Fase 3 Johanna Cubillos

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA – UNAD
FASE III
Discusión
Estudiante
Lady Johanna Cubillos Vaca
Docente
Marcela Andrea Zambrano
Curso
Cromatografía
Grupo
401542_4
Bogotá
noviembre de 2018
Cromatografía iónica
a. ¿Qué es?
Es un proceso que permite la separación de iones y moléculas polares basadas en las
propiedades de carga de las moléculas. La separación se basa en las interacciones iónicas de
iones presentes en la fase móvil y grupos funcionales iónicos fijos presentes en la matriz
cromatográfica. Una vez separada, la muestra pasa a través de un detector (conductimétrico,
amperométrico, UV, etc.) donde se registra la señal obtenida respecto al tiempo de retención.
El resultado son unos cromatogramas donde la posición de los máximos nos indica el ion
presente (carácter cualitativo) y su área nos indica que cantidad existente de dicho ion (carácter
cuantitativo).
b. ¿Cuál es su aplicación? Ejemplos.
Presenta varias aplicaciones a nivel bioquímico e industrial.
 Se utiliza ampliamente para la separación de biomoléculas cargadas como:
polipéptidos, proteínas, polinucleótidos y ácidos nucleicos.
 Separación y purificación de los componentes de la sangre tales como albúmina,
factores de incremento recombinantes y enzimas.
 Biotecnología - usos analíticos tales como control de calidad y control de procesos
operativos
 Comida e investigación clínica - estudiar variedades del trigo y la correlación de la
proteinuria con diversas enfermedades renales.
 Fermentación - las resinas del intercambio catiónico se utilizan para vigilar el proceso
de fermentación durante la producción de la ß-galactosidasa.
 Aguas de consumo
 Aguas minerales
 Bebidas
 Productos cárnicos
 Productos vegetales
 Alimentación infantil
c. ¿Cuáles son las condiciones operativas?
Este tipo de cromatografía ocurre mediante dos mecanismos:
 Intercambio iónico debido a la formación de enlaces iónicos competitivos
 Exclusión iónica debido a la repulsión entre moléculas en la fase móvil que tienen carga
similar y iones fijos en el soporte cromatográfico.
Consta de 4 etapas:
 Equilibrio: de la fase estacionaria a las condiciones iniciales deseadas
 Aplicación de la muestra y lavado: formar en laces con las moléculas deseadas y lavar
todo el material que no se haya unido. El buffer de la muestra debe tener el mismo pH
y fuerza iónica que el buffer de la solución inicial con el fin de enlazar todas las
proteínas de carga apropiada.
 Elución: Las biomoléculas se liberan del intercambio iónico mediante un cambio en la
composición del buffer. Por lo general, se realiza aumentando la fuerza iónica de la
solución: la concentración de cloruro de sodio o alguna sal simple. Con el fin de
desorber las proteínas adsorbidas. Las proteínas se desorben de acuerdo con el número
de grupos cargados en su superficie.
 Regeneración: Se remueven las moléculas que aun se encuentran unidas a la superficie
d. De los ejemplos citados ¿cuál es el fundamento para aplicar esas técnicas?

