DETERMINACION SIMULTÁNEA DE DOS COMPONENTES DE UNA MEZCLA POR

ESPECTROSCOPIA VISIBLE
Objetivos
 Determinar la concentración de cada uno de los componentes de una mezcla utilizando una
técnica espectrofotométrica.
 Aprender el manejo de un espectrofotómetro.
Introducción
La erioglaucina (C37H34N2Na2O9S3) es un colorante que se emplea en la industria alimentaria como
aditivo capaz de teñir los alimentos de color azul, su código es el E 133. Se emplea en la tinción
de helados y en repostería. Otros usos son en cosmética y en colutorios bucales.

Figura 1. Estructura molecular de la erioglaucina

La tartrazina (C16H9N4Na3O9S2) también es ampliamente utilizada en la industria alimentaria.

Pertenece a la familia de los colorantes azoicos, los que contienen el grupo azo: −N=N−. Se
presenta en forma de polvo y es soluble en agua, haciéndose de color más amarillo cuanto más
disuelta esté. Su código es E 102. A veces estos dos colorantes se combinan para dar un color
verde.

Figura 2. Estructura molecular de la tartrazina

Dado que son compuestos que presentan color, pueden ser determinados por el método de
espectrometría de absorción visible. Un equipo de absorción UV- Vis nos permite trabajar en un
rango de 200-750 nm.
Los métodos de absorción se fundamentan en la Ley de Beer, la cual establece que cuando una
onda electromagnética de longitud de onda definida incide sobre una sustancia, la fracción de
radiación absorbida es una función de la concentración de la sustancia en la trayectoria de la luz y
del espesor de la muestra.
La Ley de Beer se comprende más fácilmente si se considera el esquema de la Figura 1.1, donde
se muestra un haz de luz monocromático de potencia radiante 𝑃0 que incide en la muestra, después
de que ocurre el proceso de absorción, el haz emerge con una potencia 𝑃.

𝑃0 𝑃

Figura 1.1. Atenuación de un haz de radiación por una solución absorbente.

Como consecuencia de interacciones entre fotones y las partículas absorbentes, la potencia del haz
es atenuada. La transmitancia (T) de la solución es entonces la fracción de la radiación incidente
transmitida por la solución:
𝑃
𝑇=
𝑃0
La transmitancia se expresa a menudo como porcentaje (%T):
𝑃
%𝑇 = 𝑥100
𝑃0
La absorbancia (A) de una solución se define mediante la ecuación:
𝑃 𝑃0
𝐴 = −𝑙𝑜𝑔𝑇 = −𝑙𝑜𝑔 =
𝑃0 𝑃
Las aplicaciones analíticas del comportamiento de absorción de las sustancias pueden ser
cuantitativas y cualitativas. En este sentido la absorbancia está relacionada con la concentración
por la Ley de Lambert-Beer, que se expresa como sigue:
𝐴 = Ɛ𝑏𝐶

El coeficiente de absortividad molar (Ɛ𝜀) depende de la naturaleza de la sustancia y de la longitud

de onda.
Instrumentación
 Espectrofotómetro UV-Vis. Para medir cuantitativamente diferencias en la intensidad de
los colores o bien registrar espectros UV-Vis, se necesita un espectrofotómetro UV-Vis
que proporciona datos de absorbancia a distintas longitudes de onda.
Un espectrómetro UV-Vis se compone de cinco elementos principales:
 Una fuente de luz. Una lámpara de Wolframio es habitual y, en nuestro caso, emite
radiación entre 340 y 1100 nm.
 Un monocromador que selecciona un haz de luz con una longitud de onda determinada
(un haz monocromático). Esto se consigue mediante el uso de rejillas de difracción y filtros
para descomponer la luz de la lámpara.
 Una celda portamuestras. Se utilizan materiales transparentes en el rango de frecuencia
utilizado tales como platicos, vidrio borosilicato y, sobre todo, cuarzo.
 Un detector para medir la intensidad del haz transmitido. Generalmente se trata de una
celda fotoeléctrica que traduce 𝐼λ en una intensidad de corriente o diferencia de potencial.
 Una pantalla de visualización.
Material y reactivos
 Espectrofotómetro UV-Vis.
 Soluciones estándar de cada uno de los componentes de la muestra:
a) Tartrazina (6-16 ppm) y Erioglaucina (100-700 ppm)
 Solución Stock Tartrazina (100 ppm) y Erioglaucina (1000 ppm)
 Muestra problema
 Agua destilada
Procedimiento
1. Realizar los cálculos para preparar los estándares correspondientes a partir de la solución
Stock.
2. Consultar el instructivo para la operación del espectrofotómetro UV-Vis
3. Análisis de las soluciones:
a) Obtener el espectro de absorción de cada componente (utilizar una solución estándar de
cada componente) desde una longitud de onda de 400 hasta 700 nm.
b) Determinar, a partir de los espectros obtenidos en el punto (a) de este procedimiento, la
longitud de onda de máxima absorción de cada componente.
c) Medir la absorbancia de los estándares de cada componente y de la solución problema a
las longitudes de onda que se encontraron en el punto (b).

