WHOLE BLOOD ACTIVATION RESULTS IN ALTERED T CELL AND

MONOCYTE CYTOKINE PRODUCTION PROFILES BY FLOW CYTOMETRY

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Brian E. Crucian 1 and Clarence F. Sams2

Metodología empleada para estimulación de sangre total:

Tipo de Sangre Concentración Concentración Concentración Tiempo de Monensin Medio Fijación Tinción Lisis
Células total PMA IONO LPS incubación
procesada

Sol. Perm Buffer

Linfocitos 50µl 100 ng/ml 2 µg/ml 5-24 horas 3mM RPMI PAF 200 µl + lisis
T (1ml) 4% anticuerpo
0.5 µl
24 hrs 3Mm RMPI PAF Sol. Perm Buffer
Monocitos 300 ml - -- 10 mg/ml (Después (2ml) 4% 200 µl + lisis
de las 24 anticuerpo
hrs) 0.5 µl

Resultados en linfocitos T tras la estimulación:

 La expresión de citoquinas de células T se altera tras la activación de la sangre entera.

 La activación de sangre total se comparó con la producción de citoquinas de células T después de la activación de PBMC.
Las PBMCs fueron activadas durante 5 horas en medio que contiene 10 ng /ml de PMA, 2 ug /ml de ionomicina y 3mM de
monensina, mientras que la sangre entera se activó durante 5 horas en medio que contenía 100 ng / ml de PMA, 2 μg / ml
Ionomicina y monensina 3mM. Debe observarse que 100 mg / ml de PMA son tóxicos para las PBMC en cultivo.
 Los leucocitos en cultivo de sangre entera expuestos a 10 ng/ml de PMA no se activan. El ambiente de cultivo de sangre
entera requiere mayores concentraciones de PMA.
 Para esta comparación se leyó la expresión de 2 proteínas pro inflamatorias, IFNg e IL-2 :

 Los datos mostraron que para cada donante ambas citoquinas se expresaron en porcentajes significativamente mayores de
células T (CD3+) en los cultivos de sangre completa A comparación con Los cultivos de PBMC.
WHOLE BLOOD ACTIVATION RESULTS IN ALTERED T CELL AND
MONOCYTE CYTOKINE PRODUCTION PROFILES BY FLOW CYTOMETRY
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Brian E. Crucian 1 and Clarence F. Sams2

Resultados en monocitos tras la estimulación:

 La producción IL-10 en monocitos se altera en cultivos de sangre entera. Los niveles de monocitos estimulados para secretar
IL-1a, IL-12, TNFa e IL-10 fueron promediados para todos los sujetos para evaluar las alteraciones en los patrones de
expresión de la totalidad en sangre total.
 Se encontró que la expresión media de monocitos de IL-1a, IL-12 y TNFa no se alteró entre PBMC y condiciones de cultivo
de sangre completa.
 Curiosamente, la expresión media de monocitos de IL-10 fue significativamente elevada después del cultivo de sangre total
en comparación con el cultivo de PBMC