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Las células NK representan una importante primera línea de defensa contra la infección
viral y el cáncer, y también están involucradas en la homeostasis tisular. Los estudios de la
activación de las células NK en la última década han revelado que son capaces de responder
a los estímulos inflamatorios provocados por el daño tisular y contribuyen tanto a la
progresión como a la resolución de las enfermedades. La exacerbación de la respuesta
inflamatoria a través de las interacciones entre las células efectoras inmunitarias facilita la
progresión de la enfermedad del hígado graso no alcohólico (NAFLD) en esteatosis, cirrosis
y carcinoma hepatocelular (HCC). Cuando se produce daño hepático, la activación de los
macrófagos es crucial para iniciar el diálogo cruzado con las células vecinas presentes en el
hígado, incluidos los hepatocitos y las células NK, y se reconoce cada vez más la importancia
de esta interacción para moldear la respuesta inmune en la enfermedad hepática. A
través del proceso de fibrosis autolimitada, aunque el daño hepático persistente dará lugar
a fibrosis crónica y pérdida de la organización y función del tejido. La actividad citotóxica
de las células NK juega un papel importante en la inducción de apoptosis de células
estrelladas hepáticas y, por lo tanto, limita la progresión de la fibrosis. Alternativamente,
en algunas enfermedades, como el HCC, las células NK pueden desregularse, promoviendo
un estado inmunosupresor en el que los tumores pueden escapar de la vigilancia
inmune. Esta revisión describe la comprensión actual de las contribuciones de las células
NK a la inflamación tisular y las enfermedades hepáticas metabólicas y el esfuerzo continuo
para desarrollar productos terapéuticos que se dirijan a la función inmunorreguladora de
las células NK.
Introducción
El hígado juega un papel crítico en el funcionamiento como un sitio metabólico e
inmunológico. Recibe un doble suministro de sangre; un cuarto es sangre rica en oxígeno entregada
por la arteria hepática, mientras que las tres cuartas partes restantes son sangre que drena del tracto
gastrointestinal y del bazo a través de la vena porta, enriquecida en antígeno dietético y ambiental
( 1 ). Las células endoteliales sinusoidales del hígado (LSEC) forman las paredes de los sinusoides
hepáticos y presentan numerosas fenestraciones, permitiendo que la sangre entre en contacto con
los hepatocitos subyacentes. El flujo sanguíneo lento en los sinusoides hepáticos permite una mejor
interacción entre los linfocitos circulantes, el endotelio sinusoidal hepático y los hepatocitos para
facilitar el aclaramiento de los antígenos derivados de las células hepáticas ( 2).) Para compensar la
alta exposición a los antígenos circulantes, el hígado debe mantener un microambiente tolerante en
el que haya una supresión constante de bajo nivel de las respuestas inmunes. Las células inmunes
hepáticas se educan para permitir la tolerancia inmunológica a antígenos autoantígenos,
ambientales y dietéticos, durante la homeostasis, pero pueden iniciar respuestas innatas tanto
innatas como adaptativas en el contexto de la infección ( 3 ). En humanos y ratones, el hígado está
compuesto principalmente de hepatocitos (80% de la masa hepática), mientras que el 20% restante
está formado por células no parenquimatosas que incluyen linfocitos, células mieloides, células de
Kupffer (macrófagos residentes en el hígado, KC) , HSC y LSEC ( 4 , 5)) Las células NK están
enriquecidas en el hígado, representando del 25 al 30% de los linfocitos hepáticos humanos en
comparación con el 10-20% de los linfocitos totales de células mononucleares de sangre periférica
(PBMC) ( 6 ). Sin embargo, durante las hepatitis B y C crónicas, el número de células NK aumenta
mediante el reclutamiento por quimioquinas secretadas por KC (7,8) y la supervivencia de las
células NK se potencia por la producción de citocinas de células de Kupffer, LSEC y células T (9)
. La alta carga inmunológica presente durante la infección, una gran proporción de los cuales son
células NK, da como resultado un entorno inmune único.