Resultados
Tabla 1. Absorbancia de estándares tartrazina a 425 nm.
Curva de Tartrazina a 425 nm
Concentración (ppm) Absorbancia
6 0.2849
8 0.3792
10 0.4788
12 0.5849
14 0.6629
16 0.7352
Tabla 2. Absorbancia de estándares tartrazina a 660 nm.
Curva de Tartrazina a 660 nm
Concentración (ppm) Absorbancia
6 -0.0041
8 -0.0053
10 -0.0054
12 -0.0061
14 -0.0066
16 -0.0039

Tabla 3. Absorbancia de estándares erioglaucina a 425 nm.

Curva de Erioglaucina a 425 nm
Concentración (ppm) Absorbancia
100 0.1562
200 0.3051
300 0.4430
400 0.7661
600 1.2396
700 1.3641

Tabla 4. Absorbancia de estándares erioglaucina a 660 nm

Curva de Erioglaucina a 660 nm
Concentración (ppm) Absorbancia
100 0.2680
200 0.4401
300 0.5684
400 0.9906
600 1.6029
700 1.9086

Gráfica 1. Curva de calibración tartrazina a 425 nm.

0.78
0.68
Absorbancia

0.58
0.48
0.38
0.28
5 10 15
Concentración (ppm)

Ecuación: y=0.0458x+0.0168, R2=0.9956

Gráfica 2. Curva de calibración tartrazina a 660 nm.

-0.001 5 10 15
Absorbancia

-0.003

-0.005

-0.007
Concentración (ppm)

Ecuación: y= -0.0003x-0.0022, R2=0.9972

Gráfica 3. Curva de calibración erioglaucina a 425 nm.

1.5
Absorbancia

0.5

0
0 200 400 600 800
Concentración (ppm)

Ecuación: y=0.0021x-0.0788, R2=0.9949

Gráfica 4. Curva de calibración erioglaucina a 660 nm.

2.5
2
Absorbancia

1.5
1
0.5
0
0 200 400 600 800
Concentración (ppm)

Ecuación: y=0.0028x-0.0729, R2=0.9954

Tabla 5. Coeficientes de absortividad molar
Estándar ε, L/mol•cm a 425 nm ε, L/mol•cm a 660 nm
Tartrazina 0.0458 -0.0003
Erioglaucina 0.0021 0.0028

Muestra 1: Gatorade amarillo

Muestra 2: Powerade azul

Muestra λ (nm) Absorbancia

1 425 0.5570
660 0.1435
2 425 0.4420
660 0.3044

Calculo de la concentración de Tartrazina y Erioglaucina en muestra 1

𝐴425 = 𝜀𝑏𝐶𝑇 + 𝜀𝑏𝐶𝐸
𝐴660 = 𝜀𝑏𝐶𝑇 + 𝜖𝑏𝐶𝐸
Sustituyendo los valores tenemos:
0.5570 = 0.0458𝐶𝑇 + 0.0021𝐶𝐸
0.1435 = −0.0003𝐶𝑇 + 0.0028𝐶𝐸

Resolvemos el sistema de ecuaciones:

0.5570 = 0.0458𝐶𝑇 + 0.0021𝐶𝐸 (−0.0003)

0.1435 = −0.0003𝐶𝑇 + 0.0028𝐶𝐸 (−0.0458)
Entonces tenemos que:
−1.671𝑥10−4 = −1.374𝑥10−5 𝐶𝑇 − 6.3𝑥10−7 𝐶𝐸
−6.5723𝑥10−3 = 1.374𝑥10−5 𝐶𝑇 − 1.2824𝑥10−4 𝐶𝐸
−6.5723𝑥10−3 = −1.2824𝑥10−4 𝐶𝐸
−6.5723𝑥10−3
𝐶𝐸 = = 𝟓𝟐. 𝟑𝟎 𝒑𝒑𝒎 𝒅𝒆 𝑬𝒓𝒊𝒐𝒈𝒍𝒂𝒖𝒄𝒊𝒏𝒂 𝒆𝒏 𝒎𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂 𝟏
−1.2824𝑥10−4
 0.0557 = 0.0458𝐶𝑇 + 0.0021(52.30)
0.0557 = 0.0458𝐶𝑇 + 0.10983
0.0557 − 0.10983
𝐶𝑇 = = 𝟗. 𝟕𝟔𝟒 𝒑𝒑𝒎 𝒅𝒆 𝑻𝒂𝒓𝒕𝒓𝒂𝒛𝒊𝒏𝒂 𝒆𝒏 𝒎𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂 𝟏
0.0458

