INTRODUCCIÓN

Un hito en la historia cuprífera se comenzó a gestar en 1947, con el descubrimiento de un

microorganismo presente en las aguas de drenaje de una mina de carbón española donde se
oxidaba fierro y azufre. Esta era la Thiobacillus ferrooxidans, bacteria que forma parte del
proceso de obtención del oro y cobre. Una vez descubierta, se determinó que era la
responsable de la oxidación de los minerales sulfurados que contenían el metal rojo,
acelerando su lixiviación desde minerales de baja ley, los que tradicionalmente eran
sometidos a procesos más largos, costosos y contaminantes. Las bacterias liberan fuerzas
químicas y biológicas que se refuerzan en un plan común que explota la biotecnología:
degradar los sulfuros a formas solubles, a velocidades de medio a un millón de veces más
rápidas que si estuvieran expuestos al aire y al agua en ausencia de bacterias. ¿QUÉ ES LO
QUE HACEN? Estas bacterias oxidan algunas formas reducidas de azufre y hierro contenidos
en los minerales, simplemente porque de esa reacción obtienen la energía necesaria para su
reproducción y crecimiento. Adicionalmente requieren oxígeno y dióxido de carbono, los que
obtienen del aire, y otros nutrientes necesarios para su crecimiento, como pequeñas
cantidades de nitrógeno y fósforo. ¿PARA QUE SE HACE? A consecuencia de sus
propiedades metabólicas resultan fuerzas químicas y biológicas que se refuerzan en un plan
común que explota la biotecnología: degradar los sulfuros metálicos a formas solubles, a
velocidades de a lo menos medio a un millón de veces más rápidas que si estos minerales
estuvieran expuestos al aire y al agua en ausencia de bacterias. ¿CON QUE TIPO DE
MINERAL SE REALIZA? Antes de explicar el proceso de extracción se debe aclarar que el
cobre es un metal que no existe en estado puro, sino que está combinado en una gran
variedad de minerales los que se dividen en tres clases: en la primera categoría están los
óxidos que se disuelven muy fácilmente en un ácido suave, permitiendo una rápida extracción
del cobre; en segundo lugar están los sulfuros secundarios, como la Calcocina y la Covelina,
que sólo se disuelven por oxidación mediante el uso de un ácido muy fuerte y un agente
oxidante; y finalmente están los sulfuros primarios, minerales insolubles o muy lentamente
solubles en el tratamiento ácido, que por lo anterior no se lixivian sino que son tratados
mediante Pirometalurgia. ¿COMO SE TRABAJA EL MINERAL? El mineral se trabaja en
pilas mediante la cual el mineral está dispuesto en un lecho de dos, tres o seis metros de
altura, y que posteriormente es regado con ácido, esta innovación fue una parte clave para el
desarrollo de la aplicación industrial controlada de la lixiviación bacteriana, ya que el mineral
no está inundado como en las piscinas, sino que hay aire y solución lixiviante que permite el
crecimiento bacteriano.

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1. Objetivos:

 Realizar el estudio morfo-fisiologico y genéticos de proteobacteria Acidithiobacillus sp.

 Realizar el estudio de estas bacterias que tienen la capacidad de obtener energía a
partir de la oxidación de compuestos de azufre reducido.
 Conocer las aplicaciones industriales de Acidithiobacillus sp en el manejo y obtención
de minerales en la industria minera.

 La primera bacteria identificada capaz de lixiviar fue Acidithiobacillus ferrooxidans.

 Fue en 1947 en el drenaje de unas minas de carbón ( España), por Colmer y
Hinkle, cuando se descubrió que era la responsable del gran deterioro que sufrían los
equipos metálicos en las instalaciones de una mina española debido a su capacidad
de oxidar el azufre y el hierro

Figura 1

Clasificación: Especies
Dominio: Bacterias - Acidithiobacillus albertensis
Reino: Eubacteria - Acidithiobacillus caldus
Filo: Proteobacteria - Acidithiobacillus cuprithermicus
Clase: Gammaproteobacteria - Acidithiobacillus ferridurans
Orden: acidithiobacillales - Acidithiobacillus ferrivorans
Familia: Acidithiobacillaceae - Acidithiobacillus ferrooxidans
Género: Acidithiobacillus - Acidithiobacillus thiooxidans

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 Acidithiobacillus ferrooxidans. Vive en depósitos de pirita, metabolizando hierro y
azufre y produciendo ácido sulfúrico.
 Acidithiobacillus thiooxidans. Consume azufre y produce ácido sulfúrico. Fue
descubierta debido a daños en cañerías de cloacas conteniendo ácido sulfhídrico.
 Acidithiobacillus caldus. También puede crecer mixotróficamente que utilizan azufre
elemental, tetrationato y el hierro ferroso como donadores de electrones. El género
comprende células móviles, en forma de varilla que se pueden aislar a partir de entornos
de pH bajo, incluyendo microambientes de pH bajo sobre granos minerales de otro modo
neutros.

