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ESTEROSCOPIOS
Es Importante saber qué tipo de esteroscopio se utilizara en el laboratorio, hay unos que
vienen con luz externa y luz interna, los de luz interna no son recomendables porque
calientan los embriones afectando su viabilidad.
Este modelo sirven más para ver ovocitos y algunas otras estructuras.
Estos no son ideales para trabajar con transferencia, porque se pueden observar muy
superficiales. El primero tiene dos bombillos uno en la parte de arriba u otro en la parte de
abajo.
ECOGRAFOS
Este Ecógrafo tiene impresora para colocar memoria, para grabar imágenes, pero la
resolución es muy baja este microscopio es ideal para campo se puede utilizar todo el día y
es japonés, para saber interpretar el ecógrafo debemos conocer bien los sistemas de
reproducción del macho y la hembra. Hay unos pequeñitos que la pila le dura unas 2 a 4
horas si se piensa trabajar todo el día ganadería no sirve porque se recalienta.
TATUADOR Y TOPIZADOR
ELECTROEYACULADOR
Este electro eyaculador es automático hay que tener en cuenta la carga de corriente que se
transmite al toro, todos no reaccionan a la misma potencia porque hay toros que eyaculan
rápido, otros se pueden caer de tanto voltaje o que estaba directo en el momento de
conectarlo también pueden salir encalambrados debido a transmisión muchos impulsos,
este se puede llevar cargado utilizando encendido automático o manual que de esta ultima
forma no es aconsejable utilizarlo ya que todos los toros no reaccionan al mismo impulso,
siempre que lo prendamos tiene que estar apagado, porque cuando se conecta al meter la
bala y se prende los impulsos fuertes que transmiten tumban el toro.
MATERIALES
FUNDAS
La mejor funda para transferencia de embriones es la francesa, hay que saberla destapar, el
embrión sale por un lado donde se encuentra el orificio, para destaparlo lo ideal es retirarlo
del empaque por la parte de arriba no por la parte de abajo se coloca el embrión luego la
pistola.
La forma de almacenar una pistola es con la fibra en la parte de atrás para que no se vaya a
perder el aro que es el encargado de coger la funda, tratar de no cogerla tanto ya que esta
totalmente estéril porque este irá dentro del útero. Tener bien la pistola para evitar que se
salga el embrión, luego se coloca la camisa y aplicamos gel especial. La posición de la
pistola mientras terminamos de prepararla debe ser horizontalmente por que si la ponemos
en una posición vertical el embrión se cae. Luego procedemos a pasar la pistola por la
cerviz.
La pistola es del mismo tamaño que la funda esta tiene la capacidad de llegar delante del
punto blanco, importante antes de utilizar la pistola desinfectarla con alcohol y luego la
limpiamos para evitar que el embrión se muera.
ESTILETE
El estilete sirve para permitir que la sonda fole coja firmeza y pueda pasar por la cerviz a
realizar el lavado en la donante.
SONDA FOLE.
LAVADO DE EMBRIONES
La sonda es la que recogerá los embriones necesita ir acompañada del estilete para que le
de firmeza y pueda pasar por el cerviz porque sola por su consistencia no le permite entrar,
la sonda tiene dos entradas o dos salidas también viene irradiada, para llenar balón
importante sacar el estilete, la función del balón es no dejar que salga la sonda, también se
debe lubricar el estilete con liquido para no causar lesiones.
El PBS está compuesto por suero lactato de rinyer solución de jarba x 100 cm de PBS que
es con el que se utilizara para hacer el lavado.
PARA ESTERILIZAR
Se utiliza la autoclave, papel periódico cinta, desinfectante cuaternario se lava con jabón
neutro se seca y se pasa al autoclave a una temperatura de 110º se deja aproximadamente
media hora quedando estilizadas las sondas fole.
CONDUCTOS O LLLAVES
Los filtros son los que recogen los embriones después del lavado, no se debe dejar que les
llegue luz ni rayos del sol es mejor protegerlo para que no se mueran los embriones.
Al dejar que el segundo filtro se llene de liquido con PBS se perderán los embriones, lo
ideal es no dejar que se seque el filtro por que se mueren los embriones.
