Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 26 (2016) 4769-

4774

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Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters

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determinantes estructurales de diphenethylamines para la

interacción con el j receptor opioide: Síntesis, la
farmacología y los estudios de modelado molecular
Elena Guerrieri una,y, Marcel Bermúdez segundo,y, Gerhard Wolber segundo, Ilona P. Berzetei-
Gurske do,
Helmut Schmidhammer una, Mariana Spetea una,⇑
una Departamento de Química Farmacéutica, Instituto de Farmacia y Centro de Biociencias Moleculares Innsbruck (CMBI),
Universidad de Innsbruck, Innrain 80-82, A-6020 Innsbruck, Austria
segundo Instituto de Farmacia, Universidad Libre de Berlín, D-14195 Berlín, Alemania
do División de Biociencias, SRI International, 333 Ravenswood Avenue, Menlo Park, CA 94025, Estados Unidos

información del resumen

artículo
los j estructura opioide (KOP) de cristal receptor en una forma inactiva estado
Historia del artículo:
ofrece hoy en día una plataforma valiosa para investigación de la función del
Recibido 01 de julio
2016
receptor. Se describe la síntesis, evaluación farmacológica y cal- acoplamiento
Revisado 10 de agosto laciones de ligandos del receptor KOP de la clase de diphenethylamines
de el año 2016 utilizando una estructura activa similar del receptor KOP alcanzado por
Aceptado 11 de agosto simulaciones de dinámica molecular. Las relaciones estructura-actividad
de el año 2016 derivadas de estudios computacionales estaba en conformidad con las
Disponible en Internet el
actividades farmacológicas de Lamines diphenethy- dirigidos al receptor KOP
12 de agosto de el año
2016 establecido por unión de competición y activación de la proteína G en ensayos in
vitro. Nuestro análisis identificó que la unión de agonistas de los resultados en
palabras clave: ruptura del enlace Arg156-Thr273 hidrógeno, que estabiliza la conformación del
j receptor receptor inactiva, y un enlace de hidrógeno fundamental con His291 se forma.
opioide Los compuestos con un grupo fenólico 4-hidroxi no forman el enlace de
difenetilamin hidrógeno con His291, un residuo importante para KOP afinidad y actividad
a Agonista agonista. El tamaño de la N-sustituyente ofrecida por el bolsillo hidrofóbico
Antagonista
formado por Val108, Ile316 y Tyr320 influye considerablemente de unión y
agonista
selectividad, con el límite de tamaño n-alquilo siendo cinco átomos de carbono,
parcial SAR
dinámica molecular mientras sustituyentes voluminosos se vuelven agonistas KOP en antagonistas.
Por lo tanto, la combinación de estrategias de modelado y experimentales
moleculares proporciona un marco inicial para la comprensión de las
características estructurales de diphenethylamines que son esenciales para
promover la afinidad de unión y selectividad para el receptor KOP, y puede
estar implicada en la transducción del evento de unión del ligando en cambios
moleculares, en última instancia que conduce a la activación del receptor. un
residuo importante para KOP afinidad y actividad agonista. El tamaño de la N-
sustituyente ofrecida por el bolsillo hidrofóbico formado por Val108, Ile316 y
Tyr320 influye considerablemente de unión y selectividad, con el límite de
tamaño n-alquilo siendo cinco átomos de carbono, mientras sustituyentes
voluminosos se vuelven agonistas KOP en antagonistas. Por lo tanto, la
combinación de estrategias de modelado y experimentales moleculares
proporciona un marco inicial para la comprensión de las características
estructurales de diphenethylamines que son esenciales para promover la
afinidad de unión y sustituyentes voluminosos se vuelven agonistas KOP en antagonistas. Por lo
selectividad para el tanto, la combinación de estrategias de modelado y experimentales moleculares
receptor KOP, y proporciona un marco inicial para la comprensión de las características
puede estar estructurales de diphenethylamines que son esenciales para promover la
implicada en la afinidad de unión y selectividad para el receptor KOP, y puede estar implicada
transducción del en la transducción del evento de unión del ligando en cambios moleculares, en
evento de unión del última instancia que conduce a la activación del receptor. Ile316 y Tyr320
ligando en cambios considerablemente influye en la unión y la selectividad, con el límite de tamaño
moleculares, en n-alquilo siendo cinco átomos de carbono, mientras sustituyentes voluminosos se
última instancia que vuelven agonistas KOP en antagonistas. Por lo tanto, la combinación de
conduce a la estrategias de modelado y experimentales moleculares proporciona un marco
activación del inicial para la comprensión de las características estructurales de
receptor. un residuo diphenethylamines que son esenciales para promover la afinidad de unión y
importante para KOP selectividad para el receptor KOP, y puede estar implicada en la transducción del
afinidad y actividad evento de unión del ligando en cambios moleculares, en última instancia que
agonista. El tamaño conduce a la activación del receptor. Ile316 y Tyr320 considerablemente influye
de la N-sustituyente en la unión y la selectividad, con el límite de tamaño n-alquilo siendo cinco
ofrecida por el átomos de carbono, mientras sustituyentes voluminosos se vuelven agonistas
bolsillo hidrofóbico KOP en antagonistas. Por lo tanto, la combinación de estrategias de modelado y
formado por Val108, experimentales moleculares proporciona un marco inicial para la comprensión
Ile316 y Tyr320 de las características estructurales de diphenethylamines que son esenciales para
influye promover la afinidad de unión y selectividad para el receptor KOP, y puede
considerablemente estar implicada en la transducción del evento de unión del ligando en cambios
de unión y moleculares, en última instancia que conduce a la activación del receptor.
selectividad, con el © 2016 Elsevier Ltd.
Todos los derechos
límite de tamaño n- reservados.
alquilo siendo cinco
átomos de carbono,
mientras