En proteínas la cromatografía de intercambio iónico se basa en las diferencias en signo y
magnitud de la carga eléctrica neta de las proteínas a un valor de pH determinado.
En análisis de aguas, la determinación de cationes funciona bien para alcalinos y
alcalinotérreos. Para otros cationes la diferencia en los coeficientes de selectividad no es
suficiente para permitir la separación directa y son necesarios otros métodos como la formación
de especies que sí presentan más diferencia. En cambio, para la determinación de aniones en
agua resulta uno de los mejores métodos.
e. Descripción de la fase móvil y fase estacionaria.
Las fases estacionarias son generalmente redes macromoleculares minerales u orgánicas
portadoras de carga eléctrica que retienen a su alrededor, por simple atracción electrostática,
las cargas de signo contrario. Es una resina de intercambio iónico que contiene grupos
cargados, teniendo la propiedad de separar especies ionizadas (cationes o aniones). De acuerdo
con la carga de la fase estacionaria se encuentra:
Cromatografía de intercambio aniónico Cromatografía de intercambio catiónico
El intercambiador es un catión o base, es Si el intercambiador es un anión o ácido, o
decir, una matriz con un grupo cargado sea, una matriz con un grupo cargado
positivamente, al que se unen aniones y negativamente, al que se unen cationes y
polianiones. policationes.
Fase estacionaria positiva: intercambio Fase estacionaria negativa: intercambio
aniónico. catiónico
La fase móvil es por lo general, una solución amortiguadora de pH. Esta por lo general disuelve
la muestra y la fuerza disolvente debe proporcionar tiempos de retención razonables y al
interactuar con los solutos debe favorecer la selectividad. Las fases móviles empleadas suelen
ser soluciones acuosas con cierta cantidad de algún disolvente orgánico miscible (como el
metanol). En general, los iones de la fase móvil compiten con los del analito por los puntos
activos del relleno del intercambiador iónico. El tipo y proporción de los disolventes en la fase
móvil determinarán su fuerza y su selectividad.
f. ¿Cuáles son sus detectores?
 Detector amperométrico: con estos se producen reacciones de transferencia de
electrones durante la detección (entre electrodo y analito). Es te tipo de detector se
utiliza para compuestos iónicos con grupos funcionales susceptibles de ser oxidados o
reducidos. La señal analítica es la intensidad de corriente resultado de la oxidación o
reducción del analito. Este es un sistema de detección sensible y altamente selectivo.
 Detector UV: Este tipo de detector espectroscópico mide la cantidad de luz que los
iones absorben a una longitud de onda específica. No es una detección muy
significativa en CI, sirve de apoyo a la conductividad. Generalmente los iones
inorgánicos no suelen ser cromóforos.
g. Consideraciones generales
Existen dos tipos de cromatografía de intercambio iónico: la que implica desplazamiento
catiónico y la que involucra desplazamiento aniónico. Dicho de otro modo, cuando la fase
estacionaria posee carga positiva es empleada en la separación de las especies aniónicas, y

cuando esta fase es de naturaleza aniónica es utilizada en la segregación de las especies
catiónicas presentes en la muestra.
En el caso de compuestos que presentan carga eléctrica y exhiben solubilidad en agua (como
los aminoácidos, nucleótidos de tamaño reducido, péptidos y proteínas de grandes
dimensiones), estos se combinan con fragmentos que presentan carga contraria, produciéndose
enlaces de naturaleza iónica con la fase estacionaria que no es soluble.
Cromatografía de fluidos supercríticos
a. ¿Qué es?
La SFC es una forma de cromatografía de fase normal que se utiliza para el análisis y
purificación de moléculas de bajo a moderado peso molecular. Los principios son similares
a los de HPLC sin embargo SFC típicamente utiliza CO2 como la fase móvil.
Se utiliza para la separación de: productos naturales, fármacos, alimentos, pesticidas y
herbicidas, tensoactivos, polímeros, aditivos de polímeros, combustibles fósiles,
explosivos y propelentes.
La instrumentación empleada en la cromatografía de fluidos supercríticos es similar a la
de cromatografía de líquidos, aunque debe incorporar un horno termostato (similar al de
cromatografía de gases, para controlar con precisión la temperatura de la fase móvil)
y un restrictor o un sistema de contrapresión (que sirve para mantener la presión de la
columna en el nivel deseado y para convertir el eluato a gas y arrastrarlo al detector): Un
restrictor típico consiste en un capilar de 2 a 10 cm de longitud y de 5 a 10 μm de diámetro