Calculo de la concentración de Tartrazina y Erioglaucina en muestra 2

𝐴425 = 𝜀𝑏𝐶𝑇 + 𝜀𝑏𝐶𝐸
𝐴660 = 𝜀𝑏𝐶𝑇 + 𝜖𝑏𝐶𝐸
Sustituyendo los valores tenemos:
0.4420 = 0.0458𝐶𝑇 + 0.0021𝐶𝐸
0.3044 = −0.0003𝐶𝑇 + 0.0028𝐶𝐸

Resolvemos el sistema de ecuaciones:

0.5570 = 0.0458𝐶𝑇 + 0.0021𝐶𝐸 (−0.0003)

0.1435 = −0003𝐶𝑇 + 0.0028𝐶𝐸 (−0.0458)
Entonces tenemos que:
−1.326𝑥10−4 = −1.374𝑥10−5 𝐶𝑇 − 6.3𝑥10−7 𝐶𝐸
−0.01394152 = 1.374𝑥10−5 𝐶𝑇 − 1.2824𝑥10−4 𝐶𝐸
−0.01407412 = −1.2824𝑥10−4 𝐶𝐸
−0.01407412
𝐶𝐸 = = 𝟏𝟎𝟗. 𝟐 𝒑𝒑𝒎 𝒅𝒆 𝑬𝒓𝒊𝒐𝒈𝒍𝒂𝒖𝒄𝒊𝒏𝒂 𝒆𝒏 𝒎𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂 𝟐
−1.2824𝑥10−4

0.4420 = 0.0458𝐶𝑇 + 0.0021(109.2)

0.4420 = 0.0458𝐶𝑇 + 0.22932
0.4420 − 0.22932
𝐶𝑇 = = 𝟒. 𝟔𝟒𝟒 𝒑𝒑𝒎 𝒅𝒆 𝑻𝒂𝒓𝒕𝒓𝒂𝒛𝒊𝒏𝒂 𝒆𝒏 𝒎𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂 𝟐
0.0458
Para la muestra de Gatorade Lima Limón se obtuvo 52.30 ppm de Erioglaucina y 9.76 ppm de
Tartrazina. Y para la muestra de Powerade Mora Azul se obtuvo 109.20 ppm de Erioglaucina y
4.64 ppm de Tartrazina.
Según la NORMA Oficial Mexicana NOM-218-SSA1-2011, el límite reportado para aditivos
alimentarios es de 100 ppm. La cuantificación que se realizó está dentro del límite a excepción de
la concentración de Erioglaucina del Powerade.
Conclusiones
(Luis) En este producto integrador de aprendizaje determinamos la concentración de dos
componentes mediante una técnica espectrofotométrica de dos muestras comerciales las cuales
fueron bebidas deportivas, no todos los tipos de sustancias se pueden determinar con esta técnica
puesto que deben tener diversas características para poder determinarlos como: presentar
coloración a la radiación visible, es muy importante tener en cuenta la propiedad aditiva de la Ley
de Beer que dice que la absorbancia total de una muestra será igual a la suma de las absorbancia
de sus componentes y en base a eso se pueden determinar concentraciones de varios componentes
simultáneamente.
(Brayan) En este proyecto determinamos la concentración de dos componentes en un producto
comercial mediante la técnica espectrometrica de UV-VIS las cuales son bebidas del tipo
isotónicas, en el cual para el análisis empleamos la propiedad aditiva de la ley de Beer la cual nos
indica que se puede hacer un análisis simultaneo de componentes en una muestra siempre y cuando
los componentes cumplan la ley de Beer, por consiguiente no todas las muestras se pueden analizar
de esta manera, también se puso aprueba nuestra capacidad para emplear las técnicas analíticas en
un laboratorio con lo aprendido en los cursos anteriores.
(Valeria) Se logró cuantificar la concentración de tartrazina y erioglaucina en dos muestras
comerciales. Para esto se utilizó un equipo de espectrometría UV-Vis e hicimos uso de la Ley de
Beer para poder cuantificar la concentración de cada componente, aprovechando su propiedad
aditiva. También se compararon los resultados obtenidos con la NOM-218-SSA1-2011.