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CAPÍTULO 10
CAPÍTULO 20
Se requiere secado por congelación para los ingredientes farmacéuticos activos que no son lo
suficientemente estables en el estado de la solución. Insuficientemente estable significa que el
medicamento se degradará excesivamente en solución dentro de un período de tiempo no
modificable para comercializar el producto como una solución lista para usar. Muchas moléculas
pequeñas y grandes son lábiles en presencia de agua y en el transcurso de varios días, varias
semanas se degradarán a un punto que es inaceptable, por lo general más de 10% de actividad
por pérdida o la potencia en comparación con la cantidad declarada en la etiqueta de
ingrediente activo. Si no fuera por la tecnología de liofilización, muchos agentes terapéuticos
importantes no estarían disponibles comercialmente.
Las tablas 10-1 y 10-2 presentan dos listas de productos comerciales liofilizados. La Tabla 10-1
presenta información general sobre estos productos, mientras que la Tabla 10-2 se enfoca más
en las formulaciones cuantitativas específicas para cada producto. No son exhaustivos y no
estarán actualizados en el momento de esta publicación, pero brindan excelente información
representativa sobre los productos formulados congelados que se utilizan con éxito para salvar
y afectar vidas.
Además de superar los problemas de estabilidad al convertir una solución en un polvo seco, el
secado por congelación también ofrece las ventajas de procesar el producto en forma líquida.
Los polvos estériles también pueden producirse mediante otros procesos (no cubiertos en este
libro), como el secado por pulverización, el secado por congelación por pulverización o la
cristalización estéril seguida del llenado del polvo. Sin embargo, el secado por congelación
ofrece ciertas ventajas sobre otros procesos de producción de polvo, incluido el hecho de que
el producto se puede secar sin la necesidad de temperaturas elevadas, la esterilidad del
producto se logra y mantiene más fácilmente, los contenidos del material seco permanecen
homogéneamente dispersos y los tiempos de reconstitución en general son mas rapidos
Además, para los medicamentos que son sensibles al oxígeno, el secado por congelación es una
mejor alternativa para producir polvo, porque el ambiente durante el proceso de secado por
congelación puede ser una condición libre de oxígeno y un gas inerte puede llenar el espacio de
cabeza del contenedor antes y durante el cierre de El contenedor.
El secado por congelación también tiene ciertas limitaciones, tal vez el costo más importante en
comparación con otros procesos que producen polvo y, ciertamente, es más costoso que el
llenado y tapado de líquidos. Los compuestos volátiles en la formulación podrían eliminarse si
se requieren altos niveles de vacío y se sabe que un alto vacío aumenta los niveles extraíbles del
cierre del tubo. Se sabe que las etapas de congelación y secado causan problemas de estabilidad
con algunas proteínas que generalmente se pueden superar utilizando estabilizadores llamados
crio o lioprotectores. Debido a que el producto se ha esterilizado previamente antes de cargarlo
en la cámara de liofilización, la esterilidad debe mantenerse durante el proceso de carga y
descarga y también durante el proceso de secado por congelación. Debe demostrarse la
capacidad de mantener condiciones asépticas durante estos procesos, así como la validación de
la esterilización de la cámara de liofilización y todas las conexiones y los gases que conducen a
la cámara.
El producto ideal de secado por congelación tiene una apariencia estética muy agradable (es
decir, torta intacta, color de apariencia uniforme y apariencia) (Fig. 10-2), resistencia suficiente
del ingrediente activo, estabilidad química y física, sequedad suficiente y otras especificaciones
que se mantienen durante todo el período de validez del producto, una porosidad suficiente que
permite tiempos de reconstitución rápidos y la ausencia de microorganismos (esterilidad),
pirógenos y material particulado después de la reconstitución. Además, después de que el
medicamento esté en solución, debe permanecer dentro de ciertas especificaciones
predeterminadas (por ejemplo, potencia, pH, libre de material particulado) durante un cierto
período de tiempo antes de la administración. El tiempo mínimo deseado para la estabilidad de
la solución después de la reconstitución es de 24 horas a temperatura ambiente, aunque muchos
productos, especialmente los biofarmacéuticos, tienen una temperatura ambiente
insuficientemente estable y deben refrigerarse incluso para estos cortos periodos de tiempo.
Además, los requisitos europeos que generalmente se han aplicado en todo el mundo requieren
productos sin conservantes antimicrobianos para ser utilizados (administrados)
"inmediatamente", que generalmente se refieren a las tres horas posteriores a la reconstitución.
Los productos liofilizados reconstituidos con diluyentes que contienen conservantes
antimicrobianos se pueden almacenar por mucho más tiempo dependiendo de la estabilidad del
medicamento en la solución que de los posibles problemas de contaminación microbiana.
Una "regla general" para los productos liofilizados que contienen moléculas pequeñas es "la más
seca y mejor" porque la mayoría de los problemas de estabilidad con moléculas pequeñas están
relacionados con la humedad. Sin embargo, para productos liofilizados que contienen moléculas
grandes, "más seco no es necesariamente mejor". Cada molécula es diferente, pero en general
para las moléculas grandes, los efectos de la congelación y el secado pueden ser tanto o más
perjudiciales para el constituyente activo como el potencial para degradación hidrolítica
Las moléculas de fármaco liofilizadas, evidenciadas por el requisito de estar liofilizadas, son
moléculas relativamente inestables. Incluso en estado seco, las formulaciones liofilizadas
generalmente requieren aditivos para mantener el pH, la isotonicidad o la protección contra los
efectos adversos del proceso de congelación y ordenación. También pueden requerirse aditivos,
no para fines de estado seco, sino para mantener la estabilidad y, en algunos casos, la solubilidad
del fármaco en solución después de agregar un diluyente de reconstitución. Dichos aditivos para
mejorar la estabilidad y solubilidad de la solución incluyen tampones, agentes de acción
superficial y agentes complejantes. Para que los medicamentos reconstituidos sirvan como
productos de dosis múltiples, un sistema conservante antimicrobiano debe ser parte de la
formulación liofilizada o parte del diluyente de reconstitución. La Tabla 10-3 enumera ejemplos
de aditivos de formulación en formulaciones liofilizadas.
Las formulaciones liofilizadas que contienen moléculas pequeñas no requieren ningún aditivo,
debido a la gran cantidad de fármaco que se liofiliza (generalmente más de 100 mg por envase),
o los aditivos requeridos son para fines relativamente simples, como la adición de polvo al polvo.
amortiguando la formulación, proporcionando isotonicidad, o quizás ayudando a mantener la
lubricación del fármaco. Los desafíos de la formulación para formulaciones de moléculas
pequeñas son relativamente simples, al menos para los científicos experimentados en
formulación.
La estabilización de moléculas grandes durante el secado por congelación requiere mucho más
experiencia de formulación y desafío. Las formulaciones liofilizadas de moléculas grandes suelen
contener uno o más de los siguientes aditivos: agentes de carga, lioprotectores, surfactantes y
tampones. Algunas formulaciones liofilizadas de moléculas grandes, típicamente cuando el
contenido de proteína está tan diluido (niveles bajos de mg de tong / mL), contienen albúmina
de suero humano o algún otro componente que sirva como ligantes competitivos para minimizar
la pérdida de proteína debido a la adsorción a Fabricación de superficies (filtros, tubos, bolsas
de mezcla desechables, acero inoxidable) y superficies de recipientes primarios (vidrio y frote).
Ciertos aditivos como el manitol y la sacarosa también pueden servir como modificadores de la
tonicidad. Las sales se evitan usualmente porque disminuyen la temperatura crítica de la
formulación (temperatura de transición vítrea o muy baja) y se sabe que causan efectos de
destabilización dependientes de la concentración en las proteínas. La Tabla 10-2 presenta una
lista de formulaciones de proteínas liofilizadas, no para ser exhaustivas sino para dar al lector
una idea de la composición cualitativa de estas formulaciones.
La teoría primaria, aunque no está completamente aceptada, para explicar los efectos
crioprotectores de ciertos aditivos, se denomina teoría de "soluto excluido" o "exclusión
preferencial" (1-3). Algunos científicos han sugerido que los solutos que ayudan a evitar que la
proteína se disocie durante la congelación lo hacen porque se excluyen de la superficie de la
proteína, como pueden demostrar los experimentos de diálisis (donde la proteína y el excipiente
no se encuentran juntos en el dializado). Cuando se excluyen los solutos de la superficie de la
proteína, aumenta el potencial químico tanto de la proteína como del soluto. Esto presenta un
entorno termodinámicamente desfavorable para la forma desnaturalizada de la proteína, ya que
la forma madura es una forma desplegada y proporciona una mayor área de superficie al
disolvente. La forma nativa, con menos área de superficie, es por lo tanto favorecida
termodinámicamente.
