INTEGRANTES:

 BARRETO QUISPE, Nayelly Yomira (I.Q.A)

 HUARICAPCHA DE LA SOTA, Betsy Norita (I.Q.A)
 MALLQUI CARMEN, Horfflram Anderson (I.Q.A)
 MANDUJANO HUAYTA, Yeison Rafael (I.Q.A)
 MORALES ACLARI, Yosselin Maricruz (I,Q,A)
 SALAZAR BOZA, Deysi Karina (I.Q.A)
 MÉTODOS DE ANÁLISIS DE GRASAS
EL MÉTODO DE EXTRACCIÓN SOXHLET
El método de extracción Soxhlet para la determinación de grasas y aceites es
aplicable para determinar lípidos biológicos, hidrocarburos ya sea fracciones
pesadas o relativamente polares del petróleo y cuando los niveles de grasas no
volátiles pueden alterar el límite de solubilidad del solvente. El método es
aplicable en aguas residuales o afluentes tratados que contengan estos
materiales, aunque la complejidad de la muestra puede producir resultados
desviados a causa de la falta de especificidad.
Los jabones metálicos solubles son hidrolizados por acidificación. Sólo los
aceites y las grasas sólidas o viscosas presentes se separan de la muestra
líquida por filtración sobre una matriz sólida absorbente. Después de la
extracción en un aparato soxhlet con solvente orgánico, se pesa el residuo que
queda de la evaporación del solvente para determinar el contenido en grasa y
aceite.
En la determinación de grasas y aceites no se mide una cantidad absoluta de
una sustancia específica; se determinan grupos de sustancias con
características físicas similares con base en su solubilidad en el solvente. Así, el
término "grasas y aceites" comprende cualquier material recuperado como una
sustancia soluble en el solvente (n-hexano). Esto incluye otros materiales
extraídos por el solvente de la muestra acidificada, tales como compuestos
azufrados, algunos colorantes orgánicos y clorofila, no volatilizados durante el
ensayo.
APARATOS Y REACTIVOS:
Aparatos
 Extractor Soxhlet BÜCHI B-810.
 Bomba de vacío.
 Cabina extractora de vapores orgánicos
 Balanza analítica de cuatro cifras decimales
 Horno de secado
 Rotavapor (para la recuperación del solvente)
 Desecador grande
Reactivos
 Ácido clorhídrico, HCl concentrado o Ácido sulfúrico, H2SO4 concentrado
 Hexano, C6H12, punto de ebullición 69ºC, libre de residuos.
 Suspensión para ayuda de filtración, tierra de diatomáceas, 10g/L.
Suspender 10 g de la tierra de diatomácea en 1 L de agua destilada.
 Aceite de origen vegetal o mineral.

PROCEDIMIENTO DE PREPARACIÓN DE ESTÁNDARES

Blanco
Tome 1 litro de agua destilada y acidifíquela con H2SO4 o HCl a pH< de
2(aproximadamente 2 gotas). Verificar con papel indicador.
Estándares de control
Pese 5,0 g de aceite mineral en un vaso de precipitados y disuelva con hexano.
Transfiera cuantitativamente a un balón de 50 mL y lleve a volumen con hexano,
para obtener una concentración de 100.000 mg/L. Almacene inmediatamente en
un frasco tapa rosca y refrigere en la nevera de cromatografía (- 18°C).
Estándar de 50 mg/L: Dispense de este stock 500 µL en un frasco de un litro
boca ancha utilizado para el muestreo de grasas. Lleve a la campana de
orgánicos y permita que se evapore el solvente. Adicione agua destilada hasta
el cuello y preserve con H2SO4 a pH < 2.
Estándar de 500 mg/L: Dispense de este stock 5 mL en un frasco de un litro boca
ancha utilizado para el muestreo de grasas. Lleve a la campana de orgánicos y
permita que se evapore el solvente. Adicione agua destilada hasta el cuello y
preserve con H2SO4 a pH < 2. 10.

