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“El Biorreactor de Imersión Temporal

(BIT®) en la Micropropagación de
plantas y su aplicación a las
ornamentales”.
Dra. Maritza M. Escalona Morgado
Laboratory for Plant Cell and Tissue Culture
Centro de Bioplantas
Universidad de Ciego de Ávila, Cuba
Limitaciones de la micropropagación de
plantas
• Requiere gran número de envases pequeños.

• Transferencia periódica del material vegetal.


• Generalmente se emplea medio semi-sólido lo cual
dificulta la semi-automatización.
• La manipulación (selección, corte y trasplante)
representa 40-60% de los costos de producción (Chu,
1995).

• Aunque la manipulación es la principal parte del


trabajo y la más técnica, la limpieza, llenado y
manipulación de un gran número de envases es
engorrosa (Maene y Debergh, 1985)
• Pérdidas durante la aclimatización (Reuther, 1985).
LA APLICACIÓN LAS TÉCNICAS DE LA
COMERCIAL DE LA MICROPROPAGACIÓN
MICROPROPAGACIÓN CONVENCIONAL
ESTA LIMITADA A NO SON SIEMPRE
CULTIVOS CON ALTO ESCALABLES
VALOR AÑADIDO

Para su aplicación comercial se necesita


disponer de nuevas tecnologías para la semi-
automatización y mejorar los protocolos de
aclimatización (Kitto, 1997).
Ventajas del medio líquido para la
micropropagación de plantas.
• Reduce los costos de producción y permite
la semi-automatización del proceso.
• Mayor facilidad de toma de los nutrientes por
los explantes ya que se evita la difusión a través
del agar

• Suministra condiciones de cultivo más


uniformes.
• El medio puede ser fácilmente renovado sin
cambio de envase.
• Se reduce el tiempo de transferencia.
HIPERHIDRICIDAD: Principal desventaja del
medio líquido.
¿CÓMO
CONTROLARLA ?

• Empleo de soportes (puentes de papel, bloques de celulosa o esponjas


(Etienne et al., 1991; Smith y Spomer, 1995; Wataad et al., 1997).

• Raft para soportar los explantes sobre un medio líquido estacionario


(Connor y Meredith, 1984; Hamilton et al., 1985).

• Adición de medio líquido a cultivos establecidos en agar (doble capa)


(Maene y Debergh 1985).

• El empleo de biorreactores de niebla (Weathers y Giles, 1988).


• El uso de medio de cultivo con bajas concentraciones de sales y
sacarosa e incremento de la luz (Takayama y Akita, 2005).
• El Cultivo en Inmersión Temporal (Teisson et al., 1995).
Sistemas de Inmersión Temporal: contacto parcial o
total entre los explantes y el medio de cultivo líquido.

Inmersión
completa y
renovación del
medio líquido

Inmersión completa
con transferencia
neumática del medio
de cultivo sin
renovación del medio
líquido
Inmersión parcial y
renovación del
medio líquido RITA® BIT®

Etienne & Berthouly,


2002, Plant Cell Tiss.
Org. Cult.
OPERACIONES DEL BIT® (Twin Flasks System):

3 2
Air pump
Regulator valve
Solenoid valve
Hydrophobic air filter

 1- Dos frascos de cultivo conectados entre sí, uno para los explantes y otro
para el medio de cultivo.
 2. Inicio de la inmersión, el medio de cultivo es impulsado por el aire del
compresor al frasco que contiene los explantes.
 3. Fin de la inmersión, la segunda válvula solenoide se abre y el medio de
cultivo regresa al frasco que lo contiene.

Escalona et al., 1999. Plant Cell Reports.


Ventajas del cultivo en inmersión temporal
 Evita la inmersión continua de
los explantes en el medio
líquido.
 Garantiza el intercambio
gaseoso.
 Limita los cortes.
 Facilita cambios secuenciales
del medio.
 Permite la semi-automatización
del proceso.
 Reduce la contaminación.
 Bajos costos.
BIT® : Primera Generación para la producción
masiva de plantas.

Producción masiva de piña y caña de azúcar. Centro de Bioplantas


BIT®: Segunda Generación

Propagación masiva de
caña de azúcar
BIT®: Tercera Generación
Controlador
 Inyección de CO2 mejora cultivo
fotomixotrófico.
 Utilización de ventilación
forzada.
 Mayor calidad de plantas.