unido al extremo final de la columna. Son intercambiables, para ajustarse a distintas
presiones y tasas de flujo.
En un proceso de extracción industrial uno o más componentes se separan de la mezcla
introducida, siendo el producto deseado tanto el extracto como el producto “refinado”. Al
tratarse los alimentos de mezclas altamente complejas lo más habitual es que los extractos
también lo sean por lo cual es muy habitual hablar de fraccionamiento de extractos. El
fraccionamiento en condiciones supercríticas consiste en una caída en cascada de la
densidad con la consiguiente precipitación en cascada de los compuestos extraídos en los
separadores donde se produce esta disminución de densidad.
e. Descripción de la fase móvil y fase estacionaria.
Fase estacionaria Fase móvil
En SFC se emplean tanto las columnas La fase móvil más utilizada en SFC es el
abiertas como las columnas rellenas, CO2 en estado super crítico. Es un
aunque las primeras son las más disolvente excelente para un conjunto de
empleadas. Las columnas abiertas son moléculas orgánicas no polares. Además,
similares a las columnas de sílice fundida es una sustancia transparente en el
con recubrimientos internos de varios ultravioleta, es colora, no tóxica, fácilmente
tipos de siloxanos enlazados y de enlaces disponible y muy barata. La temperatura
cruzados. Las columnas tienen una crítica del CO2 es 31° C y su presión crítica
longitud de 10 a 20 m y un diámetro 72,9 atmósferas, lo cual permite jugar con
interno de 0,05 a 0.10 mm. El espesor de una banda amplia de temperaturas y
la película varía entre 0.05 1 micrómetro. presiones sin superar las condiciones de
operación de un equipo de HPLC moderno.
Sustancias como etano, butano, óxido
nitroso, diclorodifluorometano, éter
dietílico, amoníaco y tetrahidrofurano han
sido también utilizadas como fases móviles.
 Detectores de ionización de llamas: Al igual que en la cromatografía de gases. Este
detector es de respuesta universal a compuestos orgánicos de elevada sensibilidad.
 Espectrómetros de masas: Se pueden adaptar más fácilmente que para HPLC.
 Otros detectores utilizados son de absorción en el ultravioleta y en el infrarrojo, de
emisión de fluorescencia, termoiónicos y fotométricos de llama.
La Temperatura Critica de una sustancia, es aquella temperatura por encima de la cual no
puede existir en fase liquida independientemente de la presión. La Presión de vapor de una
sustancia cuando alcanza la Temperatura crítica es su Presión Critica. Una sustancia a
temperatura y presión por encima de su Tc y Pc “Punto Crítico” se denomina fluido
supercrítico, este tiene las propiedades de expansión de un gas y la densidad de un líquido.
Electroforesis capilar
a. ¿Qué es?
Es la separación y detección de alta resolución de moléculas en mezclas complejas dentro
de un capilar de vidrio, este fenómeno se basa en las cargas electricas que se encuentran
en la pared interna a lo largo de todo el capilar, el cual presenta una carga negativa debido
a su naturaleza química.
La Electroforesis tiene múltiples aplicaciones, se usa como técnica a la resolución de
proteínas y productos de biología molecular (análisis de pureza de oligonucleótidos, terapia
génica, secuenciado de DNA y análisis de productos de PCR y de química forense).
Se han encontrado múltiples aplicaciones dentro de las que se destaca su aplicación en la
industria cervecera en el cual se hace una determinación directa y simultánea de analitos
presentes en cerveza, además de múltiples aplicaciones Biológicas y Bioquímicas.
La sección transversal del aparato de electroforesis se puede reducir se forma drástica al
realizar la electroforesis en el interior de un tubo capilar de diámetro interno menor a
0.1mm y una longitud de 50cm a 1m. Es efectivo llevar de esta forma la técnica porque la