Como un miembro prominente de la gran familia
de siete receptores acoplados a proteínas G
transmembrana brana (7TM-GPCRs), el receptor
(KOP) opioide kappa ha sido objeto de intenso
enfoque para dis- covery esfuerzos en los últimos
años de drogas. El receptor KOP se activa por el
péptido ligandos endógenos, las dinorfinas, y señales
a través del heterotrimeric / o proteínas Gi.1 Dada la
importancia del sistema de receptor / dinorfina KOP
como un potente regulador de una multitud de
respuestas neurofisiológicas y de comportamiento,
modularización ción de este sistema es considerado
como una estrategia prometedora para el tratamiento
de trastornos neuropsiquiátricos humanos y otros,
INCLUYENDO dolor, adicción a las drogas,
trastornos del humor (por ejemplo, depresión y iety
anx-), condiciones neurológicas (por ejemplo,
epilepsia) y enfermedades de la piel picazón. 2-13
Numerosas líneas de evidencia han acumulado
⇑ Autor correspondiente. Tel .: +43 512 507 58 277; Fax: +43
512 507 58299.
Dirección de correo electrónico: Mariana.Spetea@uibk.ac.at
(M. Spetea).
y Estos autores contribuyeron igualmente a este trabajo.
señalando el receptor KOP como un sustrato
importante en comorbilidad entre trastornos adictivos
y depresivos, o el dolor crónico y los trastornos del
estado de ánimo.9,10
estrategias diferenciales en la modulación de los
efectos aguas abajo de KOP señalización implican
desarrollo de ligandos selectivos que pueden activar o
bloquear el receptor receptor. agonistas KOP atraen
una considerable atención por su capacidad para
producir analgesia con- cabo potencial de abuso. Por
otro lado, los agonistas KOP están limitados por los
efectos secundarios (por ejemplo, disforia, sedación,
efectos psicotomiméticos),1,5,14 mientras que los
antagonistas KOP y agonistas parciales tienen
potencial para emerger como antidepresivos,
ansiolíticos y medicamentos anti-tivos adicciones.15-19
interacciones ligando-receptor representan la base
de la mediación de muchas respuestas
neuroconductuales por ambos ligandos endógenos y
exógenos, y su afinación representa la meta de una
gran variedad de tratamientos farmacológicos.
detalles moleculares de estas interacciones están
surgiendo hoy en día, con el recientemente
 http://dx.doi.org/10.1016/j.bmcl.2016.08.031
0960-894X / © 2016 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.
R1 R2 R3
1 (HS665) CBMOHH
3 2 (HS666) CPMOHH
mecanismo (s) de activación, y estructurales características que promueven
770 E. Guerrieri et al. / Bioorg. Medicina. Chem. Letón. 26 (2016) 4769-4774