Rotámetro
CO2

Compresor
BIT® para la investigación.

Laboratorio de Inmersión Temporal.


Centro de Bioplantas

Laboratorio de Inmersión Temporal.


Universidad Gent, Bélgica
BIT®: Cuarta Generación. SMART-BIT

SMART- BIT en VITROALMA, México


BIT®: Tipos de Frascos
5L 10 L 250 mL

1L 250 mL
Efecto del BIT en el rendimiento biológico de la
micropropagación.
PROLIFERACIÓN DE BROTES,
SEGMENTOS NODALES Y
MICROBULBOS

MICROTUBERIZACIÓN

EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA
Propagación de la piña (Ananas comosus
L. (Mer) ) en BIT®
Micropropagación ®
Variedad BIT
convencional

Cayena Lisa 8.0 68,8


MD2 5,8 26,8

14

12

10

8
Multiplication rate x10

6 pH value

0
0 4 6 7 8
w eeks

Escalona et al., 1999. Plant Cell Reports.


Propagación de Musa sp en BIT®
Micropropagación ®
Variedad BIT
convencional
FHIA-18 3.6 7.4
FHIA-01 3.4 10.4
G. Nine 4.0 16.6

PLATANO CEMSA 3/4

Roels et al., 2005. Plant Cell Tiss. Org. Culture.


Noceda et al., 2012. HortScince
Propagación de caña de azúcar en BIT®

Micropropagación ®
Variedad BIT
convencional

C 91-301 3.7 34.1


C1051-73 4.1 58.0
C120-78 3.9 30.2
C323-68 4.3 39.5
CP-5243 4.0 32.5

Lorenzo et al., 2001. Plant Cell Tiss Org. Culture.


Propagación in vitro del guayabo (Psidium
guajava L.) cv. EEA 18- 40 en BIT®
40.0 a
25.0

Coeficiente de Multiplicación
a 35.0
20.0 30.0
No. de Nudos del BP

25.0
15.0
20.0
b b
10.0 b
15.0
10.0
5.0
5.0
0.0 0.0
PBZ 0 mg/L PBZ 0.5 mg/L PBZ 1 mg/L Con refrescamiento Sin refrescamiento
Tratamientos
Tratamientos

Nápoles et al., Biotecnología Vegetal (2010)


Propagación de Stevia rebaudiana en BIT®

35 a
Coeficiente de Multiplicación

30
25 b
20 Convencional
15 c BIT
a
10 b
c
5

0
MS MS + 0,25 PB MS + 0,5 PB
Tratamientos
Propagación de prunus (GF677) en BIT®

9
a
8 a
7

Tasa de Multiplicación
b b
b b
6
5
4
3
2
1
0
Control/2F Control/3F PB 0,5/2F PB 0,5/3F PB 1,0/2F PB 1,0/3F

Tratamientos

0
10/600 15/600 10/400 15/400

TE TMP Longitud (cm)

Agregados de brotes de GF677 después de 30 días en medio de enraizamiento en


el propio BIT
Empleo del BIT® en la microtuberización de
variedades de papa.
14 a

Número de semilla/planta
12
10
8 microtubérculo
b
6 c c minitubérculo
bc
c
4
2
0
Capiro Canchan Papa-3
Genotipo

12 a

Masa fresca de la semilla (g)


cv Desiree cv Atlantic 10 a

Percentage of Solid culture TIS Solid culture TIS 8

tubers 6
microtubérculos
minitubérculos
< 4 mm 33.3 a 21.8 a 25.7 a 3.1 b 4
4-6 mm 51.7 a 16.2 b 32.4 a 24.9 a 2
b b b

> 6 mm 15.0 b 62.0 a 41.9 b 72.0 a 0


b

Capiro Canchan Papa-3


Jiménez et al., 1999. Plant Cell Tiss. Org. Cult., 59: 19–23. Genotipo

Microtuberización de tres genotipos de papa en BIT y


procedentes de planta in vitro. (Obtención de semilla pre-
básica). Laboratorio de Biotecnología Universidad Nacional
Agraria La Molina, Perú (2012)
Empleo del BIT® en la microtuberización de
ñame (Dioscorea sp)

