FITOQUÍMICA AVANZADA

Reporte de práctica #7
Alumna: QFB. Eleazar León Álvarez

Cromatografía En Capa Fina De Alta Resolución (HPTLC)

Introducción

La Cromatografía de Capa Fina de Alto Rendimiento (HPTLC) es la forma más avanzada de

TLC y comprende el uso de capas cromatográficas de máxima eficacia de separación y el
empleo de instrumentación de vanguardia para todos los pasos del procedimiento: aplicación
de muestra precisa, desarrollo de cromatograma reproducible estandarizado y evaluación
controlada por software. HPTLC es un concepto completo que incluye una metodología
ampliamente estandarizada basada en hechos científicos, así como el uso de métodos
validados para el análisis cualitativo y cuantitativo. HPTLC cumple con todos los requisitos de
calidad de los laboratorios analíticos actuales, incluso en un entorno completamente regulado.

A diferencia de otras técnicas de separación, los costos iniciales para un sistema HPTLC, así
como para el mantenimiento, y los costos por muestra son comparativamente bajos. La
posibilidad de una evaluación visual de muestras separadas en la placa es uno de los aspectos
más valiosos de TLC. Alcanza una dimensión completamente nueva en HPTLC mediante el
uso de técnicas de vanguardia para generar y evaluar imágenes digitales.

En esta práctica se evaluaran la especie Galphimia glauca que es una planta medicinal
endémica de México que es empleada como sedante y calmante nervios. Diversos estudios
fitoquímicos y farmacológicos realizados en esta especie han llevado al descubrimiento de
metabolitos activos de gran interés por sus propiedades sedante y ansiolítica, que han sido
denominados como galfiminas.

Objetivos específico: Dar a conocer al estudiante de manera práctica, como se realizan los
pasos del análisis en un equipo automatizado (CAMAG) para el análisis HPTLC; así como
comparar este sistema cromatográfico con el método tradicional de Cromatografía en Capa
Fina (CCF-TLC).
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Reporte de práctica #7
Alumna: QFB. Eleazar León Álvarez

Metodología general:
Material
-Muestras: Extracto etanolico del material preparado en la práctica anterior.
- Fase estacionaria: Placas de silica tipo G/UV 254, 0.2 mm, en soporte de hojas de aluminio.
- Fase móvil (eluente): CH3Cl: AcEtOH (1:4).

Instrucciones para la práctica

1. En una misma placa de TLC se aplicaran diferentes muestras

2. Generar los comandos para la ejecución del análisis en el sistema CAMAG.
3. Aplicar la muestra a través de un sistema automatizado
4. Migrar las muestras en una cámara con condiciones controladas de humedad.
5. Observar la placa bajo el sistema de registro del equipo CAMAG.
6. Revelar la placa con vainillina/ H2SO4 , mediante el sistema de aspersión controlado del
equipo CAMAG.
7. Calcular la placa cromatográfica.
8. Observar nuevamente la placa post- revelada
9. Comparar y discutir los resultados de estos análisis automatizados con el resultado de
manera manual en la clase pasada.

Figura 1. Pasos a realizar para el uso de los instrumentos para HPTLC.

En el software elegir el método

de selección.
Pasos del desarrollo de cada instrumento para HPTLC.
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Alumna: QFB. Eleazar León Álvarez

Resultados
Tabla 1 Cromatografía de HPTLC del extracto MeOH de G. gluaca, utilizando la fase móvil
CH3Cl: AcEtOH (1:4).

Figura 2- cromatograma de HPTLC observada en luz UV a 254 nm.

Figura 3- cromatograma de HPTLC observada en luz UV a 366 nm.

Figura 4-Cromatograma de HPTLC revelada con vainillina/ H2SO4 , mediante el sistema

de aspersión controlado del equipo CAMAG.
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Alumna: QFB. Eleazar León Álvarez

Discusión

Los resultados obtenidos en esta práctica de laboratorio utilizando el sistema automatizado

(CAMAG) de Cromatografía de Capa Fina de Alto Rendimiento (HPTLC) se observó una mejor
separación de los metabolitos presentes en el extracto MeOH de las hojas de Galphimia
glauca como se observa en la tabla1, comparados con la metodología CCF realizada de
manera manual en la práctica anterior no se observó una buena separación de los metabolitos
presentes en el extracto de MeOH G. gluaca y no es controlable el proceso por el cual se lleva
acabo. Por lo tanto el empleo de este instrumento moderno nos permite controlar los pasos del
procedimiento.

Conclusion

Se utilizó el equipo automatizado (CAMAG) para el análisis de HPTLC del extracto MeOH de
G. gluaca, es un sistema cualitativo y cuantitativo, que nos permitió estandarizar y controlar las
condiciones de manera más práctica a través de software. Este sistema cromatografíco es
preciso y actualizado comparado con el método tradicional de CCF. Además el análisis HPTLC
es de importancia en química farmacéutica, porque nos permite una mayor precisión para el
análisis y purificación de compuestos.

Bibliografía

1. Harry W. Lewis & Christopher J. Moody (13 de junio de 1989). Experimental Organic
Chemistry: Principles and Practice (ilustrada edición). WileyBlackwell. pp. 159-173.
2. A.I. Vogel; A.R. Tatchell; B.S. Furnis; A.J. Hannaford; P.W.G. Smith. Vogel's Textbook of
Practical Organic Chemistry (5ª edición).