PROCEDIMIENTO DE ANÁLISIS
Preparación del lecho filtrante
 Corte la muselina en círculos de diámetro mayor en un centímetro al del
embudo buchner a utilizar.
 Ponga en el fondo del embudo buchner el disco de muselina y sobre esta
un papel de filtro cuantitativo.
 Adhiera el papel filtro y la muselina al fondo del embudo humedeciéndolo
y presionando las orillas del papel con un agitador de vidrio limpio.
  Aplique vacío y filtre 100 mL de suspensión de ayuda (tierra de
diatomácea) y lave con abundante (100 mL) agua destilada.
 Suspenda la filtración hasta cuando no pase más agua a través del lecho
filtrante Garantizar la simetría del papel y la homogeneidad de la capa de
tierra de diatomácea.
Filtración y Extracción
 Consigne los datos en las casillas superiores del formato de captura
de datos TF 0067.
 Afore la botella demarcando el nivel de la muestra.
 Con la ayuda de la varilla de vidrio adicione poco a poco y
cuantitativamente la muestra a través del lecho filtrante evitando
pérdidas por el borde del papel.
 Filtre el blanco, estándar o muestra cuantitativamente, utilizando varilla
de vidrio para cada uno. Aplique vacío hasta cuando no pase más
agua a través del lecho filtrante.
 No permita que el nivel de la muestra supere el borde del medio
filtrante.
 Doble el filtro y transfiéralo al dedal de extracción.
 Seque el dedal con las muestras, el recipiente de la muestra y la varilla
empleada en la filtración en el horno a 103°C durante 30 minutos.
 Lleve los dedales al extractor Soxhlet.
 Pese los vasos de extracción. •
 Enjuague con solvente el recipiente que contenía la muestra y la varilla
de filtración, transfiera el enjuague al vaso de extracción para
recuperar el material graso adherido a las paredes del recipiente.
 Adicione el solvente al vaso de extracción hasta 180 mL para La
extracción (aproximadamente el 90% del volumen total del vaso de
extracción) y llévelo a la plancha de calentamiento del equipo
extractor.
 Cierre el equipo verificando que haya sellado correctamente (el vaso
no gira, ajuste el vaso al sello del soxhlet) Compruebe que la palanca
situada en la parte superior derecha del equipo está en la posición
“closed”.
  Conecte el baño de aceite, verifique que la temperatura de
calentamiento es de 110 °C y abra inmediatamente el suministro de
agua de refrigeración
 Realice la extracción durante 4 horas a partir del primer sifón que
realice el equipo. • Acabada la etapa de extracción abra la válvula de
drenaje (posición open) para la recuperación del solvente y deje secar
los vasos de extracción.
 Apague y desconecte el baño de aceite, deje el flujo de agua hasta
que el equipo se enfríe (aprox. una hora).
 Retire los vasos con la grasa obtenida en la extracción, no toque el
vaso con los guantes, emplee pinzas.
 Lleve los vasos a la cabina extractora para eliminar el solvente
residual.
 Lleve al desecador los vasos fríos durante 30 minutos.
 Determine el peso final.

PROCESAMIENTO DE DATOS Y CÁLCULO DE RESULTADOS:

El aumento en peso del vaso de extracción tarado es debido principalmente a la
grasa y el aceite, siendo el contenido de estos:

Donde;
Pf = peso final del matraz de extracción, g.
Pi = peso inicial del matraz de extracción, g.
V = Volumen de muestra, mL
(Pafin − Pvaso ) ∗ 100
%RECUPERACION =
Pesoaini