estructura cristalina resuelto del receptor KOP humano, 20 por lo tanto

proporcionando una nueva plataforma para la investigación sobre la función
del receptor y
R2
mecanismo (s) de activación, y estructurales características que promueven
3
NR1 norte-DO3H7 OHH
R3 3
ligando de afinidad y selectividad de unión. 21-26 La 4 4 norte-DO4H9 OHH
elucidación de las interacciones del receptor de 5 norte-DO5H11 OHH
ligando y estructura-función de las relaciones de la 6 norte-DO6H13 OHH
feniletilo OHH
receptor de KOP representan pasos importantes hacia 7
8 CBMHOH
el desarrollo de mejores tratamientos farmacológicos 9 CPMHOH
para los trastornos humanos, en el que el receptor de
KOP juega un papel clave.
Por lo tanto, un objetivo importante de nuestros
laboratorios es el diseño
y evaluación biológica de los ligandos del receptor de Figura 1. Estructuras de diphenethylamines
investigados 1-9.
geted-Tar KOP estructuralmente distintas con el fin de
evaluar específicamente la contribución de la
receptor KOP en neurobiología sistema opioide, y además,
proporcionar nuevas oportunidades para el descubrimiento R1 R1
de potencial tera- NUEVA NUEVA do
R 2
HAMPSHIRE HAMPSHIRE2 NR 7, 9
1 una segundo
R2 R
agentes péuticos.27-29 Hemos divulgado recientemente un
difenetilamina ser- R2
IES de ligandos KOP, ejemplificada por 1 (HS665, 2
Figura 1), Como uno de los derivados más interesantes
en términos de muy alta afinidad de unión
y la selectividad para el receptor KOP, 28,29 complementado
por alto 1
12 R = OCH3; R = 10 R1 = OCH3; R2 14 R1 = OCH3; R2 = H; R =
potencia y la eficacia in vivo.28 La N-ciclopropilmetilo H =H fenetilo
(N-CPM) sustituido analógica 2 (HS666, Figura 1) 13 R1 = H; R2 = 11 R1 = H; R2 = 15 R1 = H; R2 = OCH3; R = CPM
También se muestra favorable OCH3 OCH3
propiedades relacionadas con la actividad en el Esquema 1. Síntesis de derivados de difenetilamina 7 y 9.
receptor KOP como un agonista parcial potente. Reactivos y condiciones: (a) bromuro de fenetilo, K2CO3,
Hemos descrito que ciclobutilmetilo (CBM) y los DMF, 80 DO; (B) bromuro de alquilo respectivo,
K2CO3, DMF, 80 ° C; (C) etanotiolato de sodio,
grupos de CPM (1 y 2, respectivamente) en el
DMF, 130 ° C.
nitrógeno son más adecuados para la interacción con
el receptor de KOP de constituyentes sub-n-alquil
(derivados
Sobre 3-6,Figura
la base 1).28
de la estructura cristalina de la O NH2 H
actualmente disponible
una norte
+
receptor KOP humano en una la presente OH
O
conformación inactiva,20 H
O s
estudio se realizó para alcanzar un estado de dieciséis 17 HO 18e
g
receptor activo-como apply- dinámica molecular u
n
NU
EV
ING (MD) simulaciones. El modelo de receptor d A
do o HA
generado se siguiente utiliza para caracterizar el H 19 MP
8 O SH
modo de unión de derivados de difenetilamina IR
receptor de focalización KOP 1-6 (Figura 1). E

