UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES

PLANTEL ZARAGOZA

Carrera:QFB

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA CELULAR Y DE LOS

TEJIDOS II

MORFOLOGIA Y
FISIOLOGIA DE:
LOS ERITROCITOS Y
LEUCOCITOS
GRUPO:1503

EQUIPO:1
INTEGRANTES: GUERRA SANCHEZ ANA KAREN. OROZCO ORTIZ ESTEFANIA ALEJANDRA.

PROFESORES RESPONSABLE DE LA PRÁCTICA:

GABRIELA ROSAS GAVILÁN. ROSA LINARES CULEBRO.

FECHA DE ENTREGA: 15 DE SEPTIEMBRE DEL 2018.

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TABLA DE CONTENIDO

1._ Resumen pág 3

2._ Marco teórico pág 4
3._ Objetivos pág 11
4._ Material y Métodos pág 11
5._ Resultados pág 13
6._ Discusión pág 14
7._ Conclusiones pág 15
8._ Referencias pág 16

RESUMEN
La biometría hemática, o citometría hemática como también se le conoce, es uno de los auxiliares
diagnósticos de laboratorio de mayor utilidad y el más frecuente. De la biometría hemática se obtiene datos
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de los tres elementos que forman de la sangre: eritrocitos, leucocitos, y plaquetas, que no solo orientan a
patologías que pueden afectar a esas líneas celulares; sino también a enfermedades de diferentes órganos y
sistemas.

Serie roja (eritroide)

Se evalúa tanto por la cantidad de eritrocitos como por su contenido de hemoglobina. Es importante tomar
en cuenta que estos parámetros cambian dependiendo de la altura al nivel del mar, la edad y el género del
paciente.

Los índices eritrocitarios que indican el contenido de hemoglobina por eritrocito y por tamaño, son datos
importantes que orientan a las posibles etiologías en pacientes con anemia.

Conocer el tamaño de cada eritrocito y su contenido de hemoglobina se logra con los índices eritrocitarios:

Volumen corpuscular medio. Indica el tamaño y capacidad del eritrocito, y se mide en fentolitros (fL).

Hemoglobina corpuscular media. Indica la cantidad de hemoglobina contenida en un eritrocito y se expresa

en picogramos (pg).

Concentración media de hemoglobina corpuscular. Es el promedio de la concentración de la hemoglobina

en 100 mL de eritrocitos y se expresa en g/dL.

Todos estos datos nos sirven para la determinación de una enfermedad como pueden ser la anemia.

En esta práctica específica se realiza la determinación de estos tres valores y del frotis para determinar la
morfología del eritrocito. La forma normal del eritrocito es la de un disco bicóncavo de aproximadamente
6 micras de diámetro; en condiciones patológicas como la deficiencia de hierro, estos pueden ser muy
pequeños (microcitosis) o de un tamaño mayor como lo es en anemia megaloblástica (macrocitosis).

A partir de una muestra sanguínea venosa que se tomó de una mujer, se realizaron diversas técnicas como
frotis sanguíneo, conteo de glóbulos rojos, hematocritos, concentración de hemoglobina, recuento manual
y recuento diferencial de leucocitos. Estas pruebas fueron necesarias para el análisis de la serie eritrocitaria
y leucocitaria que componen una citometría hemática. Todos estos datos para determinación de anemias y
anormalidades en estos valores en una muestra proporcionada por un compañero.
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MARCO TEÓRICO
Para realizar análisis de sangre, se requieren distintos métodos para la extracción de estas según el tipo de
análisis que se va a realizar. Existen tres tipos de extracción como lo son:

A. Extracción Venosa. (venopunción). Es la recolección de sangre proveniente de una vena. forma en

que se realiza:

1. localizar la vena de donde extraemos la sangre, para esto pedimos al paciente ya con el brazo
estirado que abra y cierre el puño varias veces para dilatar la vena.
2. Desinfectar la zona de punción, con alcohol del 70%, una vez desinfectado no volver a palpar la
zona.
3. Aplicamos el torniquete mientras se canaliza la vena y retirarlo en el momento en el que la sangre
comienza a fluir,no mantener el torniquete por mucho tiempo ya que puede producir cambios en la
concentración de las células extraídas.
4. La aguja debe introducirse a lo largo del curso de la vena hasta que su apertura este totalmente en
el interior de la vena.
5. Se introduce el tubo en el portatubos. Los dedos índice y medio se sitúan en las aletas del portatubos
y el pulgar presiona completamente el tubo dentro del portatubos.

