
Se define como: RF= Distancia de la muestra desde el origen/Distancia del eluyente desde el
origen
La distancia recorrida por el compuesto se mide generalmente desde el centro de la mancha,
los cálculos se simplifican si el denominador es 10. Para que los RF sean reproducibles deben
ser fijadas una serie de condiciones (Espesor de la placa, fase móvil, fase estacionaria, cantidad
de muestra). El máximo valor de RF que se puede alcanzar es de 1, lo ideal es un RF entre 0.55
y 0.7.

Si se sospecha que dos compuestos son muy parecidos se eluyen sobre la misma placa con el
mismo eluyente u otros de menor polaridad, hasta apreciar una separación mínima. En este
caso no se pueden usar reveladores químicos, ya que alterarían los compuestos, sino indicador
ultravioleta.

La distancia recorrida por el eluyente es de: 6.5 cm

 Aspartato: Rf=1.7 cm/6.5 cm=0.26

 Lisina:Rf= .8 cm /6.5 cm=0.12
 Arginina:Rf=1 cm /6.5 cm=0.15
 Alanina: Rf=1.3 cm /6.5 cm=0.20
 Histidina: Rf=.4 cm /6.5 cm=0.061

Lo ideal es que el valor de los factores de retención de los solutos de una muestra oscile
entre 1 y 10. Valores muchos menores que la unidad indican que el analito sale de la
columna en un tiempo próximo al tiempo muerto. Valores mucho mayores indican un
tiempo de elución excesivamente largo.