Donde: Pafin = peso vaso con grasa obtenido después de la extracción

Pvaso= Peso del vaso de extracción vacío.
Pesoaini = peso de aceite para la preparación del estándar.
 ANÁLISIS DE COMPOSICIÓN:
Los métodos han sido estandarizados según normas IUPAC, AOCS, ISO.
 Índice de Iodo
 Índice de Saponificación
Índice de iodo:
 Son los gramos de iodo absorbidos por 100 gramos de grasa o aceite.
 Constituye una medida del grado de instauración de una grasa.
Determinación:
 Pesar aprox. 0,5 g de grasa o aceite filtrados en un frasco con tapón de
vidrio de 500 ml y disolverlos en 10 ml de cloroformo.
 Pipetear 25 ml del reactivo de Hanus y añadirlos al matraz.
 Dejar en reposo exactamente 30 min en la oscuridad, con agitación
ocasional.
 El exceso de reactivo añadido no debe ser inferior al 60 %. Transcurridos
los 30 min agregar 10 ml de una solución de KI al 15 % y 100 ml de agua
destilada recientemente hervida y enfriada, arrastrando con ella cualquier
resto de iodo del tapón o cuello del frasco.
 Titular el iodo con una solución de S2O3Na2 0,1 N, con agitación
constante, hasta que se atenúe el color amarillo de la solución.
 Añadir aprox. 1 ml de una solución al 1% de almidón soluble y continuar
la titulación hasta que desaparezca el color azul casi completamente.
Cerrar bien el frasco, agitar violentamente para que el yodo remanente en
la fase inferior pase a la capa acuosa, y completar la titulación.
 Simultáneamente con la muestra problema realizar dos determinaciones
en blanco, dejando caer el reactivo de Hanus de la pipeta exactamente
durante el mismo tiempo que en la muestra problema.
 Los duplicados no deben diferir en más de dos unidades.
 La solución de almidón debe calentarse y dejar 1 min cuando rompe el
hervor.
Índice de saponificación:
 Permite determinar la cantidad total de ácidos grasos libres y combinados
en el aceite.
 A partir de dicho valor se puede estimar su peso molecular medio.
 Se define como los mg de KOH requeridos para saponificar 1g de grasa
o aceite.
 Esta técnica es aplicable a grasas y aceites vegetales y animales.
Procedimiento:
 Pesar 2g de muestra fundida en un matraz de 250ml.
 Agregar 25ml de solución alcohólica de KOH y algunas piedras de
ebullición
 Colocar el condensador de agua y dejar hervir suavemente la muestra a
reflujo durante 60min. Detener la ebullición y estando aún caliente agregar
0.5-1.0ml de fenolftaleína y titular con HCl 0.5N hasta viraje del indicador.
 Preparar un blanco con las mismas cantidades, pero sin hervir a reflujo y
valorarlo.
𝐼. 𝑆. = (56,1 𝑥 𝑁 𝑥 (𝐺0 − 𝐺)) /𝑚
Donde:
N = normalidad del HCl
G = gasto de HCl en la muestra
G0 = gasto de HCl en el blanco
m = masa de muestra en gramos (Belitz, 2009)
 GRASAS Y ACEITES EN AGUAS EXTRACCIÓN LIQUIDO-
LIQUIDO Y GRAVIMETRÍA
En este método la grasa y el aceite son extraídos del agua por íntimo contacto
con el solvente (n-hexano) y su determinación se realiza gravimétricamente
mediante recuperación del solvente en un equipo de destilación.

Se aplica para aguas residuales superficiales, domésticas e industriales. Algunas

grasas y ácidos grasos especialmente no saturados extraíbles se oxidan con
rapidez; en consecuencia, se incluyen precauciones especiales con respecto a
la temperatura y desplazamiento de vapor del disolvente para reducir este efecto.