resistencia eléctrica de la disolución es tan alta que la corriente se mantiene baja, en
consecuencia se pueden mantener voltajes más altos sin calentamiento excesivo. La técnica
tiene gran poder de resolución y se han desarrollado métodos para llevar a cabo la
electroforesis incluso en moléculas neutras no iónicas.
Además, las zonas de analitos separados por electroforesis capilar se pueden detectar de
igual modo que en una cromatografía en columna. El inconveniente de utilizar un capilar
es que el volumen de muestra debe ser de alrededor de un nanolitro o menos, y después de
la separación, cada uno de los analitos está en volúmenes inferiores al nanolitro. Con
volúmenes de líquido tan pequeños, muy pocos métodos de detección se pueden usar
eficazmente.
Hay dos tipos de modalidades de separaciones: electroforesis ordinaria y electroforesis
Capilar; la primera es la metodología clásica usada para la separación de mezclas
complejas, de elevada masa molecular, estas separaciones se realizan sobre una capa
delgada y plana o una placa hecha de un gel semisólido y poroso que contiene una solución
amortiguadora acuosa en el interior de sus poros. Esta una de las metodologías más usadas
en el área de Bioquímica y en Biología, una de las características más importantes en la
Electroforesis es que las especies deben tener un campo eléctrico, lo que trae consigo que
las especies neutras no serán separadas.
En el caso de la electroforesis capilar, produce separaciones de alta velocidad y alta
resolución con volúmenes pequeños (0.1 a 10 nL) además las muestras son eluídas desde
uno de los extremos del capilar por lo que se utilizan detectores cuantitativos para poder
obtener la mayor información del análisis.
Antes de iniciarse la separación, es decir, antes de la adición de la muestra, el sistema
electroforético debe encontrarse en equilibrio termodinámico, lo que implica que:
- la temperatura sea uniforme
- los potenciales químico y eléctrico sean los mismos en todo el sistema
- las fuerzas mecánicas estén equilibradas
El resultado final es un desplazamiento diferencial, según la carga, y a diferente velocidad
según las características de las especies cargadas, lo que provoca la separación.
e. Descripción de la fase móvil y fase estacionaria
En la electroforesis sólo se en cuenta el analito o muestra, el buffer o medio y el capilar.
En el analito son de importancia aspectos como tamaño y forma, carga neta y masa. Para
el buffer son significativos: la fuerza iónica, la temperatura, pH, viscosidad y la constante
dieléctrica. Para el capilar también se tiene en cuenta la carga superficial, recubrimiento y
flujo electrosmótico.
Una amplia variedad de detectores ha sido desarrollada para la EC (incluyendo
fluorescencia, electroquímica y conductividad) pero los detectores más usados
comercialmente son los que emplean el ultravioleta y UV visible. Los detectores son
similares a los de HPLC, usando fuentes de deuterio con filtros o detección con longitudes
de onda seleccionadas. Las fuentes de luz generalmente provienen de un haz de luz entre
un fotodiodo de referencia y un microenfocado óptico en el estuche del capilar. El scanning
es a través de un detector que ilumina el capilar con luz blanca luego dispersada y analizada
a través de un policromador por arreglo de fotodiodos (detector PDA para óptica reversa).
Alternativamente, el sistema óptico convencional puede ser empleado por una banda
espectral aislada por un monocromador colocado entre la fuente de luz y el capilar. El
scaneo puede ser controlado rápidamente por un sistema computarizado que controla el
movimiento del monocromador en el rango espectral en el tiempo de milisegundos. Este
sistema de detección produce menos ruido de fondo, y mucha más sensibilidad que el
detector con arreglo de diodos PDA.
El proceso de electroforesis capilar consta de tres etapas principales:

