EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN DE PIGMENTOS

REMOVAL AND SEPARATION OF PIGMENTS

Farieta N.L., Gonzalez A, Riaño .M
Corporación Tecnológica de Bogotá - Tecnología en Química Industrial, Química
de alimentos
Bogotá D.C., Colombia
17/05/2017

RESUMEN These aspects were evaluated

El objetivo de esta práctica consistió
en extracción y separación de
pigmentos presentes en el pimentón
y la espinaca, por cromatografía en
capa delgada, además de la
realización de pruebas para identificar
cambios en la muestra al someterse a
efectos como el pH y la temperatura,
observando cambios en la tonalidad.
Estos aspectos se evaluaron a través
de pruebas específicas, permitiendo
identificar cambios Entre las 3
soluciones buffer.
Palabras clave: Extracción, pigmento,
pH, temperatura.
ABSTRAC
through specific tests, allowing to
identify changes between the 3 buffer
solutions.
Key words: Extraction, pigment, pH,
temperature.
INTRODUCCIÓN
Los Pigmentos vegetales, que se
encuentran en los cloroplastos, son
moléculas químicas que reflejan o
transmiten la luz visible, o hacen
ambas cosas a la vez. El color de un
pigmento depende de la absorción
selectiva de ciertas longitudes de
onda de la luz y de la reflexión de
otras. Constituyen el sustrato
fisicoquímico donde se asienta el
proceso fotosintético.

Hay diversas clases de pigmentos:

The objective of this practice was to
Principales:
extract and separate pigments
present in paprika and spinach by • Clorofilas (a, b, c, d y
thin-layer chromatography, in addition bacterioclorofilas) decoloración
to performing tests to identify changes verde.Accesorios:
in the sample when subjected to
effects such as pH and temperature, • Carotenoides (carotenos y
observing Changes in tone. xantofilas) de coloración amarilla y
roja.

• Ficobilinas de coloración azul y roja

presentes en las algas
verdeazuladas, que comprenden el aparentemente falten en algunas
filo de los Cianofitos. ( García JL, hojas de color rojo o amarillo, cuando
(1980). se extraen las otras sustancias
colorantes de estas, puede
La clorofila es un pigmento de las comprobarse incluso allí la presencia
plantas, que les proporciona su color de las clorofilas, que estaban
verde y que absorbe la luz necesaria enmascaradas por los demás
para la fotosíntesis. La clorofila pigmentos. Asociados con las
absorbe principalmente luz violeta clorofilas, existen también en los
roja y azul y refleja luz verde. cloroplastos dos clases de pigmentos
La abundancia de clorofila en hojas y amarillos y amarillo-anaranjados que
su ocasional presencia en otros son los xantofilas y carotenos.
tejidos vegetales es la causa de que MARCO TEÓRICO
esas partes de las plantas aparezcan
verdes, pero en algunas hojas la
clorofila es enmascarada por otros
pigmentos. La extracción y ¿Qué son los pigmentos?
reconocimiento de estos pigmentos
es interesante para el estudio y
conocimiento de sus propiedades (
Blanco, 1983).

