GUÍA N° 7

PRUEBAS PRETRANSFUSIONALES: PRUEBAS CRUZADAS DE COMPATIBILIDAD (PC),

RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES (RAI) Y AUTOCONTROL (AC)

INTRODUCCIÓN
Las pruebas pretransfusionales son los procedimientos realizados por los servicios de
transfusión o los bancos de sangre, previos a la transfusión, con el fin de asegurar la selección
adecuada de la unidad de sangre o los componentes a transfundirse. Tienen como propósito
evitar que los componentes seleccionados para la terapéutica causen daño en el receptor y cuya
sobrevida postransfusional este dentro de los límites aceptables. Si esas pruebas se realizan
correctamente, son útiles para confirmar la compatibilidad ABO entre el componente y el
receptor y tienen la posibilidad detectar la mayor parte de los anticuerpos irregulares o
inesperados, clínicamente significativos.

Las pruebas pretransfusionales incluyen:

 Verificación de la hemoclasificación (determinación del ABO/Rh) del donante y receptor.
 Prueba cruzadas de compatibilidad.
 Rastreo para anticuerpos irregulares en el receptor.
 Autocontrol.

NECESIDAD
Adquirir los conocimientos necesarios para certificar y validar la transfusión de componentes
sanguíneos, mediante la correcta realización de las pruebas pre-transfusionales.

OBJETO DE ESTUDIO
Compatibilidad sanguínea Donante/Receptor.

OBJETIVOS
Instructivos
 Reconocer la importancia de las pruebas de compatibilidad para garantizar al máximo la
seguridad transfusional.
 Interpretar y correlacionar los resultados de las pruebas de compatibilidad.
 Proponer soluciones ante resultados incompatibles de las pruebas pretransfusionales, con
el fin de resolver oportunamente la necesidad de transfusión sanguínea.

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COMPETENCIAS A ADQUIRIR POR PARTE DE LOS ESTUDIANTES
 Interpreta la presencia de aglutinación/hemólisis en las diferentes fases de las pruebas
cruzadas.
 Correlaciona resultados positivos de autocontroles con la clínica del paciente.
 Correlaciona resultados positivos en el rastreo de anticuerpos irregulares con la clínica del
paciente.
 Certifica la transfusión de componentes sanguíneos acorde a la interpretación de los
resultados compatibles de las pruebas pretransfusionales.
 Identifica las limitaciones de las pruebas pretransfusionales en medicina transfusional.

METODOLOGÍA
 Socialización de la guía y el prelaboratorio.
 Realización de pruebas cruzadas, rastreo de anticuerpos irregulares y autocontrol a
muestras de sangre total.
 Realización e interpretación del reporte de resultados obtenidos.
 Solución del cuestionario post-laboratorio al finalizar la práctica.

MATERIALES DE LABORATORIO
 Papel kraft  Tubos de vidrio
 Tubos EDTA.  Tapones para tubos de ensayo
 Torniquete  Pipetas pasteur
 Algodón  Suero de Coombs
 Alcohol  LISS potenciador
 Agujas vacutainer  Hemoclasificadores: anti-A, anti-B,
 Camisa para agujas vacutainer anti-D
 Serofuge  Baño de maría.
 Puntas amarillas  Solución salina fisiológica (0.85%)
 Puntas azules  Lamina de vidrio hemoclasificadora
 Pipetas automáticas  Palillos

PROCEDIMIENTO

1. DETERMINACIÓN ABO/Rh
Las unidades de sangre certificadas destinadas para la realización de pruebas
pretransfusionales, previamente han sido hemoclasificadas ABO/Rh mediante la prueba
globular y sérica, razón por la cual en las pruebas pretransfusionales es suficiente realizar un
rechequeo o verificación del grupo ABO/Rh del donante, mediante la determinación ya sea
globular o sérica. Por razones de practicidad y oportunidad este rechequeo de grupo sanguineo

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en las unidades de sangre podrá ser efectuado mediante la determinación en lámina de la
prueba directa. (Guía No. 6. Hemoclasificación sistema ABO/RH)

La determinación del grupo ABO/Rh de los receptores deberá ser realizada mediante la
prueba directa y la prueba inversa(Guía No. 6. Hemoclasificación sistema ABO/RH)

2. PRUEBAS CRUZADAS DE COMPATIBILIDAD

Fundamento
La prueba cruzada debe demostrar que el suero del receptor y las células del donante son
compatibles y por lo tanto están libres de anticuerpos hemolizantes, aglutinantes o que
recubran el eritrocito. Debe usarse en el procedimiento 3 fases:
a) Fase salina: temperatura ambiente. Detección de anticuerpos fríos completos.
b) Fase potenciadora: 37°C usando potenciadores de las reacciones antígeno-anticuerpo
(LISS, albumina, entre otros). Detección de anticuerpos calientes.
c) Fase de Coombs: empleo de antiglobulina humana o suero de coombs poliespecífico.
Detección de anticuerpos calientes dependientes de antiglobulina.