Las células NK están ampliamente distribuidas en los órganos linfoides (médula ósea e hígado) y
no linfoides (sangre periférica, pulmón y útero) y cubren la brecha entre la respuesta inmune innata
y la adaptativa. Realizan inmunosurvencias al explorar células a través desus receptores
inhibidores [NKG2A y la familia Ly-49 en ratones, y el receptor killer-inmunoglobulina-like (KIR)
y NKG2A en humanos] para determinar si se expresa el complejo de histocompatibilidad auto
mayor (MHC) correcto y para garantizar la tolerancia contra células sanas . En humanos y ratones,
las células NK pueden detectar células infectadas, transformadas o estresadas con sus receptores
activadores (NKG2D y NKp46), lo que resulta en su activación. La activación de las células NK se
puede desencadenar de muchas maneras, incluida la reticulación de los receptores activadores
(NKG2D y NKp46) con la separación simultánea de los receptores inhibidores (NKG2A) o mediante
diversas citocinas tales como IFN tipo I, IL-2, IL-12, IL- 15 e IL-18. Adicionalmente,10 ). Tras la
activación, las células NK pueden volverse citotóxicas y liberar gránulos líticos (perforina,
granzimas) o inducir señales de muerte a través de la expresión de receptores de muerte (TRAIL /
TRAIL-R, FasL / Fas) ( 11 , 12 ). Mientras que las células NK son capaces de mediar en sus funciones
de manera innata e independiente del antígeno, investigaciones recientes han sugerido que las
células NK residentes en el hígado son capaces de adquirir memoria específica para el antígeno. En
estudios que utilizaron modelos murinos, se demostró que se genera una respuesta de memoria de
células NK persistente y transferible a haptenos y virus y que la retención de esta población de
memoria requiere la expresión de CXCR6 ( 13).) Esta memoria NK específica de antígeno se ha
estudiado aún más en primates no humanos, donde se ha mantenido hasta 5 años ( 14 ). Sin
embargo, los mecanismos subyacentes para la generación de respuestas de memoria NK aún no se
han dilucidado.
La interacción entre las células NK y sus tejidos circundantes y las células inmunes conforman la
maduración y la función de las células NK. En el hígado, el diálogo cruzado entre las células NK y
los macrófagos durante varias fases de la inflamación inducida por lesión hepática permite a las
células NK regular los macrófagos tanto inflamatorios como antiinflamatorios (Figura 1 ). Los
macrófagos hepáticos desempeñan un papel central en la patogénesis de la hepatopatía crónica
( 15 ). Pueden ejercer respuestas duales dependiendo de su origen, la fase de la respuesta inmune
del hígado, la etapa de desarrollo de una enfermedad o el perfil agudo / crónico de una
enfermedad. Los macrófagos pueden diferenciarse en un amplio rango de M1 proinflamatorio /
inmunorregulador / perfil de macrófago M2 alternativo en condiciones inflamatorias durante la
lesión hepática ( 16).) Los macrófagos M1 son activados por citoquinas proinflamatorias (IFN-γ, IL-
12 o TNF-α) y / o productos microbianos (LPS) y pueden fagocitar bacterias y virus, así como liberar
citocinas y quimiocinas proinflamatorias. Los macrófagos M2 son inducidos por IL-4, IL-10 e IL-
13 producidos por diversos tipos de células ( 16 ). Hay varios subtipos de macrófagos M2 cuyas
funciones varían entre la cicatrización de heridas (actividad fibrogénica y reparación tisular), la
función restaurativa (resolución de matriz y reparación tisular) o la actividad proinflamatoria
("respuesta inmune de desviación").
FIGURA 1
Además, la función de las células NK puede estar formada por inflamasomas, que se desencadenan
en respuesta al daño celular. Los componentes inflamamasoma se expresan en hepatocitos, KC y
macrófagos y contribuyen a la inducción de la inflamación hepática a través de la muerte celular
piropéptica y la liberación de alarminas, así como la escisión y secreción de IL-1β e IL-18. El sensor
de inflamasoma NLRP3 responde al ATP extracelular liberado de las células moribundas y a las
especies de oxígeno reactivas desencadenadas por el daño del fagosoma por la absorción de
partículas ( 17 , 18 ). Los ratones deficientes en NLRP3 están protegidos en modelos de infección
hepática inducidos por la dieta y algunos de infección ( 19 - 24) El ADN bicatenario viral puede
desencadenar el inflamasoma uniéndose a AIM2 expresado en los hepatocitos ( 25 ). En el caso de la
infección por el virus de la hepatitis C (VHC), se ha demostrado que tanto los hepatocitos como KC
liberan IL-1β e IL-18. En particular, KC parece ser responsable de la activación de las células NK
a través de este mecanismo ( 25 - 27 ). Mientras que la muerte celular y la liberación de alarmin
exacerban la inflamación hepática, la IL-18 ejerce una función protectora para limitar la lesión
hepática. Esto puede deberse en parte a la activación mediada por células NK de otros mediadores
inmunes, que incluyen la inducción de PD-L1 y FasL, así como el papel esencial de la citocina en la
producción de memoria NK ( 28 - 31).) Estos hallazgos apoyan el papel fisiopatológico de los
inflamasomas en la inflamación hepática y la lesión hepática.