Etapa de formación de
microtubérculos

A B C

A: Microtubérculos MF ≤ 1,0 g
18 semanas de cultivo
MS+sacarosa. Oscuridad B: Microtubérculos MF 1,0 - 2,9 g
Seis semanas de cultivo
C: Microtubérculos con una MF≥ 3,0 g
MS+sacarosa (30gL-1) Luz
Cabrera et al., 2005. Plant. Cell. Tiss. Org. Cult., 83: 103-107.
Eficiencia del BIT® en la germinación de embriones somáticos de
Pinus radiata (Proyecto Neiker-Tecnalia, España, 2010-2012).
control

1 V/día 2 V/día

400
a
350
b
300
c
250

200 Incremento MF

150 Rango Crecimiento

100

50
5,6 5 5,6
0
3 Inm/día 3 Inm/día/1V 3 Inm/día/2V
Eficiencia del BIT® la germinación de embriones somáticos de
Quercus suber (Proyecto , UNIOVI, España, 2010-2012).

Volumen de medio NECA pre- NECA


(mL) germinados germinados/gMF

150 6,05 ± 1,38 0,25 ± 0,02

300 16, 5 ± 9,90 2,50 ± 0,28


A B C

A: Agregados pre-germinados, B:
Embriones pre-germinados con
D E

recurrencia, C: Embriones sin


recurrencia en distintos estadios de la
diferenciación radicular, D: embrión
somático germinado. E: ES germinado
espontáneamente en proliferación en
SS.

Escalona et al., 2014 Trees Forest (in


press)
Experiencias en la comercialización de plantas
ornamentales
Plantas ornamentales propagadas in vitro en el Centro de Bioplantas.

Familia Botánica Especie Variedad


Moraceae Ficus elástica Decora, Decora variegado, Burgundy, Melany
Ficus benjamina Natasja, Golden King, Starlight, Exótica.

Ficus binnendijkii Allii

Araceae Syngonium podophyllum Infra red, White Butterfly, Pixie


Caladium sp Más de 10 variedades

A. andreanum. Tropical, Merengue, Sonate, Pasión,


Lambada, Fantasía.
Spathiphyllium sp. Sensation, Starlight, Petite.

Philodendron sp. Xanadu, Silver Grey.

Araliaceae Brassaia actinophylla Schefflera amate.


Radermachia sp. Kaprima.
Plantas ornamentales propagadas in vitro en el Centro de Bioplantas.

Rubiaceae Ixora coccinea Guillermina.


Rosaceae Rosa sp. Miniatura.
Nyctaginaceae Bougainvillea spectabilis Morado, Blanco.

Orchidaceae Spathoglottis plicata Morado.


Plumbaginaceae Limonium sinuatum Morado, Amarillo.
Droceraceae Dionea muscipula Venus Fly Trap.
Polypodiaceae Cyathea arborea Helecho arborescente
Nephrolepis exaltata Helecho encaje

Arecaceae Rhapis excelsa Palma Dama


Chamaedorea seifrizii Palma Bambú.
Cambios tecnológicos en la micropropagación
de plantas ornamentales en Cuba.
• Empleo de medios de cultivo
simples y económicos.
• Uso de la luz solar.
• Utilización de medios de cultivo
líquidos
• Introducción del vitrofural.
• Empleo de normas de producción
y un personal calificado.
• Riguroso sistema de control de la
calidad.
• Utilización de los Sistemas de
Inmersión Temporal.
Propagación de plantas ornamentales en BIT®

Micropropagación ® Araceaes
Cultivo Variedad BIT
convencional
W. Butterfly 7.3 28.0
Syngonium
Pixie 2.2 18.4

Philodendron Xanadu 3.0 103

Anthurium Tropical 3.5 79.8


Sensation 3.7 61.5
Spathyphyllum
Starlight 3.0 56.5
Proliferación de brotes de Paeonia sp en BIT®.
(Contrato Plantek, Canadá)

Coeficiente de Multiplicación
12
10 a
a
8
6 b
4 bc
c
2
0
0 1 2 3 4
Número de cambios de medio

Micropropagación ®
Variedad BIT
Convencional
SeSu 2.1 6.8

Lezcano et al., 2012 Actualidades Biológicas


Proliferación de brotes de Bromelias en BIT®
Micropropagación ®
Variedad BIT
convencional
Vriesea 2.0 10.6
Aechmea fasciata 2.2 24.6
Neoregelia carolina 2.1 32.4
Cryptanthus bromeloides 1.8 22.9

12
Multiplication rate

10
8
6
4
2
0
cluster shoot divided
Brote seccionado Brote no seccionado

BROMELIA ORNAMENAL Vriesea.


