Guía Elaboracion Muestreo V.1.1

5/9/2018 Propiedades de los Solventes Usuales en HPLC | Cromlab S.L.
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FLASH, HPLC, MODO MIXTO, PAR IÓNICO
Propiedades de los Solventes Usuales en HPLC

3 ENERO, 2017 | ADMIN | DEJAR UN COMENTARIO
Propiedades de los Solventes usados en HPLC

Los solventes en HPLC
se utilizan como:
Fases Móviles
Para disolver la muestra
Para preparar las
muestras
El uso como Fases

Móviles es de principal
importancia puesto que
sus propiedades han de
mantenerse en límites
estrechos de
aceptabilidad. Además
esas propiedades
también in uyen en la
elección del solvente de
disolución y el de
preparación de la
muestra.
En la TABLA 1, se muestran varias propiedades que son importantes al seleccionar el o los solventes
en una aplicación de HPLC.
http://blog.cromlab.es/propiedades-de-los-solventes-usuales-en-hplc/ 1/10
5/9/2018 Propiedades de los Solventes Usuales en HPLC | Cromlab S.L. Blog de Cromatografía
TABLA 1. Propedades de los solventes más comunes en HPLC
La elección nal del solvente más adecuado se basará en los siguientes principios básicos:
Compatibilidad con el detector

Polaridad y Selectividad
Seguridad
1. Compatibilidad con la Detección
1.1. Detección UV
La fase móvil debería tener una absorbancia A < 0.2 AU en la longitud de onda seleccionada para la
detección de la muestra: una menor absorbancia permite una mayor precisión del ensayo y mejores
resultados en condiciones de elución por gradiente, aunque una absorbancia mayor puede resultar
aceptable en algunas separaciones isocráticas.
La TABLA 2 resume las absorbancias de los solventes más usados en CFI (RPC) entre 200 y 260 nm.
Raramente se usan longitudes de onda <200 nm, excepto en casos muy concretos de solutos con baja
absorbancia (carbohidratos, triglicéridos, ácidos grasos…)
TABLA 2. Absorbancia UV en Función de λ para varios Soventes y Tampones usados en CFI (Cromatografía de Fase Inversa)
Puesto que el agua no absorbe a 200 nm o por encima, la absorbancia de las fases móviles con agua
será la misma que la del solvente puro multiplicada por la fracción de volumen (f) del solvente B. Por
ejemplo a 220 nm fases móviles con un 25% de los solventes listados de la Tabla 2 tendrán
absorbancias de: Acetonitrilo 0.00 AU, Metanol 0.06 AU, THF 0.17 AU, IPA 0.05 AU.
La desgasi cación contribuye a una menor absorbancia (aproximadamente un 30% menor) entre 200
y 240 nm en función del menor contenido de oxígeno disuelto, que es mayor cuanto más polar sea el
solvente: el efecto de la desgasi cación será más notable en solventes más polares como el THF o el
IPA.
Se asume que el agua ha sido puri cada según ASTM D1139 y que además, si se requieren niveles de
detección muy bajos, el valor de TOC (Total Organic Carbon) ha de ser < 50 ppb y la resistividad alta.
En la TABLA 3 se muestran los valores UV de cutoff para varios solventes.
TABLA 3. Propiedades Físicas de varios solventes usados en HPLC
En condiciones de gradiente es necesario que la respuesta del detector se mantenga constante, y es

necesario que el solvente A (normalmente agua) y el solvente B respondan de manera similar y si se
trabaja a bajas longitudes de onda la elección de solventes disponibles se reduce considerablemente.
1.2. Detección por Índice de Refracción

En condiciones isocraticas la selección de eluyentes no resulta crítica y la sensibilidad puede
incrementarse con fases móviles cuyo Índice de Refracción (IR) sea lo más diferente posible que el de
los componentes de la mezcla (ver TABLA 3).
Los detectores de IR no pueden utilizarse en condiciones de gradiente por la gran diferencia de

respuesta que pueden tener el solvente A y B.
1.3. Detección MS
La interfase de un Espectrómetro de Masas evapora la fase móvil. Las fases móviles como agua,
solventes orgánicos y aditivos han de ser volátiles y han de evitarse sales o tapones no volátiles.
Al eliminarse la fase móvil su absorción UV o Índice de Refracción no son factores limitantes pero los