B. Extracción Arterial. Los sitios más comunes son: arteria femoral, arteria radial. La sangre obtenida
por punción arterial debería procesarse inmediatamente después de su extracción.
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C. Extracción Capilar. La sangre obtenida por punción cutánea es una mezcla de sangre procedente
de arteriolas, vénulas y capilares con mayor o menor dilución con fluido con fluido intersticial e
intracelular. el proceso de extracción se da de la siguiente manera.

1. seleccionar el lugar de punción,el lugar usado para esta función es la superficie palmar de
la falange distal de cualquier dedo.
2. Desinfectar la zona dejando que se seque el líquido desinfectante, ya que puede causar
hemólisis.
3. Realizar la punción con una lanceta desechable.
4. Recolección de sangre. La primera gota que fluye después de la punción debe ser
descartada retirandola con una gasa estéril. Aplicando ligera presión, se irán recogiendo las
gotas de sangre.
5. Se deposita la lanceta en un contenedor de seguridad.
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En esta práctica se realizó una extracción venosa y extracción capilar, ya que la necesitamos para el conteo
de eritrocitos y leucocitos por la cámara de neubauer, y para el frotis, para observar la morfología de
leucocitos.

Para estas prácticas se necesita conocer el tipo de tubo con el anticoagulante necesario para esta práctica, a
continuación se muestra una tabla de anticoagulantes.

Así mismo se realizó una tinción, existen dos tinciones útiles en frotis de sangre periférica o de médula
ósea, estas tinciones son la tinción de Wright y Giemsa. Ambas contienen eosina (colorante aniónico) y azul
de metileno( colorante catiónico), se denominan tinciones policromáticas. La naturaleza ácida o básica de
las estructuras celulares determina la avidez por los colorantes de la tinción, lo que provoca una amplia
variedad de colores y sombras que permiten distinguir sutiles diferencias en las estructuras celulares.
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Teniendo en cuenta los procesos para la realización de esta práctica, también se deben conocer las
estructuras y los valores para el análisis de la serie roja, la cual es la que se trabajara en la práctica, y se
necesita conocer el proceso de donde se forman cada una de estas células .

Hematopoyesis

Se trata del proceso de formación de células sanguíneas. Todos los elementos formes sanguíneos tienen un
precursor común indiferenciado, llamado célula madre hematopoyética pruripotencial (CMHP). A partir de
esta célula madre se forman dos precursores indiferenciados o multipotenciales que son la unidad formadora
de colonias del bazo (UFC-S) que es la célula madre de la línea mieloide y la otra es la célula madre linfoide
(CML), la célula madre de la línea linfoidea.

Las células madre se dividen continuamente pero lentamente y pueden auto-regenerarse, lo que va a
mantener una reserva de células madre en las células óseas durante toda la vida del individuo, si bien
disminuye con la edad. Todos los elementos formes de la sangre excepto linfocitos se originan en la médula
ósea. Los linfocitos se originan en médula ósea pero también se producen en respuesta a estímulos
antigénicos en los tejidos linfoideos periféricos.

En la médula ósea roja las células madre multipotenciales se multiplican y se diferencian en células
comprometidas, en células prediferenciadas en una o dos líneas celulares específicas. Las células
prediferenciadas se dividen con rapidez originando distintas líneas celulares. En nuestra médula ósea roja
existen cinco tipos de células prediferenciadas de la línea mieloide:

1. La unidad formadora de colonias de eritrocitos.

2. La unidad formadora de colonias de megacariocitos.
3. La unidad formadora de colonias de eosinófilos.
4. La unidad formadora de colonias de granulocitos y monocitos.
5. La unidad formadora de colonias de basófilos.

Eritropoyesis

En la médula ósea roja a partir de la célula madre multipotencial se forman unos precursores
prediferenciados, uno de ellos es el de eritrocitos.