Otra forma de explicar los efectos de los crioprotectores es el hecho de que inducen una
hidratación preferencial de la superficie de la proteína porque al no unirse a la superficie de la
proteína, esto favorece que las moléculas de agua se unan preferentemente y esto ayuda a
estabilizar el proteinstato nativo.
Los azúcares (sacarosa, lactosa, glucosa, trehalosa), los polioles (glicerol, manitol, sorbitol), los
aminoácidos (glicina, alanina, lisina) y los polímeros (polietilenglicol, dextrano, polivinilpirroli) se
presentan como posibles crioprotectores. Los mejores o, al menos, los crioprotectores más
preferidos parecen ser polietilenglicol (PEG) (peso molecular 3350 Daltons), sacarosa y
trehalosa.
Para las proteínas que requieren tanto la crioprotección como la lioprotección, puede ser
sensato emplear tanto un agente como el PEG junto con un azúcar. Un ejemplo de un producto
terapéutico comercializado con esta combinación es la venoglobulina-S, que contiene PEG y
sorbitol. Una posible advertencia al uso de PEG en formulaciones liofilizadas es la posibilidad de
una separación de fase líquido-líquido inducida por la congelación de la concentración, un
evento implicado en el despliegue de proteínas (4).
En ambas teorías del estado seco, es importante que el excipiente estabilizador, el lioprotector,
exista en el estado amorfo, de ahí el nombre de "vitrificación" (formación de vidrio). La
estabilidad de la proteína en el estado seco resulta de la proteína existente con un soluto amorfo
en una matriz rígida y rígida, donde el contenido de agua en la matriz también ayuda a estabilizar
la proteína. Obviamente, un exceso de agua y la proteína se degradarán por procesos químicos
(por ejemplo, , desamidación), pero las proteínas necesitan cierta cantidad de agua para
mantener una estructura secundaria y alta. Por lo tanto, los excipientes que permanecen
amorfos durante el proceso de liofilización molecular interaccionan molecularmente con la
proteína amorfa y juntos la matriz confiere estabilidad a la proteína para la estabilidad a largo
plazo en estado seco. Se ha demostrado que, para una estabilización óptima, el azúcar
excedente debe permanecer en la misma fase amorfa que contiene el péptido o la proteína
(todos los mecanismos anteriores son compatibles con esta observación). Por ejemplo, la
cristalización de manitol se ha implicado en explicar la estabilización incompleta de la rhGH
liofilizada (16) y la estructura de la albúmina de suero bovino, la ovalbúmina, la \ beta -
lactoglobulina y la lactato deshidrogenasa (LDH) después de la liofilización (17). Además de la
cristalización, la separación de fases amorfas también puede ocurrir, particularmente en el
estado congelado.
Una vez que los excipientes cristalizan, ya no interactúan molecularmente con la proteína y no
pueden protegerla. Los excipientes amorfos, combinados con la proteína, tienen una
temperatura de transición vítrea (Tg) única en estado seco. Si la temperatura de
almacenamiento excede la temperatura de transición vítrea, el estado físico de la matriz seca
cambia de un sólido vítreo a un sólido gomoso que puede ocasionar un colapso o un colapso
parcial de la torta liofilizada. El colapso del producto no es necesariamente perjudicial para la
estabilidad de algunas proteínas, aunque la elegancia farmacéutica sigue siendo un importante
parámetro de calidad de los productos liofilizados.
La conversión gradual de excipientes del estado amorfo al cristalino ocurre cuando hay
movilidad molecular adecuada para la nucleación y el crecimiento de cristales (12). Movilidad
molecular es un término usado para describir el movimiento de moléculas en una formulación.
