DIAGNÓSTICO DE MALARIA

MORFOLOGIA Y RECUENTO PARASITARIO

Nohora Marcela Mendoza Lozano
Grupo de Parasitología
Subdirección Red Nacional de
Laboratorios
Instituto Nacional de Salud
Colombia
 Objetivos
• Fortalecer conocimientos de Toma de muestra y
coloración
• Identificar estadios parasitarios
• Identificar especies parasitaria
• Identificar cambios en el glóbulo rojo (forma, tamaño,
granulaciones)
• Distinguir entre macrogametocito y microgametocito.
• Identificar infección mixta
Diagnóstico y tratamiento
temprano en malaria son
la clave disminuir la
morbilidad y la mortalidad
en malaria
 DIAGNOSTICO PARASITARIO DE
MALARIA
1. Visualización del parásito

2. Detección de antígenos del parásito

DIAGNOSTICO PARASITARIO DE
MALARIA
3. Diagnóstico molecular
 DIAGNOSTICO MICROSCÓPICO

- Gota gruesa
- Extendido de sangre periférica

 Identificar: Morfología y estadios.

 Determinar: Granulaciones del glóbulo rojo.
El conjunto de hallazgos permite definir: género
(Plasmodium) y especie (s) infectante(s).
Realizar el recuento parasitario.
La confirmación de un caso de malaria
se realiza mediante el diagnóstico
microscópico, gota gruesa, por
considerarse el diagnóstico de
referencia.
 Previo a la toma de muestra

Alistar la papelería pertinente para el registro de

los datos clínico- epidemiológicos del
paciente.
 Toma muestra para diagnóstico de
malaria
Mesón limpio, ordenado Bioseguridad: bolsas de la basura roja,
y horizontal. gris y verde. Guardianes de seguridad.
Guantes.

Láminas nuevas, limpias,

desengrasadas, esmeriladas y
con la Identificación adecuada
del paciente.
Lancetas desechables.
Tubo con anticoagulante (EDTA).
 IDENTIFICACIÓN DE LAMINAS
Nombre
paciente
Nº consecutivo
Fecha

Marque la lamina con lápiz de

punta de carbón.
Sitio de punción dedo medio o índice
de la mano no dominante. Niños:
lóbulo de la oreja, talón o dedo gordo
del pie (grueso artejo).

Es mas fácil controlar el tamaño

de la gota de sangre si la lámina
es colocada delicadamente sobre
el dedo que ha sido puncionado.
 Elaboración de la gota gruesa
• La Gota Gruesa es una técnica de rutina.
Muestra de sangre concentrada en donde los
GR son deshemoglobinizados durante la pre-
coloración y coloración facilitando la
identificación de los parásitos que pudieran
estar presentes en su interior.
Deje secar horizontalmente a temperatura ambiente o
puede ayudarse con un poco de calor sube (37 °C).
Máximo 1minuto.
GOTA GRUESA Y EXTENDIDO
 COLORACION

• DERIVADOS DE ROMANOWSKY:

- Field
- Romanowsky modificado
- Giemsa
- Wright
 1. PRE-COLORACIÒN

1.Deshemoglobinice 2. Sumerja en
la lámina por solución
inmersión en azul de amortiguadora
metileno fosfatado para quitar el
durante tres exceso de azul de
segundos. metileno y
escurra en papel
absorbente.
 CUIDADES AZUL DE METILENO
FOSFATADO -AMF

Solución de azul de metileno.

Filtrar cada 8 días y se desecha
a la semana de uso.

Es necesario lavar el recipiente

que contiene el AMF. Use por
lo menos dos recipientes
(repuesto).
1 segundo de inmersión
 2. COLORACIÓN
GOTA GRUESA • Coloración: Solución de
trabajo preparar inmediatamente
• Usar soporte para coloración.
antes de colorear.
• Lámina cóncava limpia (acrílico, Para 1 lámina usar: 3ml solución
plástico o vidrio).
Amortiguadora + 1 gota
solución A y 1 gota solución B.