En la determinación de grasas y aceites no se mide una cantidad absoluta de

una sustancia específica; se determinan grupos de sustancias con
características físicas similares con base en su solubilidad en el solvente (n-
hexano). Así, el término "grasas y aceites" comprende cualquier material
recuperado como una sustancia soluble en el solvente. Esto incluye otros
materiales extraídos por el solvente de la muestra acidificada, tales como
compuestos azufrados, algunos colorantes orgánicos y clorofila, no volatilizados
durante el ensayo.
Limitaciones e Interferencias
 Los solventes orgánicos tienen la habilidad de disolver no solo las grasas
y los aceites sino también otras sustancias orgánicas. Cualquier material
soluble en el solvente se reporta como grasa y aceite, por ejemplo el
azufre elemental, compuestos aromáticos complejos, hidrocarburos
derivados de cloro, nitrógeno y azufre, ciertos tintes orgánicos y la
clorofila.
 Utilizar la extracción líquido - líquido para aguas superficiales no
contaminadas o con bajo contenido de sólidos suspendidos, factores que
aumentan la formación de emulsiones y pérdida del analito.
 Algunas matrices de las muestras pueden formar emulsiones,
incrementando la cantidad de agua a separar dentro del extracto. Cuando
el extracto del solvente es tratado con sulfato de sodio, este se disuelve
en el agua y pasa al frasco tarado.
 Esto se manifiesta cuando después de secado el solvente se hace visible
sal dentro del vaso de extracción. Si se observan cristales en el frasco
tarado después del secado, redisolver la grasa y aceite con 30 mL de
solvente de extracción y un poco de agua en un embudo de separación,
retirar la capa acuosa y drenar el solvente a través de un embudo con
papel filtro empapado con solvente a un vaso de extracción limpio y
tarado. Tratar este como un extracto de muestra.
 La eliminación del solvente tiene como resultado la pérdida de los
hidrocarburos de cadena corta y aromática sencillos por volatilización.
 En este proceso se pierden cantidades significativas de destilado de
petróleo desde la gasolina hasta el aceite combustible.
 El método es completamente empírico y solo se pueden obtener
resultados duplicados si se siguen de manera estricta todos los detalles.
 El tiempo requerido para secar y enfriar el material extraído no puede ser
alterada.
 Puede que haya un incremento gradual en el peso, debido
presumiblemente a la absorción de oxígeno, y/o una pérdida gradual de
peso debida a la volatilización.
 Los residuos más pesados del petróleo pueden contener una porción
significativa de materiales que no son extraíbles con el solvente
Toma y Preservación de la Muestra
 Para aguas de tipo industrial la toma de muestra se debe realizar puntual.
 La tapa debe estar provista de una lámina de papel aluminio que impida
el contacto de la muestra con el interior de la tapa. La tapa debe estar
provista de una lámina de papel aluminio que impida el contacto de la
muestra con el interior de la tapa
 La muestra se debe tomar en frasco de vidrio claro de boca ancha con
capacidad máxima de un litro, previamente calibrado y evitando subdividir
la muestra en el laboratorio. Si la botella no está calibrada, demarque el
nivel en el frasco para posterior determinación del volumen de muestra.
 El frasco debe estar previamente enjuagado con el solvente para remover
cualquier película de detergente.
  Adicione a las muestras HCl o H2SO4 concentrado hasta pH< 2, con el fin
de romper las emulsiones e hidrolizar los jabones y detergentes, los
cuales pierden su componente polar y revierten a una estructura
hidrocarbonada que es incluida en la determinación. Verifique el pH con
papel indicador y acidifique la muestra en la botella.
 Cuando se requiere información acerca del promedio de concentración de
grasas y aceites sobre un periodo de tiempo extenso, analizar porciones
individuales tomadas a intervalos de tiempo predeterminados, esta
muestra no se puede componer.
 La muestra preservada se puede almacenar durante un periodo máximo
de 28 días a una temperatura de 4°C.

APARATOS, REACTIVOS Y MATERIALES

Aparatos
 Extractor Soxhlet BÜCHI B-810 empleado en la posición para
recuperación de solventes como indica el manual del equipo.
 Cabina extractora de vapores orgánicos
 Balanza analítica de cuatro cifras decimales
 Desecador Grande

Reactivos
 Ácido clorhídrico, HCl concentrado.
 Ácido sulfúrico, H2SO4 concentrado
 Hexano, C6H12, punto de ebullición 69ºC, libre de residuos.
 Aceite de origen vegetal o mineral.
 Sulfato de sodio, Na2SO4, cristal anhidro R.A.
Materiales
 Embudos de separación de (1) o (2) litros con llave de paso de PTEF.
 Embudo de vidrio de vástago largo.
 Papel filtro cuantitativo de 11 cm de diámetro.(Whatman No. 40 o
equivalente) Soporte para embudo
 Frasco lavador.
 Vasos de precipitado de 50 mL • Varillas de vidrio.
 PROCEDIMIENTO DE PREPARACIÓN DE ESTÁNDARES
Blanco
Tome 1 litro de agua destilada y acidifíquela con H2SO4 o HCl a pH < 2
(aproximadamente 2 gotas). Verificar con papel indicador.
Estándares de control
Pese 5,0 g de aceite mineral en un vaso de precipitados y disuelva con hexano.
Transfiera cuantitativamente a un balón de 50 mL y lleve a volumen con hexano,
para obtener una concentración de 100.000 mg/L. Almacene inmediatamente en
un frasco tapa rosca y refrigere en la nevera de cromatografía (- 18°C).

Estándar de 50 mg/L: Dispense del stock 500 µL en un frasco de un litro boca

ancha utilizado para el muestreo de grasas. Lleve a la campana de orgánicos y
permita que se evapore el solvente. Adicione agua destilada hasta el cuello y
preserve con H2SO4 a pH<2.
Estándar de 500 mg/L: Dispense del stock 5 mL en un frasco de un litro boca
ancha utilizado para el muestreo de grasas. Lleve a la campana de orgánicos y
permita que se evapore el solvente. Adicione agua destilada hasta el cuello y
preserve con H2SO4 a pH<2.