El agua actuará como un plastificante para disminuir la temperatura de transición vítrea de los
sólidos amorfos y aumentar la movilidad molecular del sistema amorfo (18). La movilidad
molecular ocurre típicamente cuando el sólido amorfo se almacena a una temperatura mayor
que su temperatura de transición vítrea, pero también ocurre a temperaturas inferiores a la
temperatura de transición vítrea de ciertos sólidos amorfos (19,20). La movilidad molecular de
las moléculas de proteína se puede medir mediante la resonancia magnética nuclear de 1H en
estado sólido (21), la temperatura de movilidad crítica basada en la relajación por resonancia
magnética nuclear (22) y la resonancia magnética nuclear en estado sólido a 13C (23). Todas
estas técnicas miden la capacidad de agua en las formulaciones liofilizadas y esto se puede
correlacionar con la estabilidad de la proteína.
Los aditivos en una formulación pueden prevenir la cristalización de carbohidratos. Los ejemplos
incluyen polímeros de alto peso molecular (p. Ej., Dextrano y polivinilpirrolidona, (24) y
proteínas (p. Ej., Somatotropina bovina recombinante (BST) (12). Los polímeros pueden
aumentar la temperatura de transición vítrea, disminuyendo así la movilidad del soluto amorfo,
mientras que proteínas como BST) se cree que interfieren con las tasas de nucleación o con el
número de núcleos formados para soportar el cristal.
CONCENTRACIONES DE ESTABILIZANTES
Hay algunos datos que sugieren que la cantidad de azúcar para una protección óptima debería
ser suficiente para satisfacer los sitios de la proteína seca que tienen una fuerte afinidad por el
agua (por ejemplo, residuos orpo cargados). Los estudios de absorción de vapor de agua en
proteínas sólidas describen este nivel como una "capa de agua" (11,26). Satisfacer estos sitios
(al proporcionar suficientes azúcares amorfos para interactuar con ellos en el estado seco)
estabiliza las proteínas. Por ejemplo, la rhGH contiene aproximadamente sesenta y seis sitios de
unión fuertemente por agua por molécula de proteína; aproximadamente esta cantidad de
diversos azucares requeridos para la máxima estabilización del liofilizado en el almacenamiento
acelerado (16). El anticuerpo monoclonal humanizado recombinante (rhuMAb), una molécula
mucho más grande que contiene aproximadamente 500 de estos sitios de fuerte unión al agua,
una proporción de aproximadamente 360 a 500 moles de proteína mol de azucarero
proporcionó la mejor estabilidad de almacenamiento para la proteína liofilizada (27). Las
formulaciones con combinaciones de sacarosa (20 mM) o trehalosa (20 mM) y manitol (40 mM)
tuvieron una estabilidad comparable a aquellas con sacarosa o trehalosa sola a 60 mM. Las
formulaciones con manitolalona fueron menos estables.
Además de los azúcares, también se emplean proteínas como la gelatina y la albúmina para
proporcionar una estabilización general en productos biofarmacéuticos liofilizados. En
particular, la albúmina humana (purificada a partir de plasma) se encuentra ampliamente en
productos biofarmacéuticos (y, por sí misma, también se considera un producto
biofarmacéutico).
En general, una formulación liofilizada que es predominantemente cristalina "se verá" mejor, es
decir, se verá más elegante farmacéuticamente que una formulación que es
predominantemente amorfa. Los solutos cristalinos también son mucho más fáciles de secar
porque el agua se adsorbe en la superficie del soluto. en lugar de dentro de la estructura
molecular del soluto, como es el caso de los amorphoussolutes. Sin embargo, las formulaciones
amorfas ofrecen ventajas de estabilidad si el ingrediente activo es una proteína, minimiza el
potencial de secado excesivo del producto y puede absorber la humedad durante un tiempo que
puede liberarse del cierre de goma.
Manitol
La sacarosa afectará especialmente el grado de cristalización del manitol y causará niveles más
altos de hidrato de manitol y la humedad residual resultante (35).
Mantener el manitol en estado amorfo durante la liofilización para lograr una estabilización
óptima puede lograrse (39). Todas las enzimas estudiadas se protegieron cuando el manitol se
mantuvo metamorfos, pero se volvieron inestables con un aumento en la cristalinidad del
manitol. El manitol en tortas liofilizadas que contenían enzima y tampón de fosfato de sodio
permaneció amorfo a bajas concentraciones (<200 mM), aunque el recocido de la solución
congelada dio lugar a la cristalización de manitol. Sin embargo, el manitol en concentraciones
más altas (> 250 mM) en esta formulación enzimática-fosfato cristalizó y no tuvo efectos
protectores sobre la conservación de la actividad enzimática después del secado por
congelación.
La rafinosa no licuará un fármaco inestable, así como la sacarosa o la trehalosa (41). Esta
observación fue en contraste con otros estudios (42-44) que mostraron que la rafinosa es tan
efectiva como la astrehalosa y superior a la lactosa, la maltosa y la sacarosa para estabilizar
varias enzimas. Una posible explicación de estas diferencias puede implicar diferencias en las
condiciones de deshidratación y en la capacidad de almacenamiento.
Las formulaciones de LDH que contienen maltodextrina protegieron la LDH contra la inactivación
durante el secado por congelación debido a la naturaleza amorfa de estos almidones
parcialmente hidrolizados (46). También se informó que las metododextrinas son mejores
lioprotectores para la LDH que la sacarosa o la maltosa, aunque el mecanismo es desconocido.
Los efectos de estabilización de los aditivos amorfos sobre las proteínas liofilizadas son bien
aceptados sobre la base de varias publicaciones. La galactosidasa se estabilizó con inositol
mientras este receptor permaneciera amorfo, pero si el inositol cristaliza durante el
almacenamiento, la actividad de la enzima disminuye (47). La cristalización del inositol se evitó
mediante la adición de polímeros tales como dextrano, Ficoll y carboximetilcelulosa de sodio.
Todos los solutos se concentran durante el proceso de congelación. Si los solutos se cristalizan,
se separan de los solutos que no cristalizan. Por lo tanto, solo los solutos que no cristalizan
tienen ningún contacto molecular con una proteína en estado congelado. La concentración
durante la congelación puede tener varios efectos adversos posibles. Estos incluyen los efectos
desnaturalizantes de las sales en las proteínas, la cristalización de los componentes del tampón
que cambian el pH y la desnaturalización por congelación de algunas proteínas si no están
protegidas por excipientes crioprotectores.
donde K indicó la capacidad de la matriz de azúcar amorfa para asociarse a un punto de equilibrio
con la proteína, y la hélice C0 y la hélice Cmax indicaron el contenido de hélice \ beta en ausencia
de azúcar y niveles saturados de azúcar, respectivamente. Los efectos de la conservación de los
azúcares podrían caracterizarse por K y Caxx-hélice, mostrando que ambos valores tendían a ser
más altos al disminuir los valores de T para el azúcar amorfo. Una matriz de azúcar amorfa con
valores de T más bajos es estructuralmente más flexible. En este estudio, la sacarosa (Tg65 ° C)
mostró un mayor efecto estabilizador en comparación con la trehalosa (Tg80 ° C). Sin embargo,
de este estudio no se puede concluir que la sacarosa sea un estabilizador superior.
No todos los azúcares son elecciones sabias como estabilizadores para proteínas y péptidos
liofilizados. Los azúcares reductores, como la glucosa, la lactosa y otros monosacáridos, pueden
formar aductos con la proteína en el primer paso de la reacción de Maillard. La glucosa causó
modificaciones covalentes rápidas de la relaxina humana, donde se formaron aductos
covalentes de glucosa con varios aminoácidos en las cadenas laterales de la proteína (51). La
glucosa también causó una cantidad significativa de escisión de serina del extremo C-terminal
de la cadena B de la relaxina. Estas reacciones de degradación no ocurrieron si se utilizara
manitolor trehalosa en lugar de glucosa como agentes de carga y estabilizadores.
La hemoglobina es un ejemplo de una proteína que no está protegida por excipientes amorfos
durante la liofilización (52). La sacarosa, la trehalosa, el Tween 80 o el Triton X-100 tuvieron poco
efecto protector contra el daño inducido por la separación de fases durante el secado por
congelación de las soluciones de hemoglobina. Sin embargo, los solutos de cristalización como
el manitol pudieron estabilizar la hemoglobina al segregar la solución concentrada de
congelación en dominios microscópicos que bloqueaban la propagación y la nucleación de los
eventos de separación de fases
1. Use un disacárido no reductor (sacarosa o trehalosa) que forme una matriz amorfa con
la proteína en estado sólido. No use azúcares reductores (lactosa, glucosa,
maltodextrinas) ya que estos pueden degradar las proteínas a través de la reacción de
Maillard.