Eritrocitos

Los eritrocitos son discos bicóncavos no nucleados (no poseen núcleo), con un diámetro medio de 8.5
micrómetros con un espesor en los bordes de 12 micrómetros y en el centro de un micrómetro. Esta forma
es la más ventajosa porque representa la superficie máxima en relación a su tamaño para la difusión de gases
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Los eritrocitos maduros carecen de núcleo, pero tienen metabolismo, consumen O2, ATP y glucosa y liberan
CO2. Estas funciones metabólicas son empleadas para alimentar los sistemas de transporte activo que
mantiene la homeostasia iónica entre la célula y su medio (el glóbulo rojo y el plasma). Su número varía
entre los 4.5 a 6 millones por mm3 en el varón y entre los 4 a 5.5 millones en la mujer, pero este número
varía también con la edad.1

Leucopoyesis

La leucopoyesis, o desarrollo de leucocitos, con excepción de los linfocitos, se produce en el mismo lugar
de la eritropoyesis.

Leucocitos

Los leucocitos se dividen en granulocitos y linfocitos en virtud de la diferenciación evidente en el nivel de

la célula troncal. Los linfocitos se producen en la medula ósea y el tejido linfoide. Estan bajo el control de
estímulos ambientales y hormonales muy diferentes de los que controlan a granulocitos y monocitos

PRINCIPALES COMPONENTES DE LA SANGRE

La sangre es una mezcla liquida color rojo, esta mezcla se compone de: glóbulos rojos, también llamados
eritrocitos. Son las células más numerosas de la sangre. Se encargan de transportar oxígeno desde los
pulmones hasta el resto de los tejidos. La proteína que se encuentra en el interior y que une el oxígeno se
llama hemoglobina la cual es roja y le da el color a la sangre. Glóbulos blancos, también reciben el nombre
de leucocitos. Se ocupan de defender el organismo contra ataques de bacterias, virus, parásitos y hongos.
Plaquetas o trombocitos, son fragmentos celulares que participan en la protección de la pared de los vasos
sanguíneos, forman un “tapón plaquetario” para impedir el sangrado en el lugar de la lesión y producen
diversas sustancias que ayudan a la cicatrización de las heridas. Plasma, es la parte líquida de la sangre y es
muy rico en proteínas, entre las cuales destacan como las más importantes: La albúmina, las factores de
coagulación y las inmunoglobulinas.

HEMOGLOBINA
La hemoglobina está formada por la proteína globina y el grupo Hemo.La globina es el componente más
pesado y está formado por 4 cadenas polipeptídicas la alfa, beta, gamma, landa. La forma más común de la
hemoglobina es la A(adulto)tiene dos cadenas alfa y dos beta.

1
McKenzie, Shirlyn Hematología clínica. 2a ed. México: Manual Moderno 2000
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1. Oxihemoglobina
Cuando la hemoglobina se combina con el oxígeno forma oxihemoglobina; esta combinación se
lleva a cabo sin alterar la valencia del hierro que sigue siendo Fe 2+; se trata, por lo tanto de una
oxigenación.

La hemoglobina se combina con el monóxido de carbono CO, para formar carboxihemoglobina, en

la cual el hierro está en forma ferrosa, Fe 2+. La fijación del CO a la hemoglobina es más que la del
oxígeno.

2. Metahemoglobina
Cuando la hemoglobina con hierro ferroso Fe2+ se oxida, el hierro pasa a férrico, Fe3+, formando
así la metahemoglobina, esto ocurre normalmente en el interior del glóbulo rojo, el cual suele tener el
1% de metahemoglobina; esta última es reducida a hemoglobina por el citocromo reducido.

Clasificación de las anemias por tamaño celular

El tamaño de los hematíes proporciona importantes datos acerca de la posible causa de una anemia.

Anemia Microcíticas (VCM <80 fL)

La microcitosis representa la prueba morfológica de la menor capacidad de los precursores de los hematíes
en maduración para elaborar hemoglobina. Se da bajo el déficit de hierro.

