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UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIAPAS

INSTITUTO DE BIOCIENCIAS
LICENCIATURA DE INGENIERO BIOTECNÓLOGO
ACTIVIDAD DE ENZIMAS

1) Si se tienen dos isoenzimas de la transaminasa glutámico oxaloacético, E 1 y E2,


cuyas constantes de Michaelis, K M son 4 x 10-2 y 8 x 10-6 M, respectivamente.
¿Cuál de estas dos isoenzimas es más afin por el sustrato y por qué?

2) La enzima trehalasa cataliza en forma específica la hidrólisis del disacárido


trehalosa (O-α-D-glucopiranosil (11) α-D-glucopiranósido), según la siguiente
reacción:
trehalosa + H2O 2 glucosa

a) Escribir la fórmula de este disacárido.


b) Si a pH = 7.00 y 30 oC, una muestra de trehalasa presenta una velocidad
máxima (Vmáx) de 1.5 nmoles de glucosa/min. mg de proteína. ¿Cuál será el
valor de Vmáx para la misma preparación en las mismas condiciones, pero en
presencia de 5 µmol/mL de trehalosa-6-fosfato, que actúa como un inhibidor
competitivo y cuya constante de inhibición, Ki = 2 µmol/mL?

3) La velocidad de la reacción catalizada enzimáticamente es de 40 mmoles/min.mg,


con una concentración de sustrato, [S] = 1.0 x 10-4 M. Calcular la velocidad
desarrollada con una concentración de [S] = 1.0 x 10 -5 M, sabiendo que la
constante de Michaelis de dicha enzima es de 5.0 x 10 -5 M.

4) En un estudio de cinética enzimática catalizada por la deshidrogenasa succínica, se


obtuvieron los siguientes resultados:
Succinato (mM) Fumarato formado (Vo)
nmoles/(5min.mg)
1.0 28.5
1.5 35.0
2.0 39.2
3.5 49.6
5.0 53.0

a) Con fórmulas químicas, escriba la reacción que cataliza esta enzima.


b) Utilizando la ecuación de Lineweaver, calcular los valores de KM y Vmáx.
c) Al incubarse en presencia de malonato de sodio, se observó una inhibición de la
reacción enzimática, obteniéndose una K’M = 2.5 mM y una Vmáx similar a la
obtenida en ausencia del inhibidor. ¿Qué tipo de inhibición se presentó?.

5) Por estudios de cinética enzimática realizados con la glutamato deshidrogenasa se


encontró que KM = 2.44 mM y Vmáx = 0.52 mmoles/min.mg. Para conocer en qué
forma es inhibida dicha enzima por el salicilato de sodio, se efectuaron otra serie de
experimentos en presencia de 4 mM del inhibidor, encontrándose que aunque el
valor de la KM no fue alterado, nunca pudo obtenerse la misma velocidad máxima
(V’máx = 0.22 mmoles/min.mg).
a) Con los valores anteriores trazar la gráfica correspondiente.
b) Mencionar el tipo de inhibición.
c) Calcular la pendiente de las dos rectas.
d) ¿Qué tipo de enzima es la glutamato deshidrogenasa?
6) La cinética de una determinada enzima fue medida en función de la concentración
del sustrato, en presencia y ausencia del inhibidor (concentración del inhibidor = 2.0
x 10-3 mM).
Sustrato (M) Velocidad ( moles/min)
Sin Con inhibidor
inhibidor
0.3 x 10-5 10.4 4.1
0.5 x 10-5 14.5 6.4
1.0 x 10-5 22.5 11.3
3.0 x 10-5 33.8 22.6
9.0 x 10-5 40.5 33.8

a) Calcular los valores de KM y Vmáx en ausencia y en presencia del inhibidor.


b) ¿A qué tipo de inhibición corresponde?
c) Calcular el valor de Ki.

7) Se homogeneizaron 500 g de tejido muscular de cerdo, con 5.0 L de solución salina


amortiguada. El homogenizado se centrifugó para eliminar el tejido conectivo,
restos celulares, núcleos y partículas grandes en general. El volumen del
sobrenadante obtenido fue de 4.5 L, con un contenido total de proteína (PT) de 50
g. Al determinar la actividad enzimática específica (AEE) inicial de una enzima X,
contenida en dicho sobrenadante, resultó ser de 0.1 unidades enzimáticas (UE) por
mg de proteína.
a) Calcular la actividad enzimática total (AET) contenida en el sobrenadante.
b) Al tratar de purificar dicha enzima, se encontró, que en cada paso de purificación
se fue perdiendo 20 % de la actividad total, en cambio, su actividad específica
fue aumentando 10 veces cada vez. Calcular, tanto las actividades totales como
las específicas en al menos 5 pasos de purificación.
c) Si al concluir la purificación, se obtuvieron en total únicamente 170 unidades
enzimáticas, ¿cuál fue el rendimiento final (en %) de la actividad enzimática?
d) La enzima pura se identificó como una metaloproteína conteniendo 0.33 % de
cobre. Calcular su Peso Molecular mínimo, tomando en cuenta que la masa
atómica del cobre es 63.5.
Finalmente, al someter la enzima a un estudio de cinética enzimática, resultó ser
inhibida por iones CN-, según los siguientes datos experimentales:

Sustrato (mM) Velocidad ( U/min.mg)


Sin inhibidor Con inhibidor
2.0 0.125 0.067
3.0 0.170 0.087
4.0 0.190 0.110
10.0 0.290 0.150
15.0 0.330 0.180

e) Calcular las velocidades máximas, las constantes de Michaelis y las pendientes


para ambos casos, indicando de qué tipo de inhibición se trata.
f) Suponiendo que la concentración del inhibidor fue de 5.0 mM, determinar el
valor de la constante de inhibición (Ki).