Además, la importancia del patrón de sustitución

en el nitrógeno y la posición del grupo hidroxilo
fenólico en la interacción con el receptor KOP se
investigaron después de la síntesis
de los nuevos derivados 7-9 (Figura 1). Estamos en este informe la in vitro y G activación de la proteína del
receptor de KOP unión por 7-9 en comparación con
los análogos previamente reportados 1 y 2,
paralelismos leled por investigaciones modo de estos
ligandos KOP vinculante.
Los nuevos diphenethylamines 7-9 se
prepararon como se representa en Esquemas 1 y 2.
(3-metoxifenil) -N-phenethaneamine (10) y (4-
metoxifenil) -N-phenethaneamine (11) se
prepararon a partir de 2- etanamina (3-metoxifenil)
(12) y 2- etanamina (4-metoxifenil) (13),
respectivamente por alquilación con bromuro de
fenetilo.30 A continuación, 10 y 11 se alquilaron con
el respectivo bromuro de alquilo en DMF para
proporcionar 14 y 15, y luego convertida en los
respectivos fenoles 7 y 9 por escisión del éter con
etanotiolato de sodio en DMF (Esquema 1).
Compuesto 8 era sin- thetized partiendo de 4-
hidroxifenilacético (16), que se hizo reaccionar con
fenetilamina (17) en CH2Cl2 en presencia de EDCI
y HOAt para proporcionar amida 18. BH3
reducción en THF dio la amina 19, que era N-
alquiló con bromuro de CBM en CH3CN en
presencia de NaHCO3 para dar el fenol 8 (esquema
2).
Los nuevos diphenethylamines diana 7-9 se
examinaron para la afinidad y selectividad de unión
para KOP, los receptores de la fregona y el DOP en
ensayos de competición utilizando membranas de
ovario de hámster chino (CHO), las células que
expresan establemente uno de los receptores humano
opi- OID de unión, de acuerdo con el reportado
procedimiento.28 su fun-
actividad cional se evaluó en G ensayos de activación
de la proteína utilizando guanosina 50-O- (3- [35S]
tio) trifosfato ([35S] GTPcS) de unión y las células CHO
que expresan los receptores KOP humanos, como se
describe anteriormente.28 Su perfil de actividad
opioide in vitro se resume en tabla 1. Para facilitar la
comparación con nuestros anteriores esfuerzos de
búsqueda y salvamento, se incluyeron los
diphenethylamines 1-6. Los estudios de unión a
receptores
demostró que la introducción de un grupo fenetilo en
el nitrógeno conducido a una reducción considerable
en la afinidad del receptor KOP (7: Ki = 211 nM) en
comparación con el informó anteriormente Logues
ana- (tabla 1). Se encontró que la afinidad del receptor
KOP de 7
Esquema 2. Síntesis del derivado difenetilamina 8. Reactivos y
condiciones:
(a) EDCI, HOAt, CH2Cl2, rt; (B) 1 M de BH3 · THF, THF, reflujo;
(C) bromuro de CBM, NaHCO3, CH3CN, reflujo.
fue aproximadamente 430- y 35 veces menor que la de
la N-CBM y N-CPM sustituido 1 y 2, respectivamente.
También era evidente que la presencia del resto de N-
fenetil en 7 tiene importantes consecuencias sobre la
interacción con los receptores de la fregona y el DOP,
por completa- mente la abolición de la unión en estos
dos receptores. En contraste con diphenethylamines
desarrolladas anteriormente 1-6,28 la N-fenetil
derivado 7 no exhibió actividad agonista apreciable
en el receptor KOP, sino que más bien antagoniza la
estimulación de [35S] GTPcS de unión por el U69.593
agonista de referencia con potencia relativamente baja
(Ke = 1,311 nM).
Otro resultado interesante de nuestro expandido
SAR en la serie difenetilamina se refiere al efecto de la
interacción con el receptor de KOP sobre el
desplazamiento de la posición del grupo hidroxilo
fenólico. Cambio del grupo hidroxilo de la posición 3
a 4 disminuyó significativamente la afinidad y
selectividad para tor el KOP recep- de 8 y 9, en
comparación con los derivados de 3-OH 1 y 2,
respectivamente (tabla 1). actividad funcional
diferencial en el receptor KOP también se observó con
respecto a la activación de la proteína G para el N-
CBM, 3-hidroxi sustituido 1 y su análogo 4-hidroxi 8,
así como para la N-CPM, 3-hidroxi sustituido 2 y su 4
análogo hidroxi 9. Si bien 1 es un agonista KOP
altamente potente y lleno,28 la modificación 4-hidroxi
en 8 resultados en ca. 30 veces menor potencia KOP,
lo que demuestra las propiedades de un agonista
parcial KOP baja eficacia (tabla 1). Además, la
presencia del grupo hidroxi fenólico 4- en 9 alteró
drásticamente la activación de la proteína G mediada
KOP cuando se compara con el análogo
correspondiente 2, previ- informado ormente como
un agonista parcial potente en el receptor de KOP. 28
Derivado 9 no mostró ninguna actividad agonista en
el receptor KOP,
 E. Guerrieri et al. / Bioorg. Medicina. Chem. Letón. 26 (2016)4769-4774 4771

tabla 1
Las afinidades de unión y las actividades funcionales de diphenethylamines 1-9 en los receptores opioides humanos