PISTOLA MICROPIPETA
Hay pistolas de diferentes tamaños que facilitan el manejo, la clave de manejarla está en
saber coger los embriones y clasificarlos el tiempo aproximado es de 5 minutos hay que
estar observándolos por el esteroscopio
CAJAS DE PETRI O PLATOS CUADRADOS
Se utiliza para echar los ovocitos, se clasifica cada una por letras
TRABAJO EN LABORATORIO
TIEMPO: 15 DIAS
DIA HORA DOSIS
0 DIB + 50 MG DE PROGESTRERONA
(GESTAVET) +2ML BE
4 6:00 am 3,2 ml pluset
6:00 pm 3,2 ml pluset
5 6:00 am 2.4 ml pluset
6:00 pm 2,4 ml pluset
6 6:00 am 1.6 ml pluset + 3 ml PgF2α
6:00 pm 1.6 ml pluset + 3 ml PgF2α + Retiro DIB
7 6:00 am 0,8 ml pluset
6:00 pm 0,8 ml pluset
8 6:00 am PRIMERA I.A + 2.5 GNRH
6:00 pm SEGUNDA I.A
9 6:00 am TERCERA I.A
15 2:00 pm Colecta, evaluación y Congelación
Los pasos para desarrollar esta práctica, una vez hayan sido superovuladas e
inseminadas las hembras:
MATERIALES
Guantes de látex
Mangas para palpación
Alcohol
Jeringa y Aguja calibre 18
Lidocaína
Tijeras
Yodo
Agua
Papel secante
Sonda Foley
Estilete
Sondas de conducción de dos vías
Filtro de colecta
Medio de lavado (PBS o lactato de Ringer)
Gel lubricarte
PROCEDIMIENTO
después de terminar el lavado en el cuerno hay que sacar el liquido (la misma
cantidad que se deposito al inicio) de la sonda Foley (desinflar el balón) y volver a
realizar el mismo procedimiento en el otro cuerno
ACTIVIDAD REALIZADA:
El 25 de noviembre del 2010 nos dirigimos al corral de la finca el Remanso con el fin de
realizar el correspondiente simulación de lavado uterino a las vacas con el procedimiento,
manejo de los materiales y una correspondiente aclaración de dudas.
Cada integrante del grupo paso y realizo una previa palpación, dio un diagnostico y
posteriormente si se encontraba vacía el lavado. Con este procedimiento lo que se buscaba
era realizar un lavado a las vacas vacías con el fin de afianzar conocimientos y despejar
dudas, manejo de los materiales y aplicar el proceso tal como se debe realizar.
Los resultado fueron exitosos, el trabajo se culmino alrededor de las 5 de la tarde.
Materiales utilizados:
Sonda Folley
Estilete
Guantes
Fundas
Lactato De Ringer
Filtro
Agujas, Jeringas
Conductos
Gel no espermicida
Lidocaína 2%
El trabajo en el corral se inicio alrededor de las 3 de la tarde con el ganado de ordeño con
los siguientes resultados:
3. Aplicación de Lidocaína 2%
4. Amarrado de la cola
8. Palpación
13. Llenado del cuerno con solución salina del tamaño de una gestación de 45 a 60 días
Se pueden obtener crías de novillas que aún no alcanzan la edad y peso para cargarse, ya que
será la receptora quien se encargue de mantener la preñez y parir la cría.
Es posible obtener becerros de vacas de alta calidad que por enfermedad o edad avanzada ya no
son capaces de producir por si mismas una cría.
Es una excelente ayuda para evaluar la capacidad fertilizadora de los sementales, así como para
determinar si son portadores de algunos defectos hereditarios.
El procedimiento está constituido por infinidad de detalles que deben realizarse a la perfección para
lograr buenos resultados, por lo que se debe contar con personal altamente capacitado para llevarlo
a cabo.
La principal desventaja es la imposibilidad para predecir los resultados, ya que hay mucha variación
en la producción de embriones por cada donadora; además de que muy fácilmente una pequeña
falla en el proceso reduce drásticamente el porcentaje de gestación.
Transferencia a la receptora.