Anemia Normocíticas (VCM de 80 - 100 fL)

Esta se subdivide en 3 tipos:

1. Anemias normocíticas sin hematíes de forma anómala (poiquilocitos) o macrocitos

policromatofilia. Los hematíes tienen aspecto normal, aunque a veces se observa una ligera
hipocromia o microcitosis.
2. Anemias normocíticas con poiquilocitosis importante y presencia ocasional de macrocitos
policromatofilos. Los hematíes son predominantemente macrocitos, en vez de normocitos.
3. Anemias normocíticas con numerosos macrocitos policromatofilos. La presencia de un número
muy elevado de macrocitos policromatofilos crea una firme sospecha de hemólisis.

Anemia Macrocíticas (VCM > 100 fL)

Los macrocitos aparecen como consecuencia de la omisión de un cierto número de divisiones durante la
maduración de los hematíes, y se encuentran en los trastornos de la eritropoyesis en los que existe una
maduración nuclear anormal, así como en aquellos casos en que la producción de hematíes es estimulada
por la eritropoyetina.
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OBJETIVO
1. Realizar una citometría hemática para la serie roja , incluyendo el cálculo de índices eritrocitarios,
y recuento de leucocitos, analizar los valores obtenidos.
2. Realizar tinción y recuento leucocitario a través de un frotis sanguíneo.

3. Analizar y comparar los resultados obtenidos con los intervalos de referencia.

4. Interpretar los valores obtenidos en cada determinación y analizar el estado clínico del paciente.

MATERIAL Y MÉTODO
MATERIAL ERITROCITO
Muestra de sangre anticoagulada con EDTA

FRTOTIS SANGUINEO
Portaobjetos
Pasteur

CONTEO DE GLÓBULOS ROJOS

Pipeta Thoma para glóbulos rojos
Cámara de Neubauer
Tubo de ensayo de 13x100 mm.
Gradilla

HEMATOCRITO
Pipeta Pasteur.
Tubo Wintrobe (para el Macrohematocrito)
Tubos capilares (para el Microhematocrito)
Tubos de ensayo 13x100

CONCENTRACIÓN DE LA HEMOGLOBINA
Celdas para espectrofotometro
Pipeta Pasteur.
Pipeta Shali con boquilla y adaptador
Pipeta volumétrica de 5 mL
Tubo de ensayo 13 x 100 mm
Tubo de Wintrobe.
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Tubos capilares.
Tubos de ensayo 13x100mm

MATERIAL LEUCOCITO
Muestra de sangre anticoagulada con EDTA
Microscopio óptico
Cámara de Neubauer
Portaobjetos de vidrio 75 x 25 mm
Pipetas tipo Pasteur
Pipeta de Thoma para leucocitos

REACTIVOS
FRTOTIS SANGUINEO
Alcohol metílico
Amortiguador de fosfatos pH 6.8
Colorante de Giemsa
Colorante de Wright

CONTEO DE GLÓBULOS ROJOS Y HEMATOCRITO

Líquido diluyente de Hayem
Solución de Drabkin
Solución estándar de cianometahemoglobina.
Alcohol al 70%

EQUIPO
FRTOTIS SANGUINEO Y CONTEO DE GLÓBULOS ROJOS
Microscopio

HEMATOCRITO
Centrífuga clínica (para el Macrohematocrito)
Microcentrífuga capilares (para el Microhematocrito)
Lector de Hto

CONCENTRACIÓN DE LA HEMOGLOBINA

Espectrofotómetro
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MÉTODOS

A. FROTIS SANGUINEO

1. En un extremo de un portaobjetos limpio y seco (soporte), con una pipeta pasteur se

coloca una gota de sangre anticoagulada de aproximadamente 3mm de diámetro.
2. Con otro portaobjetos (extensor) se coloca en un ángulo de 35 - 45°, delante de la gota de
sangre.
3. El portaobjetos extensor se desliza hasta tener contacto con la gota de sangre y se sostiene
en esa posición hasta que la sangre se esparce en todo lo ancho del portaobjetos.
4. El portaobjetos extensor se desliza con rapidez y suavidad hacia el otro extremo del
portaobjetos de soporte.
5. Dejar secar al aire los frotis sanguíneos preparados antes de teñir.

