las siguientes:
CONTROL BIOLÓGICO EN Temperatura
BACTERIAS Y HONGOS
Paula Andrea Giraldo a Laboratorio
Microbiología General/Institución de
Biología/Universidad de Antioquia, Medellín,
Colombia.
Leidy Johana Morales b Laboratorio
Microbiología General /Institución de
Biología/Universidad de Antioquia, Medellín,
Colombia. leydy.morales@udea.edu.co
RESUMEN
Se realizaron pruebas de antibiograma para
evaluar la acción de diferentes extractos
vegetales frente a 4 bacterias y 3 hongos, se
llevó un control de crecimiento de estos
durante 24 ,48 horas y 7 días en los que se
realizaron las lecturas y revisiones
penitentes, anotando los cambio, la presencia
o no de un halo de inhibición y tomando las
respectivas medidas de este, en caso de que
se inhibiera el crecimiento de la bacteria u
hongo alrededor del disco .
ABSTRAC
Antibiotic tests were performed to evaluate
the action of different plant extracts against 4
bacteria and 3 fungi, a control of growth was
carried out during 24, 48 hours and 7 days in
which penitent readings and revisions were
made, noting the Change, the presence or not
of an inhibition halo and taking the respective
measures of this, in case the growth of the
bacterium or fungus around the disc was
inhibited.
INTRODUCCIÓN
DESARROLLO Y CRECIMIENTO EN BACTERIAS
Las condiciones para que una bacteria que
contamina los alimentos se reproduzca, son
de ambiente:
La mayoría de las bacterias se multiplica más
rápido a los 37º C (la temperatura normal del
cuerpo humano), aunque también pueden
reproducirse rápidamente entre los 20 y los
50º C. Para prevenir su crecimiento debemos
asegurarnos de que la temperatura de la
comida llegue por debajo de los 5º C, durante
su conservación en el refrigerador, o por
encima de lo 65º C, durante su cocción. El
rango que va entre las dos temperaturas, es
conocido como una zona peligrosa para
consumir alimentos.
Tener en cuenta que algunas bacterias son
capaces de producir esporas que les permite
sobrevivir a condiciones dificultosas como
pueden ser las altas temperaturas, por eso
debemos evitar la formación de
microorganismos en todos los aspectos del
proceso que va desde la compra hasta el
consumo.
Alimentos y Humedad:
Los gérmenes prefieren la humedad, y los
alimentos de alto contenido proteico, como
las carnes, las aves, los pescados y los
productos lácteos. Las altas concentraciones
de azúcar, sal, y ciertos condimentos ayudan
a prevenir el crecimiento de los gérmenes.
Tiempo: Dadas las condiciones del tipo de
alimento, la humedad y la temperatura,
algunas bacterias pueden dividirse en dos,
cada 20 minutos. Si se da el tiempo suficiente,
es posible que un pequeño grupo de bacterias
se incremente hasta alcanzar un número
importante, capaz de provocar una
contaminación alimentaria. Por esa razón, es
esencial que los alimentos de alto riesgo no
permanezcan a la temperatura de la zona de
peligro, más que lo necesario.
DESARROLLO Y CRECIMIENTO EN HONGOS
Factores físicos: La humedad ya que esta
debe encontrarse en alto porcentaje de lo
contrario en hongo no podrá desarrollarse; de
igual manera necesita de agua
especialmente en forma libre, ya que de esto
depende la germinación de esporas.
La temperatura óptima para el crecimiento y
desarrollo de los hongos se encuentra entre
los 25 y 30ºC, y puede llegar a los 40 y 45 ºC,
sin embargo hay excepciones con especies
que crecen a 0 ºC y 55 ºC sin ningún
problema.
Factores químicos: PH los hongos tienen la
capacidad de tolerar intervalos de PH entre
(2,5 - 7,5) esto significa que soportan más el
medio acido que el alcalino. Es importante
decir que los hongos tienen la propiedad de
modificar el PH por medio de los ácidos
orgánicos del alimento y los excretados por
bacterias acidificantes los cuales utilizan
como energía.