unión al receptor (Ki, La actividad

nM)una funcionalsegundo
Afinidadseg Selectividad [35S] GTPdoS
undo KOP
KOP FREGO DOP MOP / KOP DOP / EC50 % Stim.do Kmire
NA KOP (nM) (Nuevo
Méjico)
1 (HS665)mi 0.49 ± 0.20 542 ± 239 > 10000 1106 > 3,62 ± 90,0 ± 3,7
20000 1,87
2 (HS666)mi 5,90 ± 3,00 826 ± > 10000 140 > 1700 35,0 ± 5,3 53,4 ± 8,1
98
3mi 8,13 ± 0,32 594 ± 101 3713 ± 1266 73 457 49,1 ± 8,8 21,2 ± 0,1
4mi 10,9 ± 412 ± 2.429 ± 837 38 223 46,2 ± 45,5 ± 5,9
2,4 19 11,4
5mi 12,6 ± 325 ± 1.315 ± 364 26 104 86,4 ± 4,6 36,2 ± 2,7
1,9 26
6mi 141 ± 788 ± 175 3572 ± 222 5.6 25 647 ± 88 24,0 ± 1,3
42
7 211 ± 106 > 10000 > 10000 > 47 > 47 > 10,000- F 1.311 ±
593
8 36,3 ± 11,3 731 ± 235 2129 ± 266 20 59 109 ± 1843.8 ± 6.2
9 218 ± 1.750 ± 2,187 ± 1,113 8 10 > 10,000- F 32,1 ± 8,4
27 893
una Determinado en ensayos de unión de competencia en contra de [3H] U69.593 (receptor KOP), [3H] [D-Ala2, Me-pHE4, Gly-ol5]
encefalina ([3H] DAMGO, receptor MOP) y [3H] [D- Pen2, PCL- pHE4, D-Pen5] encefalina ([3H] pCL-DPDPE, receptor DOP) con
membranas de células CHO que expresan los receptores opioides humanos.
segundo Determinado de [35S] GTP doS experimentos de unión usando membranas de células CHO-hKOP.
do estimulación Porcentaje (% stim.) con relación a la referencia KOP U69.593 agonista.
re Determinado por la inhibición de la U69.593 estimulada [35S] GTP doS a membranas de células CHO-hKOP.
mi Datos tomados de la referencia. 28.
F No simulación arriba a 10 lMETRO. Experimental datos fueron analizado utilizando la GraphPad Prisma Software. Valores son
la media ± SEM de al menos tres experimentos independientes.