Tiempo aprox: 10´ o tiempo

estandarizado, luego Dejar secar

Solución
Buffer 3 ml + +
pH: 7.2
A B

Trabajo con calidad:

- Uso de sales fosfatadas. NO use agua de chorro
- Goteros que dispensen gotas del mismo tamaño
 Evitar burbujas en la lámina cóncava.

Sacar la lámina, limpiar la cara posterior.

 Gota gruesa
• Colorantes Giemsa o Wright:

1. Filtrar la solución madre

2. Solución de trabajo: dilución 1/10 en buffer
fosfato Ejemplo: 9 ml de buffer + 1 ml de
colorante
3. Emplear tiempo estandarizado
 Coloración del Extendido
Romanowsky modificado (puesto de dx):
• Fijar (metanol)
• Colorear con la misma solución. Tiempo de
coloración mayor que la gota gruesa.

Colorantes Giemsa o Wright (laboratorio):

Se emplea la coloración estándar en los

laboratorios clínicos.
 Problemas de la coloración
La coloración se observa azul intensa cuando:

• La muestra sanguínea queda muy gruesa.

• Uso de tiempos prolongados en la coloración.
• Exceso de azul de metileno fosfatado
• Se emplea agua amortiguadora con pH alcalino.
 Problemas de la coloración

Coloración se observa rosada intensa cuando:

• La muestra es muy escasa , por tanto, la gota gruesa queda muy

delgada.
• Al usar tiempos insuficientes en la coloración o tiempos de lavado
prolongados.
• El agua amortiguadora para hacer la solución de trabajo tiene pH
ácido.
 Problemas de la coloración

Se observa precipitado cuando:

• Los portaobjetos están sucios para la toma de la muestra.

• Se seca el colorante en la lámina en el momento de la
coloración.
• Al realizar una filtración inadecuada.
• No se prepara la solución colorante de trabajo inmediatamente
antes de la coloración.
 Después de colorear pasos a seguir
Confirmar la positividad o negatividad empleando la gota
gruesa.

Negatividad: ausencia de parásitos después al observar

por lo menos 200 campos microscópicos con objetivo
100x.

Positividad: confirmar especie; descartar una posible

Infección mixta.
Si persisten dudas en la especie se debe usar el extendido

Recuento: enfocar campos que tengan de 10 - 20

leucocitos, continuar en campos adyacentes. Informar
densidad parasitaria.
Reconocimiento del parásito
»
»
» Citoplasma

» Vacuola
»
» Pigmento malárico
»
Cromatina
 Reconocimiento de parásito
• Extendido: célula
huésped. Tamaño
y granulaciones

Gota gruesa: granulaciones:

• Shüffner (fino): P. vivax
• Maurer (grueso): P.
falciparum
• James (prominente): P.
ovale
• Ziemann: P. malariae
 Estadíos parasitarios

Trofozoitos jovenes

Trofozoitos jovenes

Trofozoitos maduros

Esquizontes
FORMAS ASEXUADAS
Gametocitos

FORMAS SEXUADAS
 Morfología parasitaria Malaria
La identificación de la especie infectante se basa en
claves morfológicas:
1. Parásito: apariencia (forma y tamaño).
2. Glóbulo rojo: tamaño, forma, granulaciones.

Estas características no son absolutas.

• Diagnóstico final: se basa en reunir una serie de
hallazgos para revelar la especie o especies más
probables.
 Formas encontradas en sangre periférica

• P. falciparum • Otras especies

-TJ Si
-TJ Si
-TM Ocasionalmente
-TM Si
-ESQ J Ocasionalmente
-ESQ J Si
-ESQ M No
-ESQ M Si
-GAMT Si
-GAMT Si
 Tipo de muestra
Extendido: 1
• Valoración del GR infectado:
tamaño, granulaciones.
Formas especiales del
2.
parásito.