El hígado está poblado por células convencionales NK (cNK) y células residentes NK que se
distinguen por la expresión mutuamente exclusiva de las integrinas DX5 y CD49a,
respectivamente. Las células NK de ratón generalmente se identifican por el fenotipo de superficie
celular de CD3 - DX5 + . La expresión del receptor activador de NK, NKp46, también se usa como un
marcador fenotípico en ratones y humanos, con células cNK definidas por el fenotipo de CD49a -
NKp46 + DX5 + CD3 - , y células NK residentes en hígado identificadas por
CD49a + NKp46 + DX5 - CD3 - , con baja expresión de CD11b y Ly49, y alta expresión de TRAIL
( 38) Durante la homeostasis, las células cNK son altamente migratorias, circulan por todo el cuerpo
y se encuentran principalmente en la médula ósea, la sangre y el bazo. Las células cNK activadas
producen una gran cantidad de citoquinas, pero muestran una baja actividad
citolítica. Recientemente, las células NK residentes de hígado se han identificado como miembros
de células linfoides innatas (ILC) y constituyen las ILC del grupo 1, junto con las ILC1 ( 39 - 42 ). Tanto
las células NK como las ILC1 se caracterizan por su expresión del factor de transcripción T-bet, pero
las células NK son distintivas en su expresión de EOMES. Aunque no está en el alcance de esta
revisión, hay muchos otros que cubren la biología de la ILC, la nomenclatura y las grandes
diferencias en la regulación transcripcional, la expresión del receptor y la localización que pueden
ser útiles ( 43 -45 ). Las células NK residentes de hígado tienen más citotoxicidad, pero menos
producción de IFN-γ después de la estimulación de IL-12 / IL-18 que las células NK en la sangre y
el bazo en condiciones homeostáticas ( 31 ). Por el contrario, un informe reciente demuestra que los
ILC1 pueden producir niveles más altos de citocinas (IFN-γ) que las células cNK después de la
estimulación con PMA / ionomicina ( 46 ). Dentro del hígado, las células CD49a + DX5 - NK se
encuentran a una frecuencia significativamente más alta en comparación con otros sitios (médula
ósea, bazo, sangre) y residen selectivamente en sinusoides hepáticos. Liver CD49a + DX5 - Las células
NK expresan altos niveles de TRAIL y tienen actividad citotóxica contra las células
tumorales. TRAIL +Las células NK predominan en los ratones fetales y neonatales, y en la edad
adulta están presentes en el hígado, pero no en el bazo. Tissue-residente CD49a + DX5 - también se
encuentran las células NK en el útero y la piel ( 46 ).