En cuanto a la riqueza del sustrato los hongos
no son exigentes en cuanto al punto
nutricional, ya que ellos se nutren de los
macro elementos y micro elementos
existentes el sustrato, sin embargo el hierro y
el zinc son importantes para el desarrollo de
los hongos.
Factores biológicos: La presencia de insectos
ayuda a la multiplicación de los hongos ya que
el metabolismo del insecto ayuda al aumento
de la humedad.
Crecimiento: Los septos que son paredes que
dividen de modo completo o incompleto una
cavidad en unas más pequeñas, crecen en
forma centrípeta, su función en los hongos es
permitir el paso de los flujos protoplasmáticos
los cuales proporcionan nutrientes para las
células, las cuales están almacenadas en las
paredes de las hifas en forma de glucógeno,
pueden ser simples o complejos.
Las hifas que son las unidades estructurales
de los hongos crecen en forma apical, pueden
ser septadas que contienen tabiques, y
aseptadas que carecen de tabiques.
Un antibiograma es una prueba
microbiológica que se realiza para determinar
la susceptibilidad (sensibilidad o resistencia)
de una bacteria a un grupo de antibióticos. Las
técnicas de antibiograma son las utilizadas en
el laboratorio de microbiología para estudiar
la actividad de los antimicrobianos frente a los
microorganismos responsables de las
infecciones. Se considera como
antimicrobiano cualquier sustancia con
capacidad de matar o al menos de inhibir el
crecimiento de los microorganismos y que sea
susceptible de utilización como tratamiento
en los pacientes. Pueden ser naturales,
sintéticos o semisintéticos (modificación
química de un compuesto natural). La historia
moderna de los antibióticos comienza con el
descubrimiento de sustancias presentes en
unos microorganismos capaces de matar a
otros microorganismos. La utilización de
antibióticos supuso un avance enorme en la
esperanza de vida de las personas que
padecían procesos infecciosos, aunque
también supuso un aumento en los niveles de
resistencia antibiótica.
El antibiograma tiene cuatro utilidades
principales: La utilidad básica del
antibiograma es la instauración de un
tratamiento antibiótico correcto al paciente.
Es necesario conocer si el microorganismo
responsable de la infección posee
mecanismos que le confieran inmunidad
frente a algún antibiótico para no incluirlo
como terapia.
En cuanto al tratamiento el antibiograma no
sólo es necesario en la instauración, también
resulta útil en el seguimiento e incluso en la
confirmación de tratamientos empíricos. En
ocasiones la enfermedad infecciosa resulta
grave y se comienza el tratamiento antes de
conocer los datos de sensibilidad de la cepa.
El antibiograma tiene que confirmar, o en su
caso corregir el tratamiento.
Otra aplicación de las técnicas de estudio de
resistencia es la epidemiología. Es necesario
detectar el aumento de los niveles de
resistencia en los aislamientos clínicos para
tomar medidas correctoras.
Por otro lado también puede tener utilidad
diagnóstica porque el perfil de resistencia
puede en algún caso orientar en la
identificación bacteriana.
Existen multitud de antimicrobianos en el
mercado y el número sigue creciendo porque
el desarrollo de más mecanismos de
resistencia por parte de los microorganismos
se traduce en un esfuerzo mayor por fabricar
más y mejores antibióticos. No es necesario
contrastar la eficacia de todos los antibióticos
para cada aislamiento bacteriano. Los
criterios que se siguen para seleccionar que
antimicrobianos se ensayan respondes a
factores de diversa índole:
Factores microbiológicos: Tipo de agente
infeccioso y mecanismos de resistencia
descritos previamente en su especie.
Factores farmacológicos: Tipo de
antimicrobiano y parámetros de absorción,
distribución y eliminación.
Factores del paciente: Tipo de infección.
Factores de riesgo y estado general de salud.
Situación inmunológica e hipersensibilidad.
Experiencia anterior referente a los patrones
de resistencia antibiótica más habituales para
cada especie.
MATERIALES Y METODOS.
Se usó el método de difusión de disco para
observar la actividad antibacteriana y
fungicida diferentes extractos vegetales.