2. Use un agente tensoactivo no iónico como el polisorbato 20 u 80 (55).
3. Use un agente de carga cristalizante como el manitol o la glicina, pero no use agentes
de carga cristalizantes solos con la proteína.
4. No use aditivos voluminosos como el dextrano aunque tengan altas temperaturas de
colapso. Son demasiado voluminosos para interactuar con la proteína y formar una
matriz amorfa.
CONSIDERACIONES DE EMBALAJE
El envase primario para productos liofilizados es el vial de vidrio. Los viales y jeringas de plástico
(de doble cámara) también pueden ser sistemas de empaque primario para productos
liofilizados, pero la gran mayoría de las formas de dosificación liofilizadas están contenidas en
viales de vidrio.
Los viales de tubo son preferibles a los viales moldeados por soplado porque la configuración
del fondo del vial es más plana y más delgada, lo que permite un mejor contacto con la superficie
del estante y una transferencia de calor más eficiente del estante al producto.
Los cierres de caucho más comunes para la liofilización son configuraciones de ventilación
simple (estilo iglú) o de ventilación doble (de dos patas) (Fig. 10-8), aunque existen cierres de
ventilación triple e incluso de hasta 12 salidas. Según DeGrazio (56), aunque el área de
ventilación total es la misma para estas configuraciones, las configuraciones de 1, 2 o 3 salidas
son más eficientes en la conductancia del vapor de agua que sale del vial en comparación con el
cierre de 12 salidas.
Otros dos problemas comunes con los cierres de caucho y los productos liofilizados durante la
fabricación son (i) el cierre no se inserta completamente en la abertura del vial después de que
se completa el ciclo de liofilización, y (ii) el cierre se pega al estante después de que los estantes
hayan bajado a Permite la inserción completa del cierre en el vial.
The West Company ha desarrollado un tapón especial para productos liofilizados (LyoTecTM) en
el que la superficie superior del tapón se trata con FlurotecR ™ que evita que el tapón se adhiera
a las placas de presión superior de los estantes de liofilización, que de otro modo requerirían
una intervención manual Viales del liofilizador. El segmento de tapón que hace contacto con la
abertura del vial de vidrio no está recubierto para permitir la máxima integridad del cierre del
recipiente (ver Fig. 7-10).
CO-SOLVENTES
El alcohol butílico terciario (TBA) ofrece ventajas cuando se usa como co-disolvente con agua
(57). Se usó TBA para permitir que la torta liofilizada del antibiótico, tobramicina, se aflojara
fácilmente como un polvo que fluye libremente para que los contenidos se puedan verter del
vial en la cirugía ortopédica (58). La aplicación de una velocidad de congelación lenta permitió
la cristalización del disolvente TBA antes de secar, con recocido después de la congelación,
reduciendo significativamente el nivel de TBA residual en la torta final.
El uso de co-solvente en formulaciones liofilizadas ofrece algunas ventajas, pero Teagarden debe
considerar las limitaciones significativas según lo revisado y resumido aquí y en la Tabla 10-4.Los
niveles de solventes residuales en el producto terminado pueden ser un problema, pero los
pasos pueden Tomarse para controlar las cantidades. Mientras que los niveles de terc-butanol
residual en una matriz cristalina están generalmente en el rango de 0.01% a 0.03%, los sistemas
amorfos pueden contener 3% de residuos o más. Estos niveles pueden disminuirse en
formulaciones amorfas al (i) humidificar el sólido seco para disminuir la temperatura de
transición del vidrio, permitiendo la cristalización de la matriz y la posterior liberación rápida del
terc-butanol residual; (ii) agregar una etapa de recocido para permitir que cualquier hidrato de
terc-butanol no congelado restante se cristalice y produzca un producto más uniforme; o (iii)
aumentar realmente la cantidad de terc-butanol en la formulación a un nivel por encima de la
concentración umbral requerida para la cristalización eutéctica del disolvente. Se ha
demostrado que estos pasos reducen la cantidad de terc-butanol residual a niveles de 1% o
menos.
TÚ HACES TODAS
LAS DIAPOSITIVAS,
YO ME HE TOMADO
EL TIEMPO DE
TRADUCIR TODO ….
GRACIAS :D