Contrato Empresa SBW, Holanda Daquinta et al., 2001. J Bromeliad Soc 51(2): 80-85
Capote et al., Biotecnología Vegetal .
Proliferación de brotes de Alstroemeria en BIT®
Efecto de la frecuencia de inmersión en
variables fisiológicas de los brotes en el BIT.

Variables Cada 3h Cada 5 horas


Número de brotes. 3.2 b 5.5 a
Número de hojas 6 8.3
Número de raíces 8.0 11.0
Altura de las 2.0 4.22
plantas (cm)
Masa Fresca (mg) 396 471
Brotes (Estado III) 2.8 (87.5%) 3.5 (63.6%)
Brotes (Estado IV) 0.4 (12.5%) 2.0 (36.3%)
Daquinta et al., 2010, Biotecnología Vegetal.

Contrato Laboratorio Comercial SBW,


Holanda
Proliferación de brotes de Zantesdechias sp en
BIT®

Variedad SS Líquido BIT


Treasure 3.63 b 3.96 b 7.93 a
Golden Affair 6.50 b 3.70 c 10.7 a
Magister Red 7.23 b 4.26 c 11.3 a

Frecuencia de Coeficiente de
Inmersión Multiplicación
3h 11.3 b
4h 12.5 a
6h 9.3 c

Sánchez et al., Ciencia y Tecnología. 3 (1): 1-5. 2010


M. Daquinta et al., Floriculture and Ornamental Biotechnology ©2009
Propagación in vitro de Caladium × hortulanum en BIT®

Semi-sólido BIT

CM en BIT: 43.5 Aclimatización

12 veces en
comparación con el
SS

Daquinta et al. Floriculture and Ornamental Biotechnology 1(1), 2007


Global Science Books
Proliferación de brotes de rosa miniatura en
BIT®
Proyecto: Obtención de una producción sostenible de bulbos
de Lilium con resistencia a Fusarium oxysporum mediante un
método compatible con el ambiente (CB- VITROALMA).
ESTABLECIMIENTO IN VITRO

1.0 BA + 0.3 ANA, 30 g/l sacarosa, luz


0,2 ANA
80g/L sacarosa
Oscuridad
42 días

MULTIPLICACION
Formación de microbulbos de Lilium a partir de
escamas en BIT®
5 a
Número de microbulbos/explante

4,5
4
b
3,5
3
2,5
2
1,5
c c
1
c c
0,5
0
escamas/4F- escamas/2F- bulbos/4F-día bulbos/2F-día 1/2 bulbo/4F- 1/2 bulbo/2F-
día día día día
Tipo de explante
Desarrollo de microbulbos de Lilium a partir de
escamas en BIT®

9
8 a
7
6 b
b
5 a
a
4
3 b
2
1
0
Naranja Santander Blanco Concador

Variedades

mb/escama MF (g) Circunferencia (cm)


Factores que determinan la eficiencia
biológica del BIT®
Tiempo de inmersión
 Frecuencia de Inmersión

 Volumen de medio de cultivo

 Capacidad del frasco de cultivo

 Número de Subcultivos en el BIT

 Duración de la fase de proliferación

 Empleo de retardantes del crecimiento

 Tipo de explante a inocular.

 Manejo del explante.


Principales características que determinan la
eficiencia biológica del BIT®
INTERCAMBIO CONTACTO
GASEOSO INTERMITENTE ENTRE
LA SUPERFICIE DE
LOS TEJIDOS Y EL
MEDIO LÍQUIDO

• MAYOR TASA DE MULTIPLICACIÓN


• MAYOR CALIDAD MORFOLÓGICA

ALTOS PORCENTAJE DE SUPERVIVENCIA


EN LA ACLIMATIZACION
La Fisiología de las plantas micropropagadas en
el BIT®
Fotosíntesis in vitro y en el tránsito
ex vitro de las plantas

Metabolismo del
Carbono

Caracterización del espacio


gaseoso interno del BIT®

Asimilación de nutrientes
Fotosíntesis de las plantas in vitro en el BIT®
10

0
SS
Pn

0 7 14 21
-5 BIT®

-10

-15 Plátano
Days before acclimatization

Aragón et al., 2006. In Vitro Cell. Dev. Biol. Plant.