cambios estructurales significativas entre los estados

por lo tanto, se ensayó para determinar el
antagonismo contra U69.593 estimulada por [35S]
GTPcS vinculante. En este estudio, 9 exhibieron
actividad moderada antagonista KOP con un valor
Ke de 32,1 nM, que era alrededor de 40 veces
mayor que la potencia antagonista de la N-fenetilo
sustituido 7 (tabla 1).
La estructura cristalina del receptor KOP
humano en complejo con el antagonista selectivo
JDTic (código PDB: 4DJH) 20 (ver Cenar-
información portar, Fig. S3A) Proporciona una
plataforma valiosa para investigar in silico
características de unión de diphenethylamines 1-9
por medio de acoplamiento molecular, y 3D-
farmacóforos.31
Es bien reconocido que GPCRs comparten un
mecanismo de activación molecular común, aunque
sus ligandos son químicamente diversos y varían en
sus ubicaciones sitio de unión. En particular, los
resultados de la unión del ligando en la interrupción
de interruptores moleculares estabilizados
interacciones intramoleculares. Ejemplos destacados
32
son (i) el conmutador-interruptor Trp287,33 (Ii) el
bloqueo iónico imitando enlace de hidrógeno entre
Arg156 y Thr27320Y (iii) el llamado 3-7 cerradura, un
enlace de hidrógeno entre los residuos Asp138 y
Tyr320.34 Por lo tanto, los GPCR podrían exhibir
inactivos y activos.35-37 Con respecto a los receptores
opioides, hasta ahora, las estructuras cristalinas
dilucidados de KOP,20 FREGONA38 y DOP39
receptores representan los estados de los receptores
inactivos, siendo una excepción la estructura cristalina
recientemente resuelta del receptor MOP murino
unido a un agonista de morfinano. 40
Para empezar nuestro enfoque computacional, el
modo de unión de la difenetilamina más activo de la
serie, 1 (Figura 1 y tabla 1), Al receptor de KOP
humano fue atracado en la estructura cristalina para
encontrar un punto de partida plausible para un
muestreo basado en MD posterior para obtener un
modelo de receptor que se asemeja a propiedades de
actividad similares.41 Durante el proceso de simulación
MD, el enlace de hidrógeno entre los residuos Arg156 y
Thr273 estaba rota (Figura 2A), que repre- senta un
interruptor molecular ligada a la activación de Tor el
KOP recep-. Para la comparación, este enlace de
hidrógeno está presente en la estructura cristalina del
receptor KOP en complejo con el antagonista JDTic
(distancia de 3,5 Å), y se propone para estabilizar el
estado inactivo del receptor. 20 Debido a nuestro
enfoque en el sitio de unión del ligando, se calcularon
apartado notablemente de átomos pesados de residuos
clave en la unión del ligando (Val108, Asp138, Tyr139,
 Trp287, Ile290, His291, Ile316 y Tyr320). Después de
una reorganización estructural inicial, que sólo
observamos cambios conformacionales más pequeños
(Figura 2SEGUNDO). Dado que estudios previos
sugirieron una contribución de His291 a la interacción
de ligandos Pat- tern KOP,20,22,34,42-44 que curiosamente
se observó un enlace gen hidro- entre His291 y el
grupo hidroxilo de 1 en casi todos
conformaciones que presentan ruptura del enlace
Arg156-Thr273 hidro- gen (Figura 2SEGUNDO).
Una re-acoplamiento de 1 (Figura 2C) y los
primeros cuatro aminoácidos de la endógeno
dinorfina ligando KOP (Tyr-Gly-Gly-Phe) se llevó a
cabo para la validación de las propiedades de
actividad similares. La interacción polar esencial con
Asp138, que fue reportado por O'Conner et al., 45
jugado también un papel esencial para difenetilamina
1. Se observó que el grupo fenólico de 1 forma un
enlace de hidrógeno con His291 y se proyecta en un
bolsillo formado por los residuos Trp287, Ile294, y
Tyr139. El nitrógeno positivamente ionizable forma
un puente de sal a Asp138, y adicionalmente mostró
inter- ap-catión
acción con Tyr139. El grupo N-CBM se proyecta en
un bolsillo formado por los residuos de Val108, Ile316
y Tyr320, mientras que el otro resto fenilo interactúa
profundamente con los residuos de Trp287, Val108 y
Ile290 (Figura 2DO). La orientación de unión de 1 y
dinorfina resultó ser comparable (Figura 2D) con
respecto a las interacciones esenciales. Las
investigaciones modo de unión posteriores explican
(i) la actividad agonista de los derivados de
difenetilamina (tabla 1), donde el enlace de hidrógeno
a His291 está unida a la conformación activa-como
del receptor, y (ii) la selectividad de subtipo para el
receptor KOP, como los residuos de Val108 y Ile294
difieren en los otros receptores de opioides
estrechamente relacionados (MOP 38 y DOP39, Y se cree
que contribuyen a la selectividad del subtipo de
varios) KOP ligandos selectivos.20,21
La posición del grupo hidroxilo fenólico influye
fuertemente en la afinidad por el receptor KOP, ya
que se observó experimentalmente para 1 y 8, y 2 y 9
(Figura 1 y tabla 1). El 3-OH sustituido 1 es el
compuesto más activo de la serie, y el único que
muestra un comportamiento agonista completo, 28 lo
que indica que una sustitución N-CBM es favorable
para la unión y activación del receptor KOP. Su
análogo 8, en el que el grupo hidroxilo fenólico se
encuentra en la posición 4, muestra la reducción de
KOP afinidad y selectividad, y actúa como un
agonista parcial (tabla 1). Se observó un fenómeno
similar para com- puestos 2 y 9 que tienen un resto N-
CPM. En este caso el desplazamiento de la posición
del grupo hidroxilo fenólico 3 y 4 de, un agonista
KOP parcial (2) se convirtió en un antagonista (9) que
ha reducido la afinidad y selectividad por el receptor
KOP. Nuestros macophores 3D-far- indican que el 4-
OH sustituido compuestos (8 y
9) no es probable que formar un enlace de
hidrógeno con el residuo His291, que es importante
para la afinidad KOP y la actividad agonista (Fig.
3).
El bolsillo hidrofóbico formado por los residuos de
Val108, Ile316 y Tyr320 es importante para acoger el
N-sustituyente. La N-CBM (en 1) y N-CPM (en 2)
grupos parecen tener el tamaño óptimo.
4772 E. Guerrieri et al. / Bioorg. Medicina. Chem. Letón. 26 (2016) 4769-4774