1. Uno de los extremos es sumergido en una solución buffer, el sistema es presurizado en ambos
Acondicionamiento extremos para que el buffer fluya a través del capilar, acondicionandolo a un pH, temperatura y
carga eléctrica definidos.
2. Inyección de El mismo extremo del capilar es sumergido en un vial. El sistema es presurizado y un pequeño
muestra volumen de la muestra ingresa en el capilar.
3. Separación Los dos extremos del capilar son colocados en una solución buffer de separación, están presentes
electroforética dos electrodos para aplicar un potencial eléctrico de hasta 30.000 volts, de manera que la capa
difusa es atraída al electrodo negativo del sistema (flujo electroosmótico). Cuando las moléculas
son detectadas por el detector inicia el cromatograma
- Las fuerzas puestas en juego son de tipo físico, fundamentalmente de naturaleza
electrostática.
- Se trata de una técnica con control de tipo cinético
- La variable tiempo juega un papel definitivo
Referencias bibliográficas
1. (s.f.) Recuperado de:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos_6700.pdf
2. Abrego V. (s.f.) Recuperado de: https://slideplayer.es/slide/2724400/
3. Agilent technologies. (2012) Recuperado de:
https://www.agilent.com/cs/library/slidepresentation/public/5-
SFC_hybrid_discovery_ES2.pdf
4. Álvarez et al. (s.f.) Cromatografía de intercambio iónico. Recuperado de:
http://ufq.unq.edu.ar/DocenciaVirtual/BQblog/Cromatografia%20de%20intercambio%20ioni
co.pdf
5. Castagnino, J. (2000). Electroforesis capilar. Bioquimia, 25 (1), 13-32. Recuperado de:
http://www.redalyc.org/html/576/57611797003/
6. Cheriyedath S. (23 de agosto de 2018) News Medical Life Sciences. Recuperado de:
https://www.news-medical.net/life-sciences/How-Does-Ion-Exchange-Chromatography-
Work-(Spanish).aspx
7. Cromatografía de intercambio iónico. (2015) Recuperado de:
https://lidiaconlaquimica.wordpress.com/2015/08/15/cromatografia-de-intercambio-ionico/
8. Doria, G. (2013). Técnicas cromatográficas específicas. En Módulo Cromatografía (pp. 45-
57). Bogotá, Colombia: UNAD - Universidad Nacional Abierta y a Distancia. Recuperado
de http://hdl.handle.net/10596/9904
9. Gismera, G. M. J., Quintana, M. M. D. C., & Da, S. D. C. M. D. (2012). Cromatografía de
cambio iónico. En Introducción a la cromatografía líquida de alta resolución. (pp. 119-124).
Madrid, ES: Editorial Universidad Autónoma de Madrid. Recuperado de
http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2077/lib/unadsp/reader.action?ppg=9&docID=11002011
&tm=1480310325624
10. Inolab especialistas. (2016, septiembre 26) Ciencias de la separación – electroforesis capilar
[Archivo de video] Recuperado de: https://www.youtube.com/watch?v=lims1qPZvKQ
11. Jiménez G. Et al. (s.f.) Recuperado de:
http://www.bioquimica.ucv.cl/paginas/central/met.%20separacion/separaciones%20cromatog
rafia%20y%20electroforesis.pdf
12. Laboratorio de técnicas instrumentales UVA. (s.f.) Recuperado de:
http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/analisis-qumicos/cromatografa-inica
13. Muhye A. (s.f.) Recuperado de: https://www.lifeder.com/cromatografia-intercambio-ionico/