PROCEDIMIENTO DE ANÁLISIS
 Consigne los datos de las casillas superiores del formato de captura de
datos FT0067.
 Afore la botella demarcando el nivel de la muestra.
 Transfiera cuantitativamente el blanco, los estándares y las muestras a
embudos de separación. Enjuague cuidadosamente las paredes del vaso
con aproximadamente 30 mL de solvente y adicione el enjuague al
embudo de separación.
 Agite vigorosamente el embudo de separación durante 2 minutos. Durante
la agitación libere presión constantemente invirtiendo el embudo y
abriendo la llave.
 Si se sospecha que se formará una emulsión estable (si la muestra posee
sólidos suspendidos o sólidos sedimentables), agitar con suavidad
durante 5 a 10 minutos.
 Si se presenta la formación de emulsiones adicione 10 g de Na 2SO4
anhidro al filtro y drene el extracto emulsionado. Adicione mayor cantidad
de sulfato de sodio anhidro para romper la emulsión.
 Deje separar las fases. Drene el extracto orgánico a través de un embudo
de filtración con papel de filtro humedecido en el solvente de análisis y
sulfato de sodio anhidro en el fondo del papel (3 - 5 gramos)
 Retorne la capa acuosa nuevamente al recipiente de origen.
 Recoja el filtrado en el vaso de extracción limpio y seco, desecado una
hora y pesado previamente.
 Retorne la muestra al embudo de separación inicial y repita el proceso de
extracción 2 veces más.
 Drene el extracto final a través de un embudo de filtración con papel filtro
y recoja el filtrado en el vaso de extracción limpio y tarado.
 Si se presenta la formación de emulsiones en el extracto final adiciónele
10 g de Na2SO4 al filtro y drene el extracto y la emulsión. Adicione más
Na2SO4 si es necesario para romper las emulsiones.
 Lave el papel filtro con 10 a 20 mL de solvente.
 Recupere el solvente destilando el extracto contenido en el vaso con la
ayuda del equipo de extracción BÜCHI B-810 abriendo la válvula de
drenaje solvente. Destilar hasta secado total. (Consulte el instructivo de
manejo del equipo)
 Deje enfriar el vaso en la cabina de extracción para eliminar el solvente
residual. Lleve el vaso al desecador durante 30 minutos.
 Pese el vaso con el residuo seco.
 Mida el volumen de muestra marcado en la botella inicialmente y consigne
en el formato de captura de datos TF 0067. Los volúmenes para el blanco
y estándar son de 1000 m.
 PROCESAMIENTO DE DATOS Y CÁLCULO DE RESULTADOS
El aumento en peso del vaso de extracción tarado es debido principalmente a la
grasa y el aceite, siendo el contenido de estos:
(Pf − Pi )
GYA, mg/L =
V
Donde;
Pf = peso final del matraz de extracción, mg.
Pi = peso inicial del matraz de extracción, mg.
V = Volumen de muestra, L
(Pafin − Pvaso ) ∗ 100
%RECUPERACI ON =
Pesoaini

Pafin = peso vaso con grasa obtenido después de la extracción

Pvaso= Peso del vaso de extracción vacío.
Pesoaini = peso de aceite para la preparación del estándar. (ROCIO DEL PILAR
BOJACA, 2007) (ANA MARIA HERNANDEZ, 2007)
 MÉTODO NORMALIZADO PARA LA DETERMINACION DE LA
RIQUEZA EN MATERIA GRASA DEL QUESO POR EL
PROCEDIMIENTO SCHMID-BONDZYNSKI-RATZLAPF
Por riqueza en materia grasa se entiende la cantidad total de lípidos y de
sustancias lipoides expresada en porcentaje ponderal que se obtiene por el
método de Schmid - Bondzynski.
Análisis
Aparatos, material y elementos auxiliares
 Balanza analítica, sensibilidad 0,1 mg.
 Centrifugadora de tipo apropiado para colocar los tubos de extracción o
matraces, y capaz do mantener una velocidad de 500-600 revoluciones
por minuto.
 Estufa do desecación que permita obtener una temperatura constante
hasta de 110 C., o estufa do desecación al vacío,
 Matraces Erlenmeyer o matraces de fondo plano con capacidad de 150-
250 ml. sobro los cuales sea posible indicar do una manera permanente
o semipermanente el número de referencia de la muestra.
 Baño do María con soporte.
 Sustancia para facilitar la ebullición, exenta do grasas que no se
desintegre.
 Eventualmente, láminas do material plástico, sin lustrar, solubles en ácido
clorhídrico, de un espesor de 0,03-0,05 mm. y unas dimensiones de 5, x
7,5 cm., aproximadamente. Estas láminas do material plástico no deberán
influir en el resultado del análisis.
 Aparatos apropiados para la extracción (tubos o matraces) con tapones
herméticos de corcho o de neopreno.