Figura 2. generación MD-guiado de un modelo de receptor KOP activo similar. (A) Se propone un enlace de hidrógeno
entre Arg156 con Thr273 para estabilizar el estado inactivo del receptor KOP humano (gris). La rotura de este 'bloqueo
iónico' se podría encontrar en una conformación representativa del modelo de receptor KOP activo-como (verde). (B) La
trama superior muestra la desviación atómica de restos clave del sitio de unión. La trama de abajo muestra la distancia
entre el nitrógeno de His291 y el grupo hidroxilo fenólico de la difenetilamina 1. (C y D) análisis 3D-farmacóforo de 1 (C) y
dinorfina (D) en el modelo de receptor KOP activo similar. esferas amarillas indican contactos lipófilos, los donantes de
enlaces de hidrógeno flechas verdes, rojas aceptores de enlace de hidrógeno flechas y centros ionizables positivos se
muestran como esferas azules.

butilo, y derivados de n-pentilo N-sustituido están en el

En cuanto a los sustituyentes lineales (de n-C3H7 a
n-C6H13), el aumento de los resultados de longitud
de cadena en una disminución de la afinidad KOP
(Ki = 8,3 nM (3) <10,9 nM (4) <12,6 nM (5) <141 nM
(6), tabla 1).
Mientras que las afinidades KOP de la n-propilo, n-
mismo rango, la presencia de la cadena de n-hexilo en el
nitrógeno en 6 produce una marcada disminución de
afinidad KOP (tabla 1), Lo que indica que cinco átomos
de carbono en los sustituyentes alquilo lineales es el
tamaño crítico para la activación agonista del receptor de
KOP (Fig. 3UNA). El grupo N-fenetil en analógico 7
es bastante voluminoso para ser alojado por el bolsillo
hidrofóbico, que se traduce en una orientación
diferente de la fracción fenólica (Fig. 3SEGUNDO), y
haciendo de este compuesto un antagonista KOP
débil (tabla 1).
Con el fin de investigar las características
estructurales de selectividad del receptor KOP de
diphenethylamines, construimos modelos receptor
mutante utilizando MOE (Molecular Entorno
operativo 2014,09; Química Computing Group Inc.).
El residuo de aminoácido Val108 era aliado
virtualmente mutado en Ala, que representa el
residuo correspondiente en los receptores de la
fregona y el DOP.38,39 Docking de 1 en el receptor
mutante indicó que el enlace de hidrógeno crucial de
la fenólico
se perdió grupo con His291, y 1 mostró una reducción
del contacto hidrófobo con el receptor (véase
Apoyando informa- ción, Fig. S3B). Por lo tanto, una
reducción de Val108 por dos átomos de carbono (Ala)
conduce a una extensión de la bolsa hidrófoba, en el
que el volumen y la forma son importantes para
acoger el N-sustituyente. Curiosamente, se observó la
disminución de MOP / KOP y relaciones de
selectividad KOP DOP / para diphenethylamines 1-6
(tabla 1) Con incrementando de forma la longitud de
cadena de C3 a C6, que está de acuerdo con nuestros
resultados computacionales para la mutación de
Val108 a Ala, show-ing más espacio en el bolsillo
hidrofóbico (volumen sitio de unión: KOwildtype:
521,3 A3, KOPVal108 / Ala: 549,8 A3).
En base a los estudios computacionales que aplican
ing Dock-molecular y simulaciones MD, podemos
sacar un patrón de SAR en los diphenethylamines
investigadas 1-9 como ligandos del receptor de KOP
resumen en Tabla 2. Las principales interacciones
ligando-receptor están representados por enlace de
hidrógeno entre el grupo hidroxilo fenólico y His291,
el puente sal formada por el nitrógeno capaz de
protones con Asp138, y la proyección de la N-
sustituyente en el bolsillo hidrófoba formada por
Val108, Ile316 y Tyr320.
 E. Guerrieri et al. / Bioorg. Medicina. Chem. Letón. 26 (2016)4769-4774 4773