solventes han de estar libres de partículas.
2. Polaridad y Selectividad
En la TABLA 4 se muestran los propiedades de los solventes que afecta a la fuerza, selectividad y
solubilidad. La “Selectividad Normalizada” incluye tres contribuciones a la interacción soluto.solvente:
La Acidez y la Basicidad de Enlace de Hidrógeno y la Dipolaridad.
TABLA 4. Polaridad y Selectividad de los solventes
Estos tres parámetros son la base del triángulo de la selectividad:
Triángulo Polaridad
Otro triangulo muy popular en cromatogra a FLASH y Fase Normal es el siguiente (vea como aplicarlo
AQUÍ:
Figura 1. Siempre que sea posible, para optimizar la selectividad, se deberían usar mezclas con hexano y Acetato de Etilo (G6), Cloruro de
Metileno (G5), Tolueno (G7), THF (G3) y Éter Etílico (G1). Estas combinaciones generan un amplio rango de selectividad y permiten de nir la mejor
opción para decidir los eluyentes más adecuados para UPFP.
La TABLA 4 muestra el valor de P’, una medida de la polaridad media del solvente. La solubilidad de la
muestra tiene relación con los valores de P’ (lo similar disuelve lo similar). Las muestras tienden a ser
más solubles en solventes de P’ similar. Los solventes menos polares como los hidrocarburos
disolverán muestras poco polares (valor de P’ bajo). Al contrario solventes con alto P’, disolverán
muestra más polares.
La constante dieléctrica ε también tiene relación con la habilidad del solvente de disolver solutos
ionizados o tampones: un valor alto de ε favorece la solubilización de compuestos ionizables.
La TABLA 5 muestra valores de viscosidad de mezclas MeOH/Agua y ACN/Agua en función de la

temperatura.
TABLA 5. Viscosidad de mezclas MeOH y ACN con Agua. Se muestran la pérdida de carga en una columna C18 de 100×2.1mm y partícula de
3 μm
Los datos mostrados pueden usarse para estimar la pérdida de carga según la ecuación:
Donde L es la longitud de la columna en mm, η es la viscosidad en cp, F el caudal en mL/min, dc es el

diámetro interno de la columna y dp es el diámetro de la partícula en µm.
La TABLA 6 muestra la densidad para algunos solventes comunes, y permite la formulación de fases
inversas por pesada de cada componente en la mezcla.
TABLA 6. Densidad de solventes usados en CFI
3. Seguridad
Los solvente usados generalmente en HPLC son muchas veces in amables y moderadamente tóxicos,
y por lo tanto han de almacenarse en una armario metálico de seguridad.
En la TABLA 7 se muestran los valores de Flash Point que indican la in amabilidad del solvente. La
experiencia indica que el metanol (FP 12 ºC) es moderadamente in amable por lo que productos con
FP por encima de ese valor no debería presentar ningún problema en términos de seguridad frente al
fuego. Los solventes con FP inferiores son más peligrosos y deberían tratarse con la cautela adecuada.
TABLA 7. In amabilidad y Toxicidad
Por cuanto respecta a la toxicidad los solventes deberían manipularse en campana exceptuando el
agua. La indicación de su toxicidad viene dada el valor LD50 que es la cantidad en mg/Kg de cuerpo que
causa un 50% de mortandad de la población. Sin embargo los solventes usados en el laboratorio muy
raramente se ingestan y su peligro más inmediato es por contacto o inhalación. La Acetona con un
LD50 no es claramente un problema aunque su FP de -18ºC requiere atención por cuanto respecta al
riesgo de fuego.
HPLC TEORÍA HPLC

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1. Compatibilidad con la Detección

En la TABLA 3 se muestran los valores UV de cutoff para varios solventes.

TABLA 3. Propiedades Físicas de varios solventes usados en HPLC

En condiciones de gradiente es necesario que la respuesta del detector se mantenga constante, y es

1.2. Detección por Índice de Refracción

Los detectores de IR no pueden utilizarse en condiciones de gradiente por la gran diferencia de

Al eliminarse la fase móvil su absorción UV o Índice de Refracción no son factores limitantes pero los

TABLA 4. Polaridad y Selectividad de los solventes

Estos tres parámetros son la base del triángulo de la selectividad:

La TABLA 5 muestra valores de viscosidad de mezclas MeOH/Agua y ACN/Agua en función de la

Donde L es la longitud de la columna en mm, η es la viscosidad en cp, F el caudal en mL/min, dc es el

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TABLA 7. In amabilidad y Toxicidad

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