FORMATO PARA LA PRESENTACIÓN DE INFORMES SEMANALES PARA TRABAJOS

EXPERIMENTALES

GRUPO INGENIERÍA DE REACTORES Y CATÁLISIS

TÍTULO GENERAL: Desarrollo y validación del método de análisis de glucosa, fructosa y xilosa en
los productos de la hidrólisis ácida de los residuos de la planta de banano.

TÍTULO DEL TRABAJO SEMANAL: Determinación de los límites de detección del equipo.

1. INTRODUCCIÓN: Durante esta semana se trabajó en la determinación de los límites de

detección del equipo bajo ciertas condiciones, dentro de las cuales se trabajó de manera
isocratica(agua), con un volumen de inyección constante (20ul), temperaturas variables
(80-90ªC)
2. MATERIALES Y MÉTODOS
2.1 Ubicación del estudio: Este estudio se ejecuta en el laboratorio de Ingeniería de
Reactores de la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad de Cuenca, los
reactivos y equipos fueron proporcionados por el proyecto, con excepción del agua
Tipo I y los ácidos acético y sulfúrico que son provistos por la facultad .
2.2 Materiales:
2.2.1 Reactivos: Glucosa, Fructosa, Xilosa (Sigma Aldrich), Ácidos Sulfúrico y Acético
(Merck)
2.2.2 Con las Azucares anteriormente mencionadas se formó soluciones de distintas
concentraciones: 2, 4, 5, 10, 15, 20, 25 mg/ml en agua tipo II. Se preparan
disolviendo las cantidades calculadas en función del volumen de disolución.
2.2.3 Equipos e instrumentos:
 Balanza analítica precisión d=0.1mg
 HPLC (Columna para azucares Nucleogel sugar 810 Ca).
 Micro pipetas 10-100 µl
2.3 Métodos
2.3.1 Encendido y puesta a punto del HPLC.
2.3.2 Creación del método para el HPLC con las condiciones:
Fase móvil: Agua:CH3COOH 0.1 % V/V
Flujo: 0.9ml/min
Temperatura 85 ºC
Presión 25Mpa
Detección (RI)
Volumen de inyección (20ul)
Tiempo: 35min
2.3.3 Corrida de un blancos.
2.3.4 Corrida de los estándares.
2.3.5 Evaluación del cromatograma obtenido, ancho de pico, altura de pico,
resolución.
 2.4 Determinación de parámetros instrumentales y experimentales

Condiciones de Detección de HPLC

Columna 300/7.8 Nucleogel sugar 810 Ca
Fase móvil Agua/CH3COOH 0.1 % V/V
Flujo 0.9ml/min
Presión Max 25Mpa (2.6-3.2MPa promedio)
Temperatura 85°C
Tiempo 35 min
Detección RI
Volumen de inyección (muestra) 35µl
Modo Isocrático
Concentración analito 100-1500ppm

2.5 Validación de la metodología

Durante esta semana solo se trabajó con la determinación de la capacidad de detección.

3. PRESENTACIÓN Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

3.1 Determinación de los parámetros para el análisis cromatográfico.

Lo primero que se realizó es la preparación de soluciones de concentración conocida de los

diferentes azucares para determinar los límites de detección del equipo con el método planteado,
las primeras experiencias se realizaron con glucosa de concentraciones entre 100 y 1000 ppm, sin
obtener resultados positivos.

El día viernes se decide cambiar el acidificante de la fase móvil a H2SO4 para lograr una mayor
interacción entre la fase analito columna, y se corren muestras de concentraciones de 1000ppm
de glucosa y se observa un cambio significativo con respecto a los cromatrogramas antes
obtenidos, concluyéndose que el pequeño pico formado a 1000ppm con las condiciones antes
mencionadas se podría deber a la presencia de glucosa. Para verificación de lo antes supuesto se
preparan nuevas soluciones de glucosa, con concentraciones de entre 2500 y 25000 ppm y se
corren en el HPLC, obteniéndose como se supuso incrementos en el pico que se consideró glucosa,
como podemos observar en los cronogramas adjuntos.

4. CONCLUSIONES:
 Se puede concluir que la adición de un ácido fuerte a la fase móvil le otorgo una mayor
interacción a la fase analito/columna y consiguió una mejor separación, lo que generó
un pico muy pequeño en el resultado a concentraciones de 1000ppm de glucosa.
 Con las condiciones de análisis propuestas, los límites de detección del método son
relativamente altos, teniendo picos aceptables a partir de 5000ppm.
BIBLIOGRAFÍA:

de Goeij, S. (2013). Quantitative analysis methods for sugars.

Zielinski, A. A. F., Braga, C. M., Demiate, I. M., Beltrame, F. L., Nogueira, A., & Wosiacki, G.
(2014). Development and optimization of a HPLC-RI method for the determination of major sugars
in apple juice and evaluation of the effect of the ripening stage. Food Science and Technology
(Campinas), 34(1), 38-43.

Jiménez, M. E., & Sammán, N. (2014). Caracterización química y cuantificación de

fructooligosacáridos, compuestos fenólicos y actividad antirradical de tubérculos y raíces andinos
cultivados en el noroeste de Argentina. Archivos Latinoamericanos de Nutrición, 64(2), 131.

Chichoyan, N. B., Dumanyan, K. H., & Sukiasyan, L. M. http://bioscience. scientific-journal. com.

5. ANEXOS: