FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS

BIOTECNOLOGÍA
Clase. Diversidad de organismos.

Diana Ossa
ossaster@gmail.com
Diversidad de microorganismos

➢ Bacterias

➢ Cianobacterias

➢ Hongos

➢ Protozoos

➢ Virus
Diversidad de microorganismos
Diversidad de microorganismos
Hongos pluricelulares

Setas
Penicillium Hifas y conidios
Diversidad de microorganismos
Hongos unicelulares

Levadura: reproducción asexual por gemación

Diversidad de microorganismos
Virus
Diversidad de microorganismos

➢ Existen en todos los ambientes donde exista disponibilidad de agua

➢ En temperaturas que van desde -20°C hasta 110°C

➢ Psicrófilos, Mesófilos y Termófilos

➢ Aerobios, Anaerobios y Facultativos

➢ Eucariontes y Procariontes
Clasificación de microorganismos
Según su fuente de carbono:

✓ Autótrofos: carbono inorgánico (ppal/. CO2)

✓ Heterótrofos: carbono orgánico

Según su fuente de energía:

✓ Quimiótrofos: energía química

✓ Fotótrofos: energía solar (lumínica)

Según su estructura:

✓ Procariotas: no poseen núcleo ni organelos

✓ Eucariotas: poseen núcleo y organelos

Célula eucariota
Célula procariota
Obtención de energía
Mayoría de patógenos Nitrobacter, Thiobacillus

Rodospirillum, Cloroflexus Bacterias purpuras

http://es.slideshare.net/mamerinoco/metabolismo-microbiano-12037776
 Ecología microbiana en ambientes ácidos
OXIDANTES DE HIERRO
Mesófilos: 25 °C-35 °C
A. ferrooxidans – anaerobio facultativo
A. ferrooxidans cepa m-1- no oxida S°
L. ferrooxidans – más tolerante a acidez y [Fe]
Ferromicrobium acidophilus – mixotrofo
Moderamente termófilos: 40 °C-50 °C
Sulfobacillus acidophillus – mixotrofo G+
S. thermosulfidooxidans – mixotrofo G+
Acidimicrobium ferroox. - mixotrofo
L. thermoferrooxidans - autotrofo
Extremófilos: 60 °C-70 °C ~ 80 °C
Acidianus brierleyi - anaerobio facultativo
A. infernus y A. ambivalens - anaerobio
facultativo
Metallosphaera sedula – aerobio obligado
Sulfurococcus yellowstonii - aerobio obligado
OXIDANTES DE AZUFRE
Mesófilos: 25 °C-35 °C
A. thiooxidans – autotrofo
A. albertis - autotrofo
A. acidophilus – mixotrofo
Thiomonas cuprinus – mixotrofo
Sulfobacillus disulfidooxidans – mixotrofo G+
Extremófilos: 60 °C-70 °C ~ 80 °C
Sulfolobus shibitae – mixotrofo
S. solfataricus – mixotrofo
S. metallicus – autotrofo
Metallosphaera prunae – mixotrofo
Sulfurococcus mirabilis - mixotrofo
HETEROTROFOS
Mesófilos: 25 °C-35 °C
Acidiphilium spp. – algunas especies reducen férrico
Acidocella spp.
Acidomonas spp.
Pseudomona mendocina - reduce hierro férrico
Moderamente termófilos: 40 °C-50 °C
Alicyclobacillus spp. - algunas especies reducen
férrico
Cortés y Mosquera, 2013
Reproducción bacteriana: bipartición

Reproducción asexual
Reproducción bacteriana: conjugación

F+ F-

Reproducción sexual o parasexual

Reproducción bacteriana: trasformación

Reproducción sexual o parasexual

Reproducción bacteriana: transducción
Proceso de Replicación del ADN

http://www.johnkyrk.com/DNAreplication.html
http://biologiacampmorvedre.blogspot.com.co/search/label/2%C2
%BA%20BACH.%20%C3%81CIDOS%20NUCLEICOS
Proceso de Transcripción

http://biologiacampmorvedre.blogspot.com.co/se
arch/label/TRANSCRIPCION
Proceso de Traducción

http://biologiacampmorvedre.blogspot.com.co/se
arch/label/TRADUCCI%C3%93N
Proceso de Traducción: código genético
 Estructura de una proteína

http://biologiacampmorvedre.blogspot.com.co/search/label/2%C2%BA%20BACH.%20PROTE%C3%8DNAS
 Técnica de PCR: reacción en cadena de la
polimerasa

Amplificación del gen de interés en millones de copias

https://www.youtube.com/watch?v=TalHTjA5gKU

https://www.youtube.com/watch?v=Kuy4PDb6bdU
Plásmido: vector de expresión
Enzimas de restricción

Tienen la propiedad de realizar cortes en el ADN, “endonucleasas”.

Reconocen regiones específicas dentro del ADN
Las de tipo II, Poseen una única secuencia de reconocimiento, no
necesitan energía (ATP)

Varían entre 10 y 15 pb

https://www.youtube.com/watch?v=PO306C3kzn4&t=2s
Enzimas de restricción

Formación de ADN recombinante: unión de dos fragmentos de ADN de

distinta procedencia obtenidos tras cortar con EcoRI y unir con ADN ligasa
https://www.youtube.com/watch?v=PO306C3kzn4&t=2s
 Proteína recombinante: célula transformada

Vetor de expressão Gene que codifica E. coli DH5 

pET-28a digerido proteína de interesse
Gene
com NdeI e HindIII digerido com NdeI e
resistência
HindIII
canamicina

vetor de
expressão

Ligação Seleção de clones recombinantes

do gene de interesse Miniprep
no vetor de expressão
PCR
Transformação
em E. coli DH5
Sequenciamento
Proteína recombinante:
Confirmación de célula transformada

Identificación de plasmído
Amplificación por PCR
recombinante PCR

Afe_0551
Afe_0551

M LR ATCC
LR

991pb

736pb

ATCC
991pb
 Proteína recombinante:
Expresión de la proteína en célula transformada
Sequenciamiento Transformación de plasmído en diferentes
cepas de E. coli BL21

Expresión de proteína

Purificación de proteína

Columna de Purificación IMAC

LB + BL21 LB + BL21 + LB + BL21 + (Immobilized Metal Affinity
(controle) 0551/pet28a 0551/ pet28a
Canamicina Canamicina
IPTG (1mM)
Chromatography)
Resina de Afinidad
Shaker – 37ºC - 250 rpm - 4 horas
(Ni-NTA)
Imidazol (100, 200, 300) mmol/L
Proteína recombinante:
Confirmación de proteína expresada

27,5 kDa

M N/Ind I/2 h I/overn Soluv. Insol. Lis. Elu.

Expressão Pellet S3 Lavagem
Diálise começo

Diálise final

Eluição
Primer producto farmacéutico recombinante, 1982
Nuevas autorizaciones de fármacos biotecnológicos y vacunas
En la actualidad hay mas de 600 nuevos productos en espera de licencia!!