Figura 3. Análisis de modo de unión de diphenethylamines. (A) Superposición de diphenethylamines 1-5 (gris claro) y 6
(gris oscuro). (B-D) análisis 3D-farmacóforo de diphenethylamines. esferas amarillas indican contactos lipófilos, los
donantes de enlaces de hidrógeno flechas verdes, rojas aceptores de enlace de hidrógeno flechas y centros ionizables
positivos se muestran como esferas azules. (B) derivado difenetilamina 7 (gris claro) en superposición con 1 (gris oscuro)
que indica la diferente orientación del grupo hidroxilo fenólico de 7 en comparación con 1 debido a la N-sustituyente
voluminoso. (C y D) Comparación de modo de unión de diphenylethylamines 1 y 8 (C), y 2 y 9. (D) Los compuestos sin el
grupo hidroxilo en la posición 3 no puede formar el enlace de hidrógeno fundamental con residuo His291, lo que res ulta en
una menor afinidad por el receptor KOP de 8 y 9.

Tabla 2
Descripción general de las interacciones ligando-receptor observados para diphenethylamines 1-9 con el receptor humano KOP
MoietyInteractions con el KOP receptorRelevance
grupo hidroxilo fenólico en enlace de hidrógeno posición 3 con receptor His291KOP afinidad
protonable puente nitrogenSalt con Asp138Essential para el receptor KOP
Unión
interacciones N-substituentsHydrophobic con Val108, Ile316, Tyr320KOP selectividad por el
receptor (sustituyentes lineales y pequeña

lipofílica anillo moietyPhenyl: interacciones hidrofóbicas con Trp287, Val108 y
ile 290
En cuanto a la N-sustituyente, el límite de tamaño n-
alquilo es de cinco átomos de carbono, y sustituyentes
voluminosos gire agonistas del receptor KOP en
onists antag-, ya que impiden la interacción entre el
nitrógeno protonable y Asp138, esencial en el anclaje
de los ligandos del receptor KOP positivamente
ionizables.
En resumen, nuestros resultados actuales
ampliaron la exploración SAR en la serie de
diphenethylamines como ligandos del receptor de
KOP. El patrón de SAR derivado de modelado
molecular se apoya en el perfil farmacológico in vitro
de los ligandos diana. El tamaño de la N-sustituyente
ofrecida por el bolsillo hidrofóbico formado por los
residuos de Val108, Ile316 y Tyr320 influye bind-
ligando
anillos)
selectividad por el receptor KOP
ing y selectividad. El enlace de hidrógeno formado
por la fenólico grupo 3-OH de 1 con His291 es
esencial para la actividad agonista de afinidad y
unión en el receptor de KOP. El cambio del grupo
hidroxilo fenólico de la posición 3 a 4 dio lugar a
reducida afinidad de unión KOP debido a la ausencia
de un enlace de hidrógeno con His291. La potencia y
la eficacia para activar el receptor KOP fue
fuertemente dependiente de la interruptor 3-OH? 4-
OH, con consecuencias notables como esta
modificación se volvió un agonista completo muy
potente (1) en un agonista parcial mucho menos
potente (8) o incluso erradicada esencialmente toda la
actividad KOP mediante la conversión de un agonista
parcial potente (2) en un antagonista de mode- rada
(9).
4774 E. Guerrieri et al. / Bioorg. Medicina. Chem. Letón. 26 (2016) 4769-4774

FI; Mascarella, SW; Westkaemper, R.SEGUNDO.; Mosier, PD;

Combinación de estra- tegias de modelado Roth, BL; Cherezov, V .; Stevens, RC Naturaleza 2012, 485,
molecular experimental y ofrece ideas fundamentales 327.
en las características estructurales de 21.
diphenethylamines que son necesarios para
promover la afinidad de unión, la eficacia agonista y
selectividad para el receptor KOP. Estas
características estructurales pueden estar también
implicados en la transducción del evento de unión del
ligando en cambios moleculares, en última instancia
conduce al receptor de activación. Los presentes
resultados son útiles para guiar el diseño de
fármacos, y la simplicidad estructural y fácilmente
accesibles síntesis de estos andamios en comparación
con los de los agentes utilizados actualmente KOP los
hacen atractivos para una mayor exploración.

Dato suplementario

datos suplementarios (sección experimental con

cedimientos sintéticos pro, datos de caracterización
espectroscópicas, ensayos biológicos y modelado
molecular) asociados con este artículo se pueden
encontrar, en la versión en línea, en
http://dx.doi.org/10.1016/j.bmcl.2016.08. 031.

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