B. CONTEO DE GLÓBULOS ROJOS (TÉCNICA MANUAL)

1. Llenado de la pipeta de Thoma, hasta la marca 0.5 se toma de muestra.

2. Llenado con el diluyente hasta la marca de 11
3. Llenado de la cámara de Neubauer
4. Recuento Celular se leen las células de izquierda a derecha de arriba a abajo y se descartan las
células de la parte inferior derecha

C. HEMATOCRITO (HTO)

1. Llenar dos terceras partes de un tubo capilar con sangre venosa.

2. Sellar el tubo a la flama o con plastilina por el extremo más distante a la sangre con el objeto de
no hemolizarla.
3. Colocar en la microcentrífuga
4. Centrifugar de 10,000 a 12,000rpm durante 5 minutos.
5. Determinar el hematocrito utilizando el lector.

D. CONCENTRACIÓN DE HEMOGLOBINA (HB)

1. Colocar 5ml de reactivo de Drabkin en un tubo de 13x100mm

2. Tomar una pipeta de Shali y llena exactamente con sangre hasta la marca (20microL)
3. Limpiar la sangre adherida al exterior de la pipeta con una gasa.
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4. Transferir el contenido de la pipeta de Shali a la solución reactiva, enjuagando tres veces la pipeta
en la solución (La dilución final es de 1:251)
5. Mezclar la sangre con la solución Drabkin mediante rotación del tubo.
6. Dejar en reposo durante 10 minutos para la formación de cianometahemoglobina
7. Leer la absorbancia a 540 nm contra un blanco de reactivos
8. Realizar a la par la medición de un estándar o patrón
9. Calcular la concentración de hemoglobina empleando la técnica de comparación con un estándar.

E. RECUENTO MANUAL DE LEUCOCITOS

1. Homogeneizar por mezclado la muestra de sangre anticoagulada.
2. Seguir la técnica conforme al Anexo 2, para el uso y llenado de la cámara de Neubauer.
3. Calcular el número de leucocitos por μL (mm3) de sangre, de acuerdo a lo establecido en el Anexo
2.
F. RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS
1.Observar frotis sanguíneo con objetivo 40x para buscar un área donde las células se encentrarán
uniformemente distribuidas.
2. Localizada el área pasar al objetivo 100x (inmersión) y se comenzó el recuento diferencial
(clasificando los leucocitos según su tipo) contando 100 leucocitos consecutivos.

RESULTADOS
A. FROTIS SANGUÍNEO

imagen 1. preparación del frotis.

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imagen 2. frotis al microscopio, en esta imagen se muestran los eritrocitos, y los leucocitos de un
color morado.

B. CONTEO DE GLÓBULOS ROJOS

imagen 3. conteo de glóbulos rojos en cámara de Neubauer.

(595)(200)/ (5)(0.1)(0.2)² = 5.95x10⁶

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C. HEMATOCRITO

51%

D. CONCENTRACIÓN DE HEMOGLOBINA

imagen 4. dilución de sangre para determinación de concentración de hemoglobina.

Absorbancia a 540 nm= 0.509ª (38.3)= 19.49g/dL HB

VCM= 51 / 5.95 X 10= 85.71
HCM= 19.49 / 5.95 X10 = 32.75
CMHC= 19.49 / 51 X100= 38.21

RECUENTO MANUAL DE LEUCOCITOS

Leucocitos contados 155

(#𝐶)(𝐹𝐷) (155)(20)
𝐶é𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑚𝑚3 = 2
= = 𝟓. 𝟏𝒙𝟏𝟎𝟑 µ𝑳 (𝟏𝟎𝟎𝟎) = 𝟕. 𝟕𝟓 𝒙 𝟏𝟎𝟔 𝒎𝑳
(𝐶𝑐)(𝐴 )(𝑃) (4)(1𝑚𝑚2 )(0.1)
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Biometría Hemática

Muestra: Femenino Masculino

Valores de Referencia

Convencion
Determinación Resultado al SI Factor

Hemoglobina

Varón 13,5-18 g/dL 2,09-2,79 0.155

19.49 g/dL mmol/L

Mujer 12-16 g/dL 1,86-2,48

mmol/L

Hematocrito

Varón 40-54% 0.40-0.54 0.01

51%

Mujer 38-47% 0.38-0.47

Cuenta de Glóbulos Rojos

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Varón 4,6-6,2 x106 4,6-6,2 x1012 L 1x106