Las pruebas cruzadas incluyen la prueba mayor (M), que detecta anticuerpos del receptor
contra antígenos presentes en el glóbulo rojo del donante y la prueba menor (m), que detecta
anticuerpos del donante contra antígenos del receptor.
Esta última no se realiza de rutina, ya que todas las unidades captadas en los bancos de sangre,
son tamizadas para anticuerpos irregulares.
Se realiza pruebas cruzadas para la transfusión de sangre total, glóbulos rojos y granulocitos.
Para plasma, plaquetas y crioprecipitados no se realiza prueba cruzada pero si deben ser
ABO/Rh idénticos o compatibles.

Técnica
 Obtener muestra de suero y células del receptor y donante.
 Lavar las células del receptor y del piloto de la unidad de sangre a transfundir. Suspender
al 5%.
 Marcar 3 tubos así: M (mayor), m (menor) y Auto (autocontrol).
 Al tubo M agregar: 50uL de suspensión 5% de células del donante y 100 uL de suero del
receptor.

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 Al tubo m agregar: 50 uL de suspensión 5% de células del receptor y 100 uL de plasma del
donante.
 Al tubo Auto agregar: 50uL de suspensión 5% de células del receptor y 100 uL de suero del
receptor.
 Mezclar y centrifugar en serofuge 30 segundos. Leer y registrar resultados. No debe
aglutinar y se procede al siguiente paso. Si hay aglutinación deberá volver a realizar
clasificación ABO/Rh de donante y receptor.
 Agregar una gota de potenciador (LISS)
 Incubar 15 minutos a 37°C. centrifugar, leer y registrar resultados.
 Lavar cuatro veces con solución salina a 0.85%. decantar sobrenadante en el último lavado.
 Agregar una gota de suero de coombs, centrifugar 30 segundos, leer y registrar la
presencia o ausencia de aglutinación o hemolisis.
 Los resultados negativos deben ser comprobados con las células control de coombs.

En caso de observarse aglutinación en las pruebas cruzadas, se debe reclasificar nuevamente

donante y receptor, si no hay variación, la aglutinación puede deberse a otro tipo de
incompatibilidad y el receptor deberá ser estudiado en un banco de sangre competente para
realizar las pruebas especializadas y encontrar unidades de sangre compatibles para el
receptor.

Observaciones. Las pruebas de compatibilidad deben ser realizadas con muestras de sangre
tomadas como máximo 72 horas antes de la transfusión y deberán ser procesadas lo antes
posible. Si el paciente se está transfundiendo durante varios días, se obtendrán muestras
frescas cada día para las pruebas de compatibilidad.
Solo sangre sin anticoagulante debe usarse para las pruebas cruzadas. Muestras colectadas
con anticoagulantes NO sirven para realizar pruebas de compatibilidad, porque la mayoría de
los anticoagulantes actúan fijando el calcio y este es necesario para la actuación de las
proteínas del sistema de complemento.
Las muestras hemolizadas no deberán ser usadas, porque pueden enmascarar una reacción de
hemólisis que un anticuerpo presente en el receptor pueda producir.

Las muestras usadas del receptor, así como los pilotos de las unidades, deben guardarse
perfectamente identificados por el término de una semana, con el fin de poder constatar en
cualquier momento un posible error.

3. DETECCIÓN, TAMIZAJE O RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES (RAI)

En el banco de sangre se realiza de rutina la detección de anticuerpos irregulares o
inesperados a todas las unidades de sangre. Este procedimiento permite obviar la prueba de

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compatibilidad menor en las pruebas cruzadas. El rastreo de anticuerpos irregulares permite
detectar anticuerpos diferentes a los del grupo ABO y aunque su frecuencia es baja, puede
producirse en individuos expuestos a estos antígenos como madres multíparas y pacientes
politransfundidos.
Se efectúa colocando a reaccionar suero con “células detectoras de anticuerpos” o “eritrocitos
reactivos” conseguidas comercialmente, las cuales traen adjunto la información de su perfil
antigénico y el procedimiento técnico. Estas células son grupo O Rh D positivo y para
garantizar la mayor detección de anticuerpos, la prueba incluye diversas condiciones de
reacción como centrifugación inmediata, incubación a temperatura ambiente y a 37°C, y fase
de coombs. Cabe anotar que las reacciones a temperatura ambiente no revisten importancia ya
que este tipo de anticuerpos carecen de significancia clínica.