1. GR: alguna veces crenado en P.

falciparum. Forma de aplique. 3.
2. GR: normal o disminuido P.
malariae. Forma en banda.
3. GR: agrandado P. vivax y P. ovale. 4.
4. GR: alargado y festoneado P.
ovale
 Tipo de muestra
gota gruesa
• Citoplasma regular • Citoplasma irregular
Fragmentado
• Regular Compacto • Muy Poco

+ +

P. falciparum P. malariae P. vivax P. ovale

 Trofozoitos

P. falciparum
• Anillos
• Fragmentados en gota
gruesa
• Usualmente, 1 punto
cromatina
• 2 punto: común en P.
falciparum
• Puede tomar diferentes
formas: P. vivax, P.
malariae
• Ganan pigmento
malárico: amarillo a café
P. malariae

P. vivax
 P. falciparum
Esquizontes 8-30
X. 16

• Fácil reconocimiento.
• 3 o más puntos de
cromatinas. 12-24
X. 16
• Cada núcleo es un
P. vivax
merozoito.
• Los esquizontes son
jóvenes o maduros
• Cada merozoito puede
P. malariae

6-12
X. 8
hacer ciclo asexual o
producir las formas
sexuadas (gametocitos)

4-12
P. ovale

X. 8
 Gametocitos

P. falciparum
Formas:
• Redondos
• Forma creciente
(banana)
• Femenino:
Microgametocito.

P. vivax
Cromatina y citoplasma
(azul) mas oscuro que
el macrogametocito.
• Masculino:
macrogametocito.
P. malariae

Cromatina laxa,
citoplasma rojizo.
• Las formas inmaduras de los
gametocitos redondeados son
indiferenciables de los
P. ovale

trofozoitos maduros en gota

gruesa .
 Plasmodium
falciparum

Responsable de la
mayoría de
Casos complicados de
malaria y muertes
 Plasmodium
vivax

Mayor número de
casos en nuestro
país.
Plasmodium
malariae

Menos común.
 Plasmodium
ovale

Es un especie rara. Occidente

de África , África continental.
China, Papúa Nueva Guinea,
Filipinas, Sudán y Tailandia
 P. knowlesi
El diagnóstico de P. knowlesi en humanos,
puede ser confundido con P. falciparum en sus
primeros estadíos y con P. malariae en estadíos
más desarrollados.
• Herramienta diagnóstica: Bajo nivel de plaquetas en la sangre,
significativamente más bajo que en otros tipos de malaria. No se
manifiestan problemas de coagulación

Características para el diagnóstico:

• No distorsiona el glóbulo rojo.
• Multiparasitismo: frecuente.
• Trofozoitos jóvenes: regulares con 1 ó 2 puntos de cromatina, formas de
aplique.
• Trofozoitos en desarrollo: en banda, con un núcleo redondeado en un
extremo del citoplasma, ocupa la mitas o más del GR.
• Trofozoitos tardíos: compactos.
• Esquizontes: hasta 16 merozoitos, promedio: 10. Rosetas.
• Gametocitos redondeados: núcleo excéntrico.
• Granulaciones de Sinton y Mulligang.
 Morfología P. knowlesi
Trofozoitos :

Imágenes CDC
 Esquizontes:
Trofozoitos en desarrollo:

Imágenes CDC
Gametocito
 INFECCIÓN MIXTA
CRITERIOS PARA DEFINIR INFECCION MIXTA

1. Formas sexuadas (gametocitos) de P. falciparum

+ formas de P. vivax.
 INFECCIÓN MIXTA
CRITERIOS PARA DEFINIR INFECCION MIXTA

2. Establecer la cantidad de formas parasitarias

compatibles con P. falciparum y con P. vivax, en 100
formas parasitarias observadas. P. falciparum es
mayor o igual al 40%.
 Recuento Parasitario
- Importancia pronostica.

- Decisión en conducta y
tratamiento inicial.