Las células NK humanas son linfocitos CD3 - CD56 + y se pueden dividir en dos subconjuntos en
función del nivel de expresión de CD56 y CD16. Las células CD16 + CD56 dim NK representan el 90%
de las células NK de la sangre y el bazo y demuestran una actividad citotóxica mayor que las células
NK brillantes CD16 - CD56 al producir altos niveles de granzimas y
perforina. Las células CD16 + CD56 dim NK tienen una alta expresión de KIR y expresan un receptor
de IL-2 de afinidad intermedia que da como resultado una baja capacidad de expansión bajo
estimulación con IL-2. Representa solo el 10% de las células sanguíneas NK, CD16 - CD56 brillanteLas
células NK predominan en los órganos linfoides secundarios, como los ganglios linfáticos. En el
hígado, ambas poblaciones están presentes con la misma frecuencia. Las células
NK brillantesCD16 - CD56 exhiben menos actividad citolítica que las células NK CD16 + CD56 dim pero
demuestran la misma citotoxicidad después de la activación prolongada. CD16 - Las células
NK brillantes CD56 expresan receptores de IL2 de afinidad alta e intermedia facilitando su in vivo e in
vitroexpansión bajo dosis bajas de IL-2. Además, son más receptivos a la estimulación por
citoquinas proinflamatorias. Tras la activación, producen citocinas (IFN-γ, IL-10, GM-CSF y TNF-
α) y quimiocinas. Un estudio reciente sugirió que las células NK brillantes CD16 - CD56 podrían
representar células NK residentes de hígado con alta expresión de CD69, un marcador de activación
y expresión de CXCR6 y CCR5 para retenerlas en el hígado ( 47 ). El desarrollo y la diferenciación de
las células NK humanas que residen en el hígado aún no están definidas. Como efecto antiviral, las
células NK secretan granzima B y perforina para lisar las células infectadas por virus e inducir su
apoptosis y secretar citocinas tales como TNF-α e IFN-γ para promover la respuesta inmune
( 48).) En particular, la producción de NK IFN-γ tiene efectos citotóxicos directos sobre las células
infectadas por virus, provoca un estado antiviral en las células no infectadas e induce la quimiotaxis
para reclutar células inmunes adaptativas ( 6 , 49 , 50). Los pacientes con VHC con infección crónica
muestran respuestas pobres de células NK en comparación con los pacientes con infección por VHC
resuelta. Los estudios in vitro sobre cocultivos de células NK con PBMC CD33 +condicionadas con
VHC demostraron un nivel reducido de producción de IFN-γ pero ningún efecto sobre la liberación
de granzima B. Se ha demostrado que esta supresión de la producción de IFN-γ derivada de células
NK está mediada por CD33 + CD11b lo HLA-DR locélulas supresoras derivadas de mieloides (MDSCs)
a través de una inhibición dependiente de arginasa-1 de la activación de mTOR (Figura 2 )
( 51 ). Estos resultados identifican la inducción de MDSC en la infección por VHC como una potente
estrategia de evasión inmune que suprime las respuestas de células NK antivirales.
Figura 2. La supresión de la producción de
IFN-γ derivada de células NK está mediada
por células supresoras derivadas de
mieloides CD33 + CD11b lo HLA-
DR lo (MDSCs) después de una reducción en
la arginina disponible a través de un
mecanismo Arg-
1. Durante la infección del VHC, la proteína del
núcleo del VHC induce el desarrollo de
MDSC. Después de la pérdida de arginina, la ruta de
mTOR es incapaz de traducir eficazmente el ARNm
de IFN-γ y la posterior pérdida de producción de
proteína de IFN-γ y de células NK en el hígado da
como resultado la evasión inmune por el VHC.
las células DX5 +NKp46 + cNK productoras de IFN-γ aumentan durante la esteatohepatitis no
alcohólica (NASH), una causa de fibrosis, y sesgan la polarización del KC activado y los macrófagos
del hígado hacia un perfil M1, en lugar de hacia una fibrosis- inducir el perfil de macrófagos M2
( 60) Además, las células NK liberan IL-22 tras la activación, que puede ser anti-fibrogénica ( 61 - 63 ).
Mientras que IL-22 juega un papel beneficioso durante los episodios inflamatorios agudos, la
producción prolongada y excesiva de IL-22 puede tener el efecto opuesto ( 62 ). La exposición
continua a señales proliferativas y antiapoptóticas puede hacer que las células cambien de fenotipo
y se vuelvan cancerosas, como se demuestra en ratones transgénicos IL-22 donde la IL-22 prepara
al hígado para que sea más susceptible al desarrollo tumoral ( 64 ). Además, en pacientes infectados
con HBV y en ratones transgénicos de HBV, IL-22 exacerba la inflamación crónica y el desarrollo
de fibrosis promoviendo respuestas de células Th17 en el hígado ( 65 - 68) La naturaleza dual de la IL-
22 y, por extensión, las células NK, entre la protección y la inflamación puede depender del tejido
y de las afecciones inflamatorias. Debido a los desafíos técnicos, es difícil evaluar qué subconjunto
específico de células NK (es decir, células NK convencionales o que residen en el hígado) tiene
efectos anti-fibrogénicos. La mayoría de los estudios in vitro usan células cNK de sangre humana o
bazos de ratones y los experimentos de agotamiento in vivo utilizando anticuerpos no eliminan de
manera eficiente todas las células NK residentes de hígado. Pocas células NK residentes de hígado
se pueden purificar a partir de un hígado de ratón, lo que prohibe significativamente la
transferencia adoptiva.