Reactivos
 Ácido clorhídrico al 25%, aproximadamente (densidad 1,125/15 C.) Si se
utilizan concentraciones notablemente superiores redúzcase
proporcionalmente.
 Alcohol etílico, al 9'6 por ciento en volumen (mas o menos 1 volumen por
ciento).
  Eter etílico, punto de ebullición 34-35º C., libre de peróxido.
 Éter de petróleo, punto de ebullición 40-60 C. En lugar do alcohol etílico
puro, se puede también emplear alcohol etílico desnaturalizado con
alcohol metílico o con benceno. Los reactivos utilizados no deben dejar
ningún residuo después de la evaporación.
 Con el fin de controlar los reactivos, sorá preciso efectuar un análisis en
blanco siguiendo exactamente la misma forma do operar. En el cálculo
del resultado del análisis habrá que tener en cuenta el valor obtenido en
la prueba en blanco.

Preparación de la muestra
Antes do efectuar el análisis, se deberá retirar la corteza, capa o superficie
mohosa que recubre el queso, de forma quo se obtenga una muestra
representativa del mismo tal como se consumo normalmente. La muestra deberá
sor triturada con ayuda do cualquier aparato apropiado que pueda limpiarse
fácilmente de modo que no exista posibilidad de mezcla entre una muestra y
otra. La muestra deberá mezclarse cuidadosamente conservándose después en
un recipiente hermético hasta su análisis, el cual deberá sor efectuado a ser
posible en el mismo día. Si el retraso de esta operación es inevitable se tomarán
precauciones para asegurar la buena conservación de la muestra.

Forma de operar
 Pésense con precisión alrededor de 3 gramos de la muestra preparada
do queso, ya sea directamente sobre el aparato de extracción, ya en un
vaso do precipitado o en un Erlenmeyer de 100 ml. El peso puede
efectuarse también sobre una lámina do material plastico que se plegará
o introducirá en la vasija utilizada.
 Añádanse de 8 a 10 ml. do ácido clorhídrico (según la forma del aparato
de extracción utilizado) a la vez que se agita la vasija suavemente en un
baño de agua hirviendo o a la llama, hasta que el queso esté
completamante disuelto.
 Manténgase el recipiente durante 20 minutes en el baño de agua hirviendo
y después enfríese en agua corriente.
 Si la disolución del queso se ha efectuado en un recipiente distinto del
aparato do extracción, transvásese el contenido del recipiente a este
aparato. Enjuáguese el recipiente sucesivamente con 10 ml. de alcohol
etílico, 25 ml. de éter etílico y 25 ml. de éter de petróleo, vertiendo cada
voz el disolvente en el aparato de extracción.
 Si la disolución del queso se ha efectuado en el propio aparato de
extracción enfríese y añádanse 10 ml. de alcohol etílico, ciérrese el
aparato do extracción con un tapón de corcho humedecido o con un tapón
de un material apropiado y mézclese el contenido agitándolo
energicamente.
 Añádanse 25 ml. de éter etílico y después de cerrar el aparato de
extracción, mézclese el contenido perfectamente por agitación energica e
inversión repetidas durante un minuto,
 Añádanse 25 ml. de éter de petrólee, ciérrese el aparato de extracción y
mézclese el contenido agitándolo con cuidado para evitar la formación de
emulsión. (Cuando se utilice una centrifugadora, tal precaución no es
necesaria.).
 Déjese repesar el aparato de extracción o centrifúguese (durante un
tiempo no inferior a un minuto a 500-600 r.p.m.) hasta que la capa éter-
éter de petróleo esté completamente límpiela y totalmente separada do la
capa acuosa.
 Transvásese lo más completamente posible la capa éter-éter do petróleo
por decantación o con ayuda de un sifón a presión (teniendo cuidado, sin
embargo, de no arrastrar nada de la capa acuosa) a un matraz Erlenmeyer
o a un matraz de fondo plano que contenga una sustancia que facilito la
ebullición; a continuación enjuáguense el tapón del aparato do extracción
y el sifón de presión con algunos mililitros do éter etílico.
 Repítase la extracción otras dos veces, utilizando en cada una de ollas 25
ml. de éter etílico y do éter de petróleo siguiendo el procedimiento descrito
en 4.6 y 4.7. Cuando se trate do matraces de extracción Mojonnier,
añádase alcohol para la segunda extracción y agua para la tercera, con el
fin de que la solución acuosa tenga el nivel debido.
  Evapórense cuidadosamente los disolventes contenidos en el matraz.
 Deséquese la materia grasa, bien en la estufa de vacío durante una hora
a 70-75º C. (presión inferior a 50 mm. de mercurio) o en la estufa de
desecación a presión normal y a la temperatura do 100-105 C. El proceso
de desecación puede acelerarse si después de la evaporación de los
disolventes se eliminan con precaución los vapores todavía presentes en
el matraz sirviéndose do una ligera corriente do aire y si el matraz se
mantiene en posición horizontal.
 Déjese enfriar el matraz y pésese tan pronto como haya adquirido la
temperatura ambiento utilizando como contrapeso un matraz testigo
tratado en forma idéntica.
 Continúese el proceso do desecación efectuando posadas do hora en
hora hasta peso constante o hasta que el peso aumente ligeramente. en
este último caso, tómese para el cálculo el último valor obtenido antes del
aumento de poso. Elimínese la materia grasa del matraz mediante tres
lavados sucesivos con éter de petróleo, El objeto de esta operación es
eliminar todo error debido al arrastre do materias no grasas durante la
extracción. Pésese el matraz una vez eliminados los disolventes.