En el aspecto sanitario, deberán estar libres de enfermedades, especialmente aquellas que afectan
la función reproductiva; según la región, deberán estar sometidas a un estricto programa de
vacunación y desparasitación para garantizar un buen estado de salud.
Deberán estar en perfectas condiciones físicas, ni gordas ni flacas, para obtener los resultados
esperados.
De preferencia deben emplearse en este programa toros probados, en producción y tipo, para
garantizar la calidad de las crías. Si se emplea un toro no probado, los becerros resultantes quizá
tengan menos valor que todo lo que se invirtió para producirlos.
Para esto se usa una hormona (FSH), que hace que en ambos ovarios de la vaca se desarrollen
varios folículos, los cuales ovulan después de que la donadora sale en calor al aplicarle otra
hormona, prostaglandina, dos días después de haber empezado a inyectarle FSH; ésta se le inyecta
cada 12 horas por vía subcutánea durante 4 días.
Procedimiento de lavado.
Si el lavado se hizo en forma adecuada es muy poco probable que quede algún embrión en el útero,
pero para mayor seguridad se aplican prostaglandinas a la donadora para provocarle un calor y evitar
que quede cargada.
Los embriones son microscópicos, por lo cual necesitamos localizarlos en el laboratorio con la ayuda
de un microscopio estereoscópico. Una vez terminado el lavado, el filtro se vacía en un recipiente de
plástico y se enjuaga con solución a presión. El recipiente se revisa a 15 aumentos y al localizar cada
embrión se va pasando con una pipeta a otro recipiente más pequeño que contiene la misma solución
con más albúmina.
Sólo sirven para transferencia aquellos embriones que están en un estado de desarrollo de mórula
o blástula, que es lo normal a los 7 días después de la fecundación. Los óvulos que no fueron
fecundados y los embriones de escaso desarrollo son desechados.
Desarrollo embrionario.
¿En base a qué se clasifican los embriones?
Los embriones transferibles son muy parecidos entre sí, pero pueden tener cierta diferencia en su
desarrollo y en sus características morfológicas. En base a esto se les clasifica de la siguiente
manera:
CALIDAD 3: Regular, con defectos mayores, pero apto para ser transferido.
Los embriones de las primeras tres calidades pueden ser transferidos en “fresco” (inmediatamente)
o refrigerados (a 4°C hasta por 24-48 horas), pero sólo los de calidad 1 y 2 pueden ser congelados,
ya que los de calidad 3 no resisten la congelación.
Para la congelación, que mantiene viables a los embriones durante años, se requiere añadir 10% de
glicerol a la solución salina para que proteja al embrión durante el proceso de congelación. El
embrión se coloca en una pajilla previamente identificada con los datos de la donadora y del embrión,
y con la ayuda de un congelador manual, o una congeladora computarizada, se enfría lentamente
hasta -7°C (bajo cero), se provoca que empiece a formarse hielo en la solución, luego se enfría más
lentamente hasta -35°C; finalmente se pasan las pajillas al tanque con nitrógeno líquido a -196°C,
donde se almacenarán los embriones hasta ser descongelados y transferidos.
Congeladora de embriones.
Los embriones se descongelarán en forma parecida a la descongelación del semen, colocando la
pajilla a temperatura ambiente por 12 segundos y en baño maría a 37°C durante 10 segundos.
Posteriormente se extrae el embrión de la pajilla y, observándolo al microscopio, se pasa por varias
soluciones con concentraciones decrecientes de un azúcar, sacarosa, para retirarle el glicerol que
se le puso antes de congelarlo, se vuelve a evaluar la calidad del embrión y se transfiere a la
receptora. Si se empleó etilén – glicol para la congelación, no es necesario retirárselo y simplemente
se descongela el embrión y se transfiere directamente a la receptora.
La bipartición embrionaria consiste en dividir los embriones de calidad 1 ó 2 por la mitad para formar
dos hemiembriones y aumentar así el número de crías de cada donadora. La bipartición se efectúa
con un aparato llamado micromanipulador, que nos permite sujetar el embrión para cortarlo por la
mitad con una micronavaja. Las dos mitades resultantes pueden transferirse una a cada receptora o
las dos a la misma, ya que ambas crías serán del mismo sexo.