A diferencia de las propiedades anti-fibrogénicas de algunas células NK, otros estudios han
demostrado que las células NK pueden mejorar la lesión hepática al matar los hepatocitos
estresados mediante el compromiso de NKG2D, NKp30 y / o TRAIL. Además, pueden lograr esto
a través de la apoptosis inducida por IFN-γ, lo que lleva al desarrollo de la fibrosis ( 69 - 74 ). Por
ejemplo, los pacientes con NASH muestran un aumento en la expresión de Fas de hepatocitos y
apoptosis, que se correlaciona con la gravedad de la enfermedad ( 75 ). Este papel patogénico de las
células NK también se ha identificado en las enfermedades hepáticas autoinmunes humanas, como
la cirrosis biliar primaria, donde las células NK promueven la muerte de las células epiteliales
biliares a través deTRAIL y liberando citocinas que promueven la inmunidad adaptativa ( 76 , 77 ). En
paralelo, las células NK productoras de IL-10 retrasan la cirrosis biliar primaria aniquilando la
respuesta inmune adaptativa en la muerte de CD autólogas y células T ( 78 ).
Los enfoques terapéuticos se han diseñado para usar mAb específico para dirigirse a moléculas
coinhibitorias (es decir, inhibidores del punto de control inmunitario) que detienen las respuestas
inmunitarias contra las células tumorales ( 96 ). El bloqueo de estos inhibidores del punto de
control inmunitario liberaría las células inmunitarias, incluidas las células NK, de los mecanismos
inhibidores para restaurar su actividad inmunitaria completa. Estos inhibidores del punto de
control inmune están bien descritos en el contexto del agotamiento de las células T ( 97 , 98).) Incluyen
el antígeno 4 de linfocitos T citotóxicos (CTLA-4), la muerte programada 1 (PD-1), el gen 3 de
activación de linfocitos (LAG-3), la inmunoglobulina de células T y el dominio de mucina 3 (TIM-3
), y atenuador de linfocitos B y T (BTLA). La expresión de PD-1 y Tim-3 en las células NK hepáticas
de pacientes con HCC relacionado con el VHB aumenta y también se asocia con el agotamiento de
las células inmunes ( 99 , 100 ). Los resultados prometedores de los ensayos clínicos que usan mAb
contra los inhibidores del punto de control inmune también podrían ser una estrategia terapéutica
probable para la enfermedad hepática, especialmente en combinación con fármacos que mejoran
la activación de las células NK. Estudios recientes han demostrado que la expresión de Tim-3 en
periféricos CD56 +Las células NK se correlacionan con la expresión de marcadores serológicos de
fibrosis hepática en pacientes con esquistosomiasis avanzada ( 101 ). El bloqueo de la ruta PD-1,
CTLA-4 o Tim-3 con mAb podría proteger a los pacientes de la fibrosis, la cirrosis y el CHC mediante
la restauración de la función de las células NK. Varios mAbs contra PD-1 (ipilimumab,
pembrolizumab, nivolumab), PD-L1 (atezolizumab, durvalumab) o CTLA-4 (tremelimumab / CP-
675,206) se están probando actualmente en ensayos clínicos contra el HCC.
Resumen y conclusión
Las células NK desempeñan papeles cruciales en la regulación de enfermedades inflamatorias
crónicas como la fibrosis tisular y el cáncer. Por lo tanto, la comprensión de la inmunorregulación
mediada por NK proporcionaría información sobre el diseño de productos terapéuticos contra la
infección viral y las enfermedades inflamatorias. Las células NK tienen un papel protector en el
desarrollo de la fibrosis hepática en el modelo de desarrollo NAFLD donde regulan el estrecho
equilibrio entre la inflamación del hígado y la reparación a través de la polarización de los
macrófagos. Por lo tanto, la identificación de las células NK como reguladores aguas arriba de la
función de los macrófagos proporciona un nuevo objetivo celular para modular la inflamación
mediada por macrófagos en las enfermedades hepáticas crónicas. La exploración adicional de la
interacción entre las células mieloides y las células NK puede ayudar a identificar los reguladores
moleculares clave que pueden resolver la inflamación crónica y restaurar la homeostasis inmune.