Exactitud del método

Los resultados de dos determinaciones paralelas no deben diferir en más de
0,2g. de materia grasa por 100 g. del producto. (FAO, 2007)
 MÉTODO ROSE-GOTTLIEB (JAMES, 1999)
Colocar a peso constante un matraz bola de fondo plano con perlas o piedras de
ebullición en la estufa a 100ºC, aproximadamente 1 h.

PRE-TRATAMIENTO A LA MUESTRA
 Leche. Pesar 10-11g de muestra en un tubo Rose Gottlieb. Adicionar 1
mL de hidróxido de amonio 0.88 y mezclar. Dejar reposar toda la noche a
temperatura ambiente.
 Leche en polvo. Pesar 1g de muestra en un tubo de extracción Rose
Glottlieb. Adicionar cuidadosamente 9 mL de agua y mezclar hasta que
desaparezcan los grumos. Adicionar 1 mL de hidróxido de amonio 0.88 y
mezclar. Dejar reposar toda la noche a temperatura ambiente.
 Crema. Pesar 2g de muestra eb un tubo de extracción Rose-Gottlieb.
Adicionar 8 mL de una solución de cloruro de sodio 0.5% (m/v). Adicionar
1 mL de hidróxido de amonio 0.88 y mezclar. Dejar reposar toda la noche
a temperatura ambiente.
 Yogurts, helado y toffes. Pesar 4 g de muestra en un tubo Rose-Gottlieb.
Adicionar 6 mL de agua a 60°C, agitar hasta dispersar la muestra.
Adicionar 1.5mL de hidróxido de aminio 0.88 y mezclar. Dejar reposar toda
la noche a temperatura ambiente.
Extracción de grasa
 Adicionar 10 mL de etanol, mezclar y enfriar.
 Adicionar 15 mL de éter etílico, tapar el tubo y agitar por un minuto.
 Enfriar, adicionar 15 mL de éter de petróleo y agitar por un minuto.
 Dejar reposar por 30-60 min o hasta que la capa etérea esté
completamente separada.
 Quitar el tapón, enjuagarlo y el cuello del matraz con 5 mL de una mezcla
de éter etílico:éter de petróleo (1:1).
 Insertar el tubo sifón, recuperar el solvente en el matraz bola a peso
constante, enjuagar el tubo sifón con solvente recuperando este en el
matraz.
 Repetir la extracción y lavados 2 veces.
 Eliminar el solvente en el rotavapor, secar el matraz por 1h a 100°C y
pesar.
 Calcular el contenido de grasa.

MÉTODO DE ROSE GOTTLIEB- MÉTODO DE REFERENCIA.

Aplicaciones: Leche, leche semidescremada, leche en polvo; Leche

condensada azucarada y sin azucarar; Nata y nata batida; Lactosuero.