Los colores que presentan los

vegetales son debidos a unos
compuestos químicos llamados
pigmentos. El color que presenta un
determinado órgano vegetal depende Si es posible encontrar en el reino
generalmente del predominio de uno vegetal todos los matices y
u otro pigmento o la combinación de combinaciones de colores del
ellos. Además, algunos de los espectro, existe un predominio
pigmentos que condicionan el color general de los colores primarios:
están estrechamente ligados a las verde, amarillo, rojo, azul. Estos
actividades fisiológicas del propio colores son conferidos a los
vegetal. El color verde en los vegetales por determinados
vegetales es debido a la presencia de compuestos químicos definidos,
dos pigmentos estrechamente llamados pigmentos.
emparentados llamados clorofila a y
clorofila b. Se encuentran El color particular que presenta un
prácticamente en todas las plantas determinado órgano vegetal depende
con semilla, helechos, musgos y generalmente del predominio de uno
algas. También aunque u otro o la combinación de ellos. Se
debe tener claro que cuando u n
vegetal presenta un color blanco, es
debido a la falta de tales pigmentos.
La luz solar que incide sobre ellasno
es absorbida selectivamente como
ocurre en las partes coloreadas, sino
que es transmitida o reflejada
prácticamente sin sufrir modificación.
Las Clorofilas.
El color verde tan uniformemente
presente en los vegetales es debido a
la presencia de dos pigmentos
estrechamente emparentados
llamados clorofila a y clorofila b.
Se encuentran prácticamente en
todas las plantas con semilla,
helechos, musgos y algas. Pueden
formarse en las raíces, tallos, hojas y
frutos a condición de que estos
órganos estén situados por encima
del suelo y queden expuestos a la
luz. También aunque aparentemente
falten en algunas hojas de color rojo o
amarillo, cuando se extraen las otras
sustancias colorantes de estas,
puede comprobarse incluso allí la
presencia de las clorofilas, que
estaban enmascaradas por los
demás pigmentos.
Ubicación de pigmentos
Estos pigmentos se encuentran en el
interior de las células vegetales
específicamente en una organela
llamada cloroplasto. Los cloroplastos
son simplemente plástidos que
contienen pigmentos clorofílicos. Los
compuestos clorofílicos están ligados
químicamente con las estructuras
internas del cloroplasto
(membranatilacoides) y se hallan
retenidos en estado coloidal.
Asociados con las clorofilas, existen
también en los cloroplastos dos
clases de pigmentos amarillos y
amarillo-anaranjados que son las
xantofilas y carotenides.
(botánica,2006).
Solventes
Los pigmentos clorofílicos son
insolubles en el solvente universal
llamado agua. Pero sí son solubles
(afinidad química) en solventes
orgánicos como por ejemplo alcohol
etílico y acetona. A los solventes que
extraen simultáneamente todos los
pigmentos de la hoja se los suele
llamar extractantes
. Existen otros solventes que
presentan afinidad por algunos
pigmentos y se los llama separadores
, como por ejemplo el tetracloruro de
carbono y el éter de petróleo. En el
método de extracción simple, como
se desarrolla más adelante se
utilizará como extractante el alcohol
etílico y como separador el
tetracloruro de carbono. Estos dos
solventes orgánicos responden en
forma diferente a los pigmentos
clorofílicos, como así también a sus
diferencias físicas que hacen que
sean dos líquidos no misibles y con
diferente peso específico.
MATERIALES Y MÉTODOS
 Mortero y pistilo
 Tubo de ensayo (10)
 Probeta 10 mL
 Vaso de precipitado 100 mL Extraccion del
(3) pigmento
 Vidrio de reloj (3)
 Gradilla Pesar 10 g pulpa del
 Tubos para centrífuga (10) vegetal
 Pipeta graduada 10 mL
 Pinzas y nueces Añadir 10 mL del
 Vaso de precipitado 250 mL solvente correspondiente
(2)
 Pipeteador
compactar con
 Soporte universal ayuda de un
mortero
 Trípode
 Malla cerámica
 Pipeta pasteur (4) centrifugar 5 min
 Agitador de vidrio (2)
 Balanza analítica (0,1 mg)
 Balón aforado 100Ml el sobrenadado cubrirlo
con aluminio y vinipel.
REACTIVOS
 Alcohol etílico 96%
 Éter de petróleo
 Acetona}Acetato de etilo
 Acetato de propilo
 Tolueno
 Metil etil cetona (MEK)
 Acetonitrilo
 Solución buffer pH 3
 Solución buffer pH 5
 Solución buffer pH 7
 Solución buffer pH 9
 Revelador
 Separacion
de pigmentos
Efecto del Marcar 4 tubos de
pH ensayo

Preparar 5 mL de
diferentes mezclas
de solventes adicionar 1 mL de
pH 3, pH 5, pH 7 y
las soluciones
pH 9)
buffer al tubo
llenar camara
cromatografica

Adicionar una
muestra del mezclar hasta
dejar saturar
pigmento gota a cambio de color.
gota al buffer pH 3

placa
cromatográfica
marcar con un lápiz
el origen a 1 cm de
la base de la placa. Efecto
Temperatura

con capilar sembrar

muestra

Colocar los tubos

colocar la placa anteriores en un
durante 10 minutos
en la camara baño de agua en
ebullición

dejar secar y
determinar la distancia
recorrida Hasta cambio de
color.

aplicar revelador
y calentar RESULTADOS Y ANÁLISIS DE
RESULTADOS

A continuación se presentan los

resultados obtenidos en dicha
práctica:

MUESTRAS: Pimentón y espinaca

 Solvente tolueno 3: 2 Acetato de
etilo
Tubo Solución Pigmento
buffer pH Tratamiento
térmico
1 4 Verde Naranja
oscuro
2 7 Verde Amarillo
medio quemado
4 9 Verde Amarillo
claro claro

Pigmentos extraídos

Solvente Metiletilcetona 4,5:0,5

Metanol

Solvente tolueno4: 1 Acetona Con el revelador

Solvente tolueno4: 1 Acetona

Solvente tolueno 3: 2 Acetato de
etilo

Pimentón:

Solvente Metiletilcetona 4,5:0,5

Metanol

Efectos de la temperatura:
Espinaca

Efecto del
pH

Espinaca
Pimentón
ANALISIS
Extracción de pigmentos por
cromatografía
La espinaca es un vegetal que
contiene un pigmento vegetal llamado
clorofila, la clorofila es un pigmento
de las plantas, el cual les proporciona
el color verde además este pigmento
es el que se encarga de la absorción
de luz necesaria para realizar el
proceso de fotosíntesis, por otro lado,
el pimentón contiene como pigmento
principal los carotenoides. En este
caso se realizó la separación de
estos pigmentos por medio de placas
cromatografías, en las cuáles el
objetivo era conjugar diferentes fases
para que la muestra pudiera revelarse
de mejor manera. La primera fase
utilizada fue tolueno y acetato de etilo
(3:2) en donde ambas muestras
lograron separarse, debido a que los
medios en los que se realizó el
extracto contribuyeron con su
polaridad a que las muestras lograran
separarse, mientras que en la
segunda fase que fue tolueno,
acetona (4:1), solamente se obtuve la
separación de los carotenoides, lo
cual puede deberse a que el tolueno
es apolar mientras que la extracción
del pimentón se hizo en acetato de
propilo. Y por último se realizó la
separación con la fase metiletilcetona
y metanol (4.5: 0.5), en este caso se
evidenció una pequeña separación
debido a que los pigmentos se
mezclaron cuando tuvieron contacto
con la fase móvil, sin embargo, se
observó la presencia de los diferentes
pigmentos en las placas.
Efecto del pH
Se observa que a medida que
aumenta el pH el color disminuye, en
pH alcalinos el tono es más claro;
aunque los carotenoides y las
clorofilas extraídas no son
relativamente resistente a valores de
pH extremos, los ácidos y álcalis
pueden provocar isomerizaciones
cis/trans de ciertos dobles enlaces,
reagrupamientos y
desesterificaciones, Así, por ejemplo,
algunas xantofilas como fucoxantina y
astaxantina, son excepcionalmente
lábiles al medio alcalino. Debido a
una deficiencia del núcleo del flavilio,
estos pigmentos funcionan como
verdaderos indicadores de pH; es
decir, su color depende de las
condiciones de acidez o alcalinidad
del sistema en que se encuentran: a
pH ácido adquiere una estructura
estable del catión flavilio de color rojo,
representado por la fórmula (AH+ );
cuando se incrementa el pH, la
distribución electrónica se modifica
hasta llegar a la forma quinoidea azul
(A) o base anhidra; tanto la sal del
flavilio como la base anhidra pueden
convertirse a la base del carbinol
incolora (B) , que predomina en el
intervalo de pH de 4 a 5.
Efecto de la temperatura
Pimentón
Es posible observar que los tubos con
muestra de pimentón se opacaron al
ser sometidos a la temperatura; dada
su alta hidrosolubilidad, estos
pigmentos se pueden perder
fácilmente por lixiviación en el agua
que se utiliza en los diferentes
tratamientos; a medida que aumenta
la temperatura se acelera la
decoloración de la fruta, ya que se
favorece tanto la extracción que
incluso se puede llegar a obtener
productos prácticamente incoloros,
debido a que los pigmentos en su
forma más estable adquieren la
configuración «all trans», pero por
efecto de calor moderado algunos se
isomerizan a sus formas cis en una
extensión comparable a la energía
absorbida. No obstante, el conjunto
de pigmentos presenta una
disminución progresiva en su
concentración. Esto evidencia que el
color del pimentón, en cuanto a
presencia de pigmentos se refiere,
tiene una estabilidad muy aceptable
ya que permite un almacenamiento, a
temperatura ambiente. Para
temperaturas más elevadas ya sí se
aprecia claramente una pérdida de la
estabilidad carotenoide, en el
descenso de concentración que
experimenta el total de pigmentos.
Por tanto, la capacidad colorante
disminuye, y su pérdida se hace más
intensa a medida que se eleva la
temperatura.
Contrario al pimentón, el extracto de
la espinaca al ser sometido a altas
temperatura mostró una coloración
más clara, esto se debe
principalmente que el pigmento va
perdiendo sus propiedades y por
ende su coloración, esto se logra
evidenciar en la cocción de la
espinaca ya que cuando este proceso
se realiza la espinaca pierde parte de
su coloración ya que al hervirse se
liberan parte de los pigmentos y por
ende su coloración.

CONCLUSIONES

Los métodos cromatograficos tal

como cromatografía CCD y en
columna permiten la separación de
diferentes metabolitos secundarios
que cumplen dentro de varias
moléculas orgánicas la función de
pigmentación. Dentro de diferentes
investigaciones el uso de estos
métodos ha permitido la identificación
de compuestos orgánicos a nivel
fotoquímico que se corroboran
mediante técnicas tal como hplc
acoplado a masas que ha permitido la
elucidación de las funciones de
diversos metabolitos secundarios
dentro de organismos vegetales

BIBLIOGRAFÍA
Martinez, R. (2014). Lípidos .
Recuperado el 09 de 09 de
2016, de
http://www.academia.edu/9356
904/Informe_de_lipidos_FINAL

Medina, F. (2013). Análisis de lípidos

. Recuperado el 09 de 09 de
2016, de
http://es.slideshare.net/FranKli
nToledo1/analisis-de-lpidos