Técnica
 Marcar 3 tubos así: I, II y Auto (autocontrol).
 Al tubo I agregar: 50uL de células detectoras de anticuerpos I y 100 uL de suero del
receptor.
 Al tubo II agregar: 50uL de células detectoras de anticuerpos II y 100 uL de suero del
receptor.
 Al tubo Auto agregar: 50uL de suspensión 5% de células del receptor y 100 uL de suero del
receptor.
 Mezclar y centrifugar en serofuge 30 segundos. Leer y registrar resultados.
 Agregar una gota de potenciador (LISS)
 Incubar 15 minutos a 37°C. centrifugar, leer y registrar resultados.
 Lavar cuatro veces con solución salina a 0.85%. decantar sobrenadante en el último lavado.
 Agregar una gota de suero de coombs, centrifugar 30 segundos, leer y registrar la
presencia o ausencia de aglutinación o hemolisis.
 Los resultados negativos deben ser comprobados con las células control de coombs.

Interpretación De Resultados de RAI

La presencia de aglutinación ya sea en el tubo I y/o II y autocontrol negativo, indica la
detección de un anticuerpo irregular en la muestra de suero estudiada. Algunos pacientes
multitransfundidos desarrollan anticuerpos tipo IgG como anti D, anti Kell, anti Duffy, lo cual
dificulta nuevas transfusiones debido a que no es fácil encontrar sangre compatibles para
ellos, por lo tanto se recomienda identificar el anticuerpo detectado, con el fin de conseguir
unidades que carezcan del correspondiente antígeno,

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 En caso de presentarse un autocontrol positivo, se puede pensar en la presencia de
autoanticuerpos o alguna anormalidad sérica, las cuales deberán ser correlacionadas con la
historia clínica del paciente.

CUADRO 1. Resumen técnica pruebas cruzadas Mayor/Menor y Rastreo de Anticuerpos

Irregulares (RAI)

M (uL) m (uL) I (uL) II (uL) Auto (uL)

SUERO RECEPTOR 100 100 100 100
GR 5% RECEPTOR 50 50
PLASMA DONANTE 100
GR 5% BOLSA DE SANGRE 50
CELULAS I 50
CELULAS II 50

PRE LABORATORIO
Antes de presentarse a la práctica el estudiante deberá leer detenidamente la guía de
laboratorio y preparar el siguiente prelaboratorio:
1. ¿Cuáles son las limitaciones de la prueba cruzada?
2. ¿Por qué no es necesario realizar prueba cruzada menor cuando las unidades de sangre han
sido tamizadas para rastreo de anticuerpos irregulares?
3. Identifique posibles causas de error que originen resultados falsos compatibles y/o
incompatibles en las pruebas cruzadas.
4. ¿Cómo se realiza e interpreta la identificación de anticuerpos irregulares, una vez el RAI
resulta positivo?
5. ¿Qué interpretación tiene una prueba cruzada compatible?
6. ¿Qué interpretación tiene una prueba cruzada incompatible?
7. Complete el siguiente cuadro de acuerdo a los resultados de la prueba cruzada, RAI y
Autocontrol.

Paciente Prueba Células I Células II Autocontrol ¿Transfunde? Justifique

Cruzada Si o No
Mayor
1 Compatible negativo positivo Negativo
2 compatible negativo negativo Positivo
3 Incompatible negativo negativo Positivo
4 Compatible negativo negativo Negativo
5 Compatible positivo Positivo Negativo

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BIBLIOGRAFÍA
 McKENZIE, Shirlyn. Hematología clínica. 2 ed. México: Editorial El Manual Moderno, 2000.
 VIVES, J.L. y AGUILAR, J.L. Manual de técnicas de laboratorio en hematología 3ª ED.
Barcelona, 2006.
 Manual de Normas técnicas, administrativas y de procedimientos en bancos de Sangre –
Resolución 0901 de 1996.
 Manual técnico AABB (American Association of Blood Bank) para Bancos de sangre.
 Manual de Bancos de sangre. Alba Luz Luque de Bowen. Rodriguez quito editores. 1 ed.
1982.

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