Condiciones crecimiento piña Producción O2 PNmax Fv/Fm


(µmol. m-2. s-1) (µmol O2. m-2. s-1)
Medio Líquido Bajo FFF 0.211c 5.9316 0.71
Allto FFF 0.270c 5.7783 0.75
BIT® Bajo FFF 0.480b 6.3166 0.77
Alto FFF 0.910a 5.3933 0.79
Escalona et al., 2003. (39) : 661-666 . In Vitro Cell Dev Plant
Contenido de azúcares en los brotes en la fase de
crecimiento en el BIT y durante la aclimatización
3,0
SACAROSA ALMIDÓN
a 200
2,5
b a

Starch concentration
2,0 b 150

(mg/g FW)
1,5 c 100
1,0
50 b b b b
a a ab
a
0,5
b
ab
b b b
b
0,0 c c c c 0 c
0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70 IC 0 7 14 35
days
t (days)

suc. Media suc. Leaves leaves Stem

PLÁTANO

Aragón et al. (2006). In Vitro. Cell. Dev. Biol. Plant.


Cambios en la fosfoenolpiruvato carboxilasa (PEPC) y piruvato
quinasa (PK) de los brotes de plátano durante la fase de
crecimiento en el BIT®
20
18 a
a
EA PEPC (U/g FW)(h

16
b 120
14
12 c a

EA PK (U/g FW)(h)
10 c 90
a
8
6 d d 60 a
b
4 a b
2 e 30
0 b
b
0 7 14 21 0
0 7 14 21
time (days)
time (days)

EA SS EA TIB *5 EA SS EA TIB

• En el cultivo en SS se muestra una mayor actividad catabólica. La actividad PK fue


mayor en SS (5 veces) y 28 veces mayor que la actividad PEPC.

• En el SS (sistema cerrado) presenta mayor condiciones estresantes que en el BIT la


mayor actividad respiratoria como una conecuencia de procesos oxidativos.
Composición del volumen gaseoso interno del frasco durante la
proliferación y previo a la aclimatización en los brotes de plátano
en el BIT® y el cultivo SS.
Grandes diferencias en la
concentración de gases entre
BIT® y SS.

La renovación del volumen


gaseoso resulta en un
suministro de O2 y la retención
de CO2 y acumulación de C2H4

Los niveles de etileno fueron


indetectables en el BIT®

Roels et al., 2006. Plant Cell Tiss. Org. Cult., 84 (2): 138-146.
Fisiología y Morfología de los brotes de plátanos cultivados en el
BIT® previo a la aclimatización.
Días Método Pn Transp. Long. Diam. Número MF Núemro
Cultivo (cm) (cm) hojas/ (g) raíces
brote
0 -7.63 c 1.33 b 3.02 c 0.41 c 1.40 c 0.67 b 0.00
7 SS -10.9 c 0.81 c 3.23 c 0.51 b 2.07 b 0.60 b 0.00
TIB -12.5 c 2.17 a 3.17 c 0.53 b 2.27 b 0.49 c 0.00
14 SS 1.92 b 1.34 b 3.63 b 0.57 b 2.33 b 0.71 b 0.00
TIB 8.86 a 1.56 a 4.19 a 0.56 b 2.73 a 0.86 a 1.80 b
21 SS 2.12 b 1.29 b 3.85 b 0.73 a 2.07 b 0.77 b 1.60 b
TIB 6.04 a 1.90 a 4.18 a 0.71 a 2.80 a 0.86 a 2.93 a

• BIT® mejora la calidad morfológica de los brotes.


• BIT®, se encontró mejor relación Fotosintésis/Transpiración. Esta
relación permitió mayor asimilación de nutrientes preparando a los
brotes para la aclimatización.

Aragon et al., 2006. In Vitro Cell Dev Plant. Biol.


Tecnología BIT® y la variación somaclonal.

EVALUACIÓN EN EL CAMPO
Plantas de plátano CEMSA ¾ en el campo. Plantas
fueras de tipo.