14. Servicios Técnicos de Investigación. (s.f.) Recuperado de:
https://ssyf.ua.es/va/formacion/documentos/cursos-programados/2014/tecnicas-
espectroscopicas/instrumentacio.pdf

Fase 3 Johanna Cubillos

Caricato da

Informazioni sul documento

Copyright

Formati disponibili

Condividi questo documento

Condividi o incorpora il documento

Opzioni di condivisione

Hai trovato utile questo documento?

Questo contenuto è inappropriato?

Copyright:

Formati disponibili

Fase 3 Johanna Cubillos

Caricato da

Copyright:

Formati disponibili

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA – UNAD

Lady Johanna Cubillos Vaca

Marcela Andrea Zambrano

Es un proceso que permite la separación de iones y moléculas polares basadas en las

propiedades de carga de las moléculas. La separación se basa en las interacciones iónicas de

cromatográfica. Una vez separada, la muestra pasa a través de un detector (conductimétrico,

b. ¿Cuál es su aplicación? Ejemplos.

Presenta varias aplicaciones a nivel bioquímico e industrial.

 Se utiliza ampliamente para la separación de biomoléculas cargadas como:

polipéptidos, proteínas, polinucleótidos y ácidos nucleicos.

 Separación y purificación de los componentes de la sangre tales como albúmina,

factores de incremento recombinantes y enzimas.

 Biotecnología - usos analíticos tales como control de calidad y control de procesos

 Comida e investigación clínica - estudiar variedades del trigo y la correlación de la

proteinuria con diversas enfermedades renales.

de fermentación durante la producción de la ß-galactosidasa.

c. ¿Cuáles son las condiciones operativas?

Este tipo de cromatografía ocurre mediante dos mecanismos:

 Intercambio iónico debido a la formación de enlaces iónicos competitivos

similar y iones fijos en el soporte cromatográfico.

 Equilibrio: de la fase estacionaria a las condiciones iniciales deseadas

proteínas de carga apropiada.

 Elución: Las biomoléculas se liberan del intercambio iónico mediante un cambio en la

composición del buffer. Por lo general, se realiza aumentando la fuerza iónica de la

solución: la concentración de cloruro de sodio o alguna sal simple. Con el fin de

de grupos cargados en su superficie.

 Regeneración: Se remueven las moléculas que aun se encuentran unidas a la superficie

d. De los ejemplos citados ¿cuál es el fundamento para aplicar esas técnicas?

En proteínas la cromatografía de intercambio iónico se basa en las diferencias en signo y

magnitud de la carga eléctrica neta de las proteínas a un valor de pH determinado.

En análisis de aguas, la determinación de cationes funciona bien para alcalinos y

alcalinotérreos. Para otros cationes la diferencia en los coeficientes de selectividad no es

de especies que sí presentan más diferencia. En cambio, para la determinación de aniones en

agua resulta uno de los mejores métodos.

e. Descripción de la fase móvil y fase estacionaria.

Las fases estacionarias son generalmente redes macromoleculares minerales u orgánicas

cargados, teniendo la propiedad de separar especies ionizadas (cationes o aniones). De acuerdo

con la carga de la fase estacionaria se encuentra:

Cromatografía de intercambio aniónico Cromatografía de intercambio catiónico

El intercambiador es un catión o base, es Si el intercambiador es un anión o ácido, o

positivamente, al que se unen aniones y negativamente, al que se unen cationes y

Fase estacionaria positiva: intercambio Fase estacionaria negativa: intercambio

la muestra y la fuerza disolvente debe proporcionar tiempos de retención razonables y al

móvil determinarán su fuerza y su selectividad.

f. ¿Cuáles son sus detectores?

 Detector amperométrico: con estos se producen reacciones de transferencia de

electrones durante la detección (entre electrodo y analito). Es te tipo de detector se

reducidos. La señal analítica es la intensidad de corriente resultado de la oxidación o

reducción del analito. Este es un sistema de detección sensible y altamente selectivo.

iones absorben a una longitud de onda específica. No es una detección muy

significativa en CI, sirve de apoyo a la conductividad. Generalmente los iones

inorgánicos no suelen ser cromóforos.

Existen dos tipos de cromatografía de intercambio iónico: la que implica desplazamiento

estacionaria posee carga positiva es empleada en la separación de las especies aniónicas, y

cuando esta fase es de naturaleza aniónica es utilizada en la segregación de las especies

catiónicas presentes en la muestra.

los aminoácidos, nucleótidos de tamaño reducido, péptidos y proteínas de grandes

enlaces de naturaleza iónica con la fase estacionaria que no es soluble.

Cromatografía de fluidos supercríticos

b. ¿Cuál es su aplicación? Ejemplos.

Se utiliza para la separación de: productos naturales, fármacos, alimentos, pesticidas y

herbicidas, tensoactivos, polímeros, aditivos de polímeros, combustibles fósiles,

c. ¿Cuáles son las condiciones operativas?

La instrumentación empleada en la cromatografía de fluidos supercríticos es similar a la