Se inocularon sin dejar espacio 4 bacterias
previamente aisladas y libres de
contaminantes en 4 respectivos agares con
su réplica, cada uno las siguientes cepas ;cepa
1= staphylococcus aureus , cepa 2= bacillus
cereus, cepa 3=, escherichia coli, cepa 4=
pseudomona aeruginosa , los discos de papel
de filtro son impregnados en la caja A con los
extractos del 1 al 4 Disco 1 = extracto de ruda
,Disco 2 =extracto de ajo, Disco 3=extracto de
cola de caballo, Disco 4=extracto de romero,
en la caja B con los extractos 5 al 8 con Disco
5=extracto de caléndula ,Disco 6=penicilina
,Disco 7=tetraciclina ,Disco 8 =hipoclorito. Tan
pronto el disco impregnado en antibiótico se
pone en contacto con la superficie húmeda
del agar, el filtro absorbe agua y el antibiótico
difunde por el agar, formándose un gradiente
de concentración. Transcurridas 18 a 24 horas
de incubación de a 35ºC a 37°C, los discos
pueden o no aparecer rodeados por una zona
de inhibición de crecimiento bacteriano.
Después de incubar las placas del
antibiograma se procede a su lectura. Se usa
una regla y se mide el radio del halo de
inhibición partiendo desde donde está el
disco de antibiótico hasta donde se inhibió el
crecimiento.
Método para hongos, en una caja de Petri sin
inocular se coloca un disco impregnado con
el extracto vegetal en el centro, los extractos
usados son los mismo primero 5 que usamos
en la prueba de las bacterias. Disco 1 =
extracto de ruda ,Disco 2 =extracto de ajo,
Disco 3=extracto de cola de caballo, Disco
4=extracto de romero, Disco 5=extracto de
caléndula alrededor del disco se inoculó
cuatro cuadros de agar con el hongo
previamente aislado a una distancia de 0,5
cm,los cuales fueron aspergillus flavus,
aspergillus niger y penicillum sp .Además se
realizaron dos pruebas control una negativa
en la que solo inoculamos el hongo en el agar
para observar su crecimiento y una positivo
con un disco impregnado de difenoconazol .A
cada uno de estos hongos se les realizo las
respectivas pruebas ,se observó si el disco
tuvo actividad funguicida o fungistática .
RESULTADOS Y DISCUCIÓN.
Se hicieron observaciones durante 24, 48
horas y a siete días.
Observaciones a las 24 horas:
 Bacterias
Cepa 1: staphylococcus aureus solo presento
halo de inhibición en la caja B en el disco 7 con
la tetraciclina, con un diámetro de 1,5 x1,5
cm.
Cepa 2: bacillus cereus presentó un semihilo
de inhibición en el disco 2 con un diámetro
1,5 cm x 1,5 cm y presento un halo más
notorio de inhibición en el disco 7 tetraciclina
con un diámetro de 1.9 x 1.8 cm.
Cepa 3: e. coli solo presento halo de
inhibición en la caja B en el disco 7 con la
tetraciclina, con un diámetro de 2,1 x 2,1 cm.
Cepa 4: Pseudomona la caja de Petri se
coloreó verde solo presento halo de
inhibición en la caja B en el disco 7 con la
tetraciclina, con un diámetro de 1,4 x 1,3 cm.
 Hongos
Aspergillus flavus
Control negativo: creció el hongo.
Control positivo difenoconazol: no presento
inhibición
Mesa 1= hubo inhibición.
Mesa 2 =presentó crecimiento pero hubo un
halo de inhibición alrededor del disco.
Mesa 3 =no hubo inhibición.
Mesa 4 =no hubo inhibición.
Mesa 5 =hubo inhibición.
Aspergillus niger.
Control negativo: creció el hongo.
Control positivo difenoconazol: presento
inhibición
Mesa 1= hubo inhibición.
Mesa 2 =presentó crecimiento pero hubo un
halo de inhibición alrededor del disco.
Mesa 3 =no hubo inhibición.
Mesa 4 = hubo inhibición.
Mesa 5 =no hubo inhibición.
Penicillum
Control negativo: creció el hongo.
Control positivo difenoconazol: presento
inhibición
Mesa 1=no hubo inhibición.
Mesa 2 =presentó un halo de inhibición
alrededor del disco.
Mesa 3 =no hubo inhibición.
Mesa 4 = hubo inhibición.
Mesa 5 =hubo inhibición.
Observaciones a las 48 horas:
 Bacterias
Cepa 1: staphylococcus aureus presentó un
semihalo de inhibición en el disco 2 con
diámetro de 1,8 cm largo x 1,8 cm ancho ,y un
halo de inhibición en la caja B en el disco 7 con
la tetraciclina, con un diámetro de 3,3 x 3,0
cm.
Cepa 2: bacillus cereus presentó un semihilo
de inhibición en el disco 2 con un diámetro
1,5 cm x 1,5 cm y presento un halo más
notorio de inhibición en el disco 7 tetraciclina
con un diámetro de 2.1 x 1.9 cm.
Cepa 3: e. coli solo presento halo de
inhibición en la caja B en el disco 7 con la
tetraciclina, con un diámetro de 2,2 x 2,2 cm.
Cepa 4: pseudomona la caja de Petri se
coloreó verde solo presento halo de
inhibición en la caja B en el disco 7 con la
tetraciclina, con un diámetro de 1,5 x 1,4 cm.
 Hongos
Aspergillus flavus
Control negativo: creció el hongo.
Control positivo difenoconazol: no presento
inhibición
Mesa 1= no hubo inhibición.
Mesa 2 =no presento un halo de inhibición
alrededor del disco.
Mesa 3 =no hubo inhibición.
Mesa 4 =no hubo inhibición.
Mesa 5 =hubo inhibición.
Aspergillus niger.
Control negativo: creció el hongo.
Control positivo difenoconazol: No presento
inhibición
Mesa 1= no hubo inhibición, pero controló la
esporulación del hongo
Mesa 2 =no hubo un halo de inhibición
alrededor del disco.
Mesa 3 =no hubo inhibición, controló la
esporulación del hongo.
Mesa 4 = no hubo inhibición.
Mesa 5 =no hubo inhibición.
Penicillum
Control negativo: creció el hongo.
Control positivo difenoconazol: presento
inhibición
Mesa 1=no hubo inhibición.
Mesa 2 =presentó un halo de inhibición
alrededor del disco.
Mesa 3 =no hubo inhibición, se contaminó
con otro hongo.
Mesa 4 =no hubo inhibición.
Mesa 5 =hubo inhibición.
Observación en 7 dias.
 Bacterias
Cepa 1: staphylococcus aureus presentó un
semihalo de inhibición en el disco 2 con
diámetro de 1,8 cm largo x 1,8 cm ancho, y un
halo de inhibición en la caja B se secó el
medio.
Cepa 2: bacillus cereus presentó un semihilo
de inhibición en el disco 2 con un diámetro
1,6 cm x 1,6 cm y presento un halo más
notorio de inhibición en el disco 7 tetraciclina
con un diámetro de 2,6 x 2,7 cm.
Cepa 3: e. coli solo presento halo de
inhibición en la caja B en el disco 7 con la
tetraciclina, con un diámetro de 2,4 x 2,3 cm
en el disco 6 presento más crecimiento.
Cepa 4: pseudomona la caja de Petri se
coloreó verde solo presento halo de
inhibición en la caja B en el disco 7 con la
tetraciclina, con un diámetro de 1,6 x 1,5 cm.
 Hongos
Aspergillus flavus
Control negativo: creció el hongo.
Control positivo difenoconazol: no presento
inhibición
Mesa 1= no hubo inhibición.
Mesa 2 =no presento un halo de inhibición
alrededor del disco.
Mesa 3 =no hubo inhibición.
Mesas 3,1 y 5 contaminadas por aspergillus
niger.
Mesa 4 =no hubo inhibición.
Mesa 5 =hubo inhibición.
Aspergillus niger.
Control negativo: creció el hongo.