Reactivos
 Solución de NaCl 0,5% p/v
 NH4OH (densidad 0.91)
 Etanol 96°
 Eter dietílico: intervalo de ebullición 30-60°C
 Eter de petróleo: intervalo de ebullición 30-60°C

Determinación

Se seca un matraz Erlenmeyer con boca esmerilada de 200 ml con algunas

perlas de vidrio durante 1h a 103 +/- 2°C, e coloca en desecador y se pesa con
una precisión de +/- 1mg.
La muestra se pesa también al mg, de acuerdo a los valores recomendado en la
tabla, en el tubo de extracción de Mojonnier, diluyéndose con agua destilada si
fuera necesario hasta un volumen de 10 ml (en el caso de la nata debe utilizare
la solución de NaCl) y se agita hasta que el producto se haya dispersado
totalmente (para la leche en polvo es conveniente calentar el tubo de extracción
y su contenido durante 15 minutos en un baño de agua a 60-70°C agitando
ocasionalmente). A continuación se añaden 2 ml de amoníaco, se mezcla y tras
enfriar se añaden 10ml de etanol. Después de añadir 25 ml de éter dietílico, se
tapa el tubo de extracción y se agita durante 1 minuto invirtiéndolo sujetando el
tapón. Finalmente se añaden 25 ml de éter de petróleo y se vuelve a agitar
durante 30 segundos. Una vez que las fases se han separado completamente,
lo que sucede después de dejar reposar el tubo de extracción o centrifugándolo
durante 5 minutos a 500-600 r.p.m., se pasa tanta fase orgánica (superior) como
sea posible al erlenmeyer previamente pesado. Se repite una segunda vez la
extracción del residuo acuoso con otros 15 ml de éter dietílico y éter de petróleo
como se detalló más arriba. A continuación se reúnen las fase orgánicas, se
destilan los solventes (también el etanol) y se seca el residuo que queda en el
matraz erlenmeyer durante 1h a 103 +/- 2°C. Se enfría en desecador y se pesa
con una precisión de +/- 1mg. El secado se repite hasta obtener peso constante.
Pesos recomendados de muestra
Producto lácteo Peso en gramos
Leche entera en polvo 1-1.1
Leche descremada en polvo 1,5-1.6
Nata, nata batida 2-3
Leche condensada azucarada 3-3.5
Leche condensada sin 4-5
azucarar
Leche entera, leche desnatada 10-11
Cálculo

G [%]= [(m2-m1) . 100]/M

m1: masa en gramos del matraz erlenmeyer con las perlas.
m2: masa en gramos del matraz erlenmeyer con las perlas con grasa tras el
secado
M: peso de la muestra en gramos
Nota: Es conveniente realizar un ensayo en blanco sustituyendo la muestra por
10 ml de agua destilada. (DEPARTAMENTO DE ALIMENTOS Y
BIOTECNOLOGIA FACULTAD DE QUÍMICA, UNAM , 2008)
 BIBLIOGRAFIA

ANA MARIA HERNANDEZ, R. D. (28 de 12 de 2007). GRASAS Y ACEITES EN

AGUA EXTRACCIÓN LIQUIDO - LIQUIDO Y GRAVIMETRIA. Instituto de
Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales Ministerio de Ambiente,
Vivienda y Desarrollo Territorial – República de Colombia, 1-8.
Belitz, H. G. (2009). Edible fats and oils. . Food Chemistry, 640-669.
DEPARTAMENTO DE ALIMENTOS Y BIOTECNOLOGIA FACULTAD DE
QUÍMICA, UNAM . (2008). FUNDAMENTOS Y TECNICAS DE ANALISIS
DE ALIMENTOS. Mexico .
FAO. (15 de 10 de 2007). Informe del cuarto periodo de sesiones del comite de
expertos guvernamentales sobre el codigo de principios referente a la
leche y los productos lacteos. Obtenido de Food and Agriculture
Organization:
http://www.fao.org/tempref/codex/Meetings/CGECPMMP/Cgecpmmp4/cx
61_4s.pdf
ROCIO DEL PILAR BOJACA, A. M. (28 de 12 de 2007). DETERMINACIÓN DE
GRASAS Y ACEITES EN AGUAS POR EL METODO SOXHLET. Instituto
de Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales Ministerio de
Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial – República de Colombia, 2, 1-
8.