- Seguimiento en la respuesta
terapéutica (detección de
resistencia).
 Recuento:
• L: 5
L: 5
• T: 27
P: 27
 Gota gruesa

• Recuento = AxB
200 200

A= número de parásitos observados en 200

leucocitos.

B= recuento leucocitario promedio de una población

normal (8.000 leucocitos/µl). Idealmente recuento
leucocitario del paciente.

PELIGRO!! Parasitemias:  50.000 parásitos/µl

 Recuento en gota gruesa
FORMULA
Recuento = # formas parasitarias x 8.000 leuc/µl
200

Plasmodium falciparum:

Recuento= # formas asexuadas x 40

Se realizar el recuento de formas asexuadas
«Se informa la presencia de gametocitos y esquizontes»

Plasmodium vivax:
Recuento= # formas parasitarias x 40

Se realiza un solo recuento de todas las formas

 Recuento en gota gruesa
FORMULA
Recuento = # formas parasitarias x 8.000 leuc/µl
200

Plasmodium falciparum:

Recuento= # formas asexuadas x 40

Se realizar el recuento de formas asexuadas
Y se informa la presencia de gametocitos en el caso de P.
falciparum.
Plasmodium vivax:

Recuento= # formas parasitarias x 40

Se realiza un solo recuento de todas las formas
en el caso de P. vivax.
 Tips recuento
• ≥100 parásitos en 200 leucocitos. Registrar el resultado.
• <100 parásitos después de contar 200 leucocitos, la
cuantificación se lleva a 500 leucocitos. Se cuentan todos los
parásitos en el campo final aunque el recuento de leucocitos
sea superior a 500.

La probabilidad de variación en variación será inferior al 5%.

Nota: aplicado a profesionales y en general en las actividades de EEDD y

clasificación de microscopistas.
 Tip recuento
Cuando hay muchos parásitos en la gota gruesa:

• Cuente 500 parásitos en el número de leucocitos de

presentes.

Ejemplo: Recuento: 510 parásitos

x 8.000
20 leucocitos
 Recuento en extendido

• Recuento = A x # de G.R /µl

% GR PARASITADOS: LA
10.000 RELACION DEL No DE
PARASITOS
A= # de parásitos en 10.000 G.R ENCONTRADOS EN
10.000 Y LUEGO
ESTIMAR EL VALOR EN
No. de G.R /µl= Hto x 100.000 100 GR

• Recuento = # de parásitos x Hto x 100.000

10.000
• Recuento = # de parásitos x Hto x 10
Resultado: # parásitos/µL de sangre
 Informe de resultados
GOTA GRUESA: negativa o positiva

POSITIVO:
- Especie
- Recuento: parásitos/µL.

P. falciparum : se debe informar el recuento de formas asexuadas.

Observación:
Presencia de formas sexuadas.
Esquizontes

• P. vivax: se cuentan todas las formas indistintamente. No se hacen observaciones

sobre los estadios parasitarios.

• Infección mixto: se informa primero la especie predominante y posteriormente la

que se encuentra subordinada.

• Recuento: especificar la forma cómo lo realizó.

 Informe de resultados

GOTA GRUESA: Positiva para infección mixta

Recuento: 20.000 trofozoitos/µl de P. falciparum

120 parásitos/µl de P. vivax

Observaciones: presencia de gametocitos de P. falciparum. Se encontraron

500 trofozoitos de P. falciparum y 30 parásitos de P. vivax en
200 leucocitos observados.
 Control de tratamiento
Todo paciente debe ser citado los días:

3y7
Ejemplo:
• DX: Martes
• Día 1: Miércoles
• Día 2: Jueves
• Día 3: Viernes
 Gracias
Nohora Marcela Mendoza Lozano
Bacterióloga Malaria
Grupo de Parasitología
Subdirección Red Nacional de Laboratorios

Instituto Nacional de Salud

Correo electrónico: nmenedoza@ins.gov.co
Teléfono (57-1) 220 77 00 Extensión
Bogotá, COLOMBIA
www.ins.gov.co
Línea gratuita nacional: 01 8000 113 400