REVERSION A PLANTAS ELONGADAS PLANTAS ENANAS


DOMINICO HARTOON (2.7%) (2.7%)
(UNA PLANTA)
Plantas plátano CEMSA ¾ en el campo
PLANTAS
TRATAMIENTOS NORMALES
(%)
BIT 94.6
SS 86.1

Treatments Weight of Number of


bunches fruits
(kg)
MET-BIT 12.1 ± 0.3 40.8 ± 0.8

BA -BIT 11.6 ± 0.1 40.2 ± 0.0

MET-SS 12.2 ± 0.0 40.0 ± 0.1

BA-SS 12.3 ± 0.1 40.5 ± 0.3

PLANTAS NORMALES CULTIVADAS


EN ÁREA DE CORBANA, Costa Rica,
(2004-2006)
Aplicación comercial BIT®

Centro de Bioplantas. BioPlant


Export. Producción de semilla
de alta calidad de la variedad de
piña MD2
Aplicación comercial BIT®

Producción de semilla de alta AGROGENESIS SA, Lima,


calidad de Bananos. PERÚ
Aplicación comercial BIT®

Producción de semilla de alta EMPRESA ROICA S.A, PANAMA


calidad de Bananos.
Aplicación comercial BIT®

Producción semilla
variedades de caña de
azúcar. Ingenio La Estrella,
CALESA, PANAMÁ
Aplicación comercial BIT®

Producción semilla caña


de azúcar, SYNGENTA,
BRASIL
Aplicación comercial BIT®

Producción Stevia rebaudiana,


Empresa STEVIGRAN, Granada,
España.
Aplicación comercial BIT®

Producción patrones de Prunus,


Empresa INVITROTEK, Bibao,
España.
Aplicación comercial BIT®

Propagación de piña,
SBW, HOLANDA EN
GHANA
PRODUCCIÓN IN VITRO DE PLANTAS
“ UN PROCESO QUE TERMINA CUANDO EL AGRICULTOR
TIENE SUS GANANCIAS EN UNA CUENTA BANCARIA”

RETOS...
• Desarrollo de protocolos eficientes.
• Producción a partir de genotipos seleccionados.
• Producción de plantas a bajo costo.

LA PRINCIPAL DIFICULTAD EN EL USO DE LOS


BIORREACTORES ESTÁ EN LA BIOLOGÍA Y NO EN LA
INGENIERÍA. (Vasil et al., 1999).
Efecto beneficioso del BIT® en la producción de
metabolitos secundarios.

D. purpurea, M. royoc, C. citratus, H.


RENDIMIENTO
perforatum. PRODUCCIÓN DE
(mg anthraquinones/g
ANTHRAQUINONAS
m. f)
Nordamnacantal (F1.1 y F2.3.1) 0.672
Wilken et al., 2005. In vitro Liquid systems for plant
mass propagation. Yvos Eide, Preil (Eds) Morindone (F.2.3.4) 0.616
Efecto beneficioso del BIT® en reducir la acción de
sustancias tóxicas o inhibidores del crecimiento
producidos por el propio cultivo.

Lorenzo et al., 2001. Plant. Cell. Tiss. Org. Cult.


Efecto beneficioso del BIT® en la producción de
bromelina, una proteasa importante de la piña.

Pérez et al., 2003, 2004. In Vitro Cell. Dev. Biol.Plant.


BIT® MODELO PARA ESTUDIAR PROCESOS
FISIOLÓGICOS.
HIPERHIDRICIDAD

ESTRÉS OXIDATIVO
ESTRÉS BIÓTICO Y
ABIÓTICO
CONCLUSIONES
• El Biorreactor de Inmersión Temporal es una técnica eficiente
para la propagación masiva de plantas porque incrementa el
coeficiente de multiplicación, la calidad de los brotes, permite
la semi-automatización del proceso y la reducción de los
costos de producción.

• Varios son los factores que determinan la eficiciencia de la


técnica de inmersión temporal en la propagación de planta. La
determinación de los mismos está en dependencia de la
especie de planta y de su capacidad morfogenética.

• El Biorreactor de Inmersión Temporal puede ser empleado


para la obtención de metabolitos secundarios y como modelo
experimental para estudiar procesos fisiológicos.
PARA
REFLEXIONAR

EL BIORREACTOR PARA LA PROPAGACION


MASIVA DE PLANTAS CONTINUARÁ
EVOCANDO DIFERENTES DISEÑOS EN
FUNCIÓN DE LA FISIOLOGÍA DE LOS
CULTIVOS, LOS COSTOS DE PRODUCCIÓN,
LOS RETOS RELATIVOS A LA MANO DE
OBRA IMPUESTOS POR EL SISTEMA DE
CULTIVO Y LA ECONOMÍA GLOBAL.