Control positivo difenoconazol: presento
inhibición muy leve
Mesa 1= no hubo inhibición. controló la
esporulación del hongo.
Mesa 2 =no hubo un halo de inhibición
alrededor del disco.
Mesa 3 =no hubo inhibición, controló la
esporulación del hongo.
Mesa 4 = no hubo inhibición.
Mesa 5 =no hubo inhibición.
Penicillum
Control negativo: creció el hongo.
Control positivo difenoconazol: presento
inhibición
Mesa 1=no hubo inhibición creció el hongo
sobre el disco, controló la esporulación del
hongo
Mesa 2 =presentó un halo de inhibición
alrededor del disco.
Mesa 3 =no hubo inhibición cubrió el disco
por completo y se contaminó con otro hongo.
Mesa 4 =no hubo inhibición y se contamino
con otro hongo.
Mesa 5 =hubo inhibición .no inhibió, casi no
toca el disco pero creció muy cerca.
En aspergillus flavus se notó en el extracto 1 y
3 un control de la esporulación del hongo, por
lo tanto podemos decir que tiene efecto
fungistático puesto que detiene la
reproducción del hongo e inhibe su desarrollo
pero no lo mata, el hongo se sigue
extendiendo por la placa, pero solo posee
esporas en una pequeña zona.
El disco impregnado de tetraciclina inhibido
el crecimiento de todas las bacterias con las
que se realizó el experimento ya que Las
tetraciclinas son antibióticos de amplio
espectro, derivados de la
naftacenocarboxamida poli cíclica. Actúan
inhibiendo la síntesis proteica al unirse a la
subunidad 16S del Ribosoma y no permitir la
unión del RNA de Transferencia (tRNA) a este.
Funciona al prevenir el crecimiento y
diseminación de las bacterias. Los antibióticos
no tienen ningún efecto en los resfríos, la
gripe u otras infecciones víricas.
El disco 2 ajo formo un semihalo de inhibición
un halo un poco borroso, Estudios
contemporáneos han confirmado que el ajo
posee numerosos antioxidantes que matan
bacterias y radicales libres en la sangre,
protegiendo al sistema inmunológico y
reforzándolo. A diferencia de los antibióticos
modernos, el ingrediente activo del ajo,
Alicina, puede atacar y destruir una variedad
de virus e infecciones por hongos como la
cándida.
El ajo inhibe el crecimiento de los
estafilococos, estreptococos y las bacterias
causantes de la disentería y del tifus.
El difenoconazol como control positivo de
inhibición en el crecimiento en hongos como
el penicillum y el aspergillus niger, pero no antibiótica (en línea). TEMAS DE
fue muy eficaz en aspergillus flavus.es un
BACTERIOLOGÍA Y VIROLOGÍA
fungicida sistemático Actúa deteniendo el
desarrollo de los hongos interfiriendo con la MÉDICA. disponible en
biosíntesis de los esteroles de las membranas aurl=http://www.higiene.edu.uy/cef
celulares del patógeno.
a/2008/BacteCEFA36.pdf
CONCLUSIONES

 El disco con mejor efecto antibiótico

fue el 7 tetraciclina, ya que inhibió el
crecimiento de todas las bacterias
con las que se realizó el experimento.
 El extracto que mejor efecto
antibacterial tubo fue el extracto de
ajo.
 El extracto 1 y 3 tienen efecto
fungistático en aspergillus flavus.
 El difenoconazol inhibido el
crecimiento de penicillum y
aspergillus niger

BIBLIOGRAFÍA

 Microbiología (en
línea).antibiograma. disponible en
url=http://microbiologia3bequipo5.b
logspot.com.co/2014/10/halos-de-
inhibicion.html

 Tapia P, Cecilia V. (2009).

Actualización en pruebas de
susceptibilidad antifúngica. Revista
chilena de infectología, (en línea)
disponible en
url =
https://dx.doi.org/10.4067/S0716-
10182009000200005 .

 R. Taroco, V. Seija, R. Vignoli,

Métodos de estudio de la sensibilidad