5.95x106 µL

Mujer 4,2-5,4 x106 4,2-5,4 x1012 L

µL

Índices de Wintrobe

VCM (fL) 85.71 80-96 µL 80-96 fL 1

HCM (pg) 32.75 27-31 pg 27-31 pg 1

CMHC 38.21 32-36 % 0,32-0,36** 0,01

Fórmula Leucocitaria

4,5-11 x103 1x106

Cuenta de Leucocitos 7.7x106 µL 4,5-11 x109 µL

Diferencial

0.01
Bandas 3% 0-7% 0-0.07

Basófilos 49% 0-1% 0-0.01

Eosinófilos 4% 1-4% 0.01-0.04

Linfocitos 6% 24-38% 0.24-0.38

Monocitos 7% 4-9% 0.04-0.09

Polimorfonucleares 31% 45-65% 0.45-0.65

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* Fracción de volumen

** Fracción de concentración

DISCUSIÓN
Dados los resultados que se colocaron en el formato de biometria hematica, comparándolos con los valores
de referencia contenidos en el formato, podemos decir lo siguiente en el concentracion de hemoglobina el
resultado es de 19.49g/dL, los valores de referencia tienen como máximo 18g/dL, por lo que nuestro valor
es ligeramente alto, pero lo que podemos ver en las imágenes de conteo es que había una gran concentración
de eritrocitos, así que este valor si corresponde en parte al esperado. En el resultado de hematocrito se
obtuvo en 51%, que comparándolo está en los niveles de referencia. En la cuenta de glóbulos rojos se tuvo
un resultado de 5.95, que también se encuentra en los márgenes de valores de referencia esto significa que
presenta una cantidad correcta de glóbulos rojos, lo que descarta cualquier enfermedad que provoque una
alteración en este valor. En los índices de Wintrobe en el VCM= 85.71 que se encuentra en el rango
propuesto, lo que significa que es normocítica. En HCM= 32.75 comparado con el máximo valor que es de
31, podemos ver que está ligeramente por arriba del valor de referencia lo que nos dice que puede tener
macrocitosis,que esta entre otras condiciones se puede dar por déficit de vitaminas en general B12 .En el
CMHC=38.21%, comparándolo con el valor de referencia máximo que es de 36% podemos notar que este
resultado también es alto, viendo las imágenes podemos darnos cuenta que el color que presentan es pálido,
sin embargo se ve que su su concentración es alta aunque veo que son pequeños los eritrocitos.

En el recuento diferencial de leucocitos, se obtuvo un número de neutrófilos, linfocitos, monocitos,

eosinófilos y basófilos que entran dentro del rango normal de acuerdo a la hoja de valores de referencia,
también su morfología se encontraba normal, no se observó malformaciones en el núcleo y el color del
citoplasma se observó normal.

CONCLUSIONES
En la realización de esta práctica pudimos hacer una biometria hematica y sacar los índices de esta, así
como observamos la morfología de los eritrocitos, y su coloración, esta práctica nos permitió conocer la
función que tiene la biometría hemática y cómo podemos interpretar los valores obtenidos, para discutir la
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correlacion clinico-patologica de los valores obtenidos, con la información previamente estudiada del
tema.

Se aprendió a usar las técnicas hematológicas, tinciones y recuento diferencial leucocitario por frotis
sanguíneo. Se diferenciaron los tipos de leucocitos y se compararon los resultados con los valores de
referencia. Se logró dar un diagnóstico clínico con base en los resultados.

REFERENCIAS
1. Dr.Robert S.Hillman y Dr.Dane R. Boggs. Manual de Hematologia. México. 1977. ed el manual
moderno.
2. Guillermo J.Ruiz ArgÜelles. Fundamentos de Hematologia. 3° edición. México.2003.editorial
médica panamericana.
3. Manual de obtención y manejo de muestras para el laboratorio clínico. servicio andaluz de salud.
sevilla. 2009.
4. Guyton-Hall; Tratado de Fisiología Médica.. Novena edición. Editorial Interamericana. 1998.