Marcasita Pirita

Oxidación de los sulfuros. La bacteria es capaz de oxidar los siguientes sulfuros

 Pirita y Marcasita (FeS2)

 Pirrotita (FeS)
 Chalcopirita (CuFeS2)
 Bornita (Su,FeS4)
 Covelita (Cu2S)
 Tetrahedrita (Cu8SB2S7)
 Enargita (3Cu2,S.AS2S5)
 Arsenopirita (FeAsS)

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2. Características: (Acidithiobacillus sp)

 son incoloros, en forma de bastón, Gram-negativas con flagelos polares.

 Son bacterias estrictamente aeróbico.
 Aproximadamente de 0.5u de ancho por 1.0u de largo.
 Acidofilo: desarrolla a valores de pH en un rango entre 1.5-3.0. siendo el óptimo 2.0
 Son organismos autótrofos obligados, lo que significa que requieren moléculas
inorgánicas como donante de electrones y el carbono inorgánico (como el dióxido de
carbono) como fuente.
 Obtienen nutrientes por la oxidación del hierro y el azufre con O2. No forman esporas,
Su ciclo de vida es típica de las bacterias.
 Desarrolla a temperaturas entre 30°C a 45°C, estando el optimo entre 35 y 40°C.
+2
 Oxida compuestos de Fe y S reducido.

3. Aspectos morfológicos

Acidithiobacillus al igual que gran parte de las bacterias biomineras, es capaz de

adherirse sobre superficies naturales de distintos minerales o sobre superficies
artificiales como resinas hidrofóbicas o de intercambio de iones. Además, forma
biopelículas en monocapas, lo cual es característico en esta bacteria. Esta biopelícula
ocurre en una serie de pasos bien organizados:

1. se genera la adherencia de la bacteria sobre la superficie, seguido de la multiplicación

celular.

2. La formación de microcolonias que secretan sustancias polimétricas extracelulares

“SPE” (compuestas por un conglomerado polimérico generalmente formado por ADN
extracelular, proteínas y polisacáridos Estas “SPE” en conjunto desarrollan una
estructura con pequeños canales acuosos que facilitan la comunicación entre las

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 células y el transporte de nutrientes y desechos. Esto último favorece la formación de
biopelículas, las cuales se pueden desarrollar sobre superficies vivas, como un tejido
celular, o no vivas como la superficie de un mineral) son capaces de organizarse para
formar una comunidad.

3. Algunas células abandonan la microcolonia y se adhieren en otra superficie no

colonizada. La adherencia de esta bacteria depende de la presencia de una matriz
adhesiva compuesta por “SPE” que presentan una estructura basada en polisacáridos,
ácido urónico y lípidos.

Figura 2.- Thiobacillus ferrooxidans

4. Fisiológicas:

Los microorganismos presentes en los procesos de biolixiviación tienen un rol catalítico

en la oxidación del ion ferroso (Fe+2) y del azufre elemental producidos durante la
lixiviación química, a ion férrico (Fe+3) e ion sulfato, respectivamente (Ecuación 1 y 2).
Los iones férricos corresponden a los agentes químicos oxidantes que disolverán el
sulfuro metálico.

Los fundamentos bioquímicos de las reacciones de lixiviación han sido ampliamente

estudiados en los últimos años, habiéndose propuesto 2 mecanismos para estos
procesos:

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a). lixiviación indirecta.

 Ocurre inmediatamente después de sucedido el mecanismo directo.

 El A. ferrooxidans al encontrar ion ferroso (Fe+2) es capaz de oxidarlo y convertirlo en
ion férrico (Fe+3), este a su vez realiza el mismo trabajo que el A. ferrooxidans
(mecanismo directo) de forma natural pero más lento.

 Fe+2 + 1/2O + 2H → 2Fe+3 +H2O…… La reacción es acelerada

 2Fe+3 + CuS → M+2 + Fe+2 + S°……En forma consecuente ( lento)

(Sulfuro de cobre) Cu+2
Esta lixiviación indirecta puede no sólo
ser utilizada en la metalurgia del cobre
sino que también en la extracción de
minerales de uranio U02, de estaño,
de antimonio e incluso para disolver
piritas que contienen oro

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b) lixiviación directa

 La bacteria esta e contacto directo con la superficie del mineral, promoviendo la

oxidación del azufre de los sulfuros metálicos a sulfatos. La oxidación proporciona la
energía para el crecimiento de las bacterias.
 Las bacterias entran en contacto con el mineral por medio de los exopolimeros (Las
biopelículas son organizaciones microbianas compuestas por microorganismos que se
adhieren a las superficies gracias a la secreción de un exopolímero.)
 Los exopolimeros reaccionan con la superficie del mineral.
 Luego finalizada la degradación la pirita es separada en ion ferroso y ácido sulfúrico.
 Y el mineral el liberado

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  Oxidación directa del sulfuro:
MS +2O2 → MSO4 + S°

 Oxidación del azufre residual:

2S + 3O2 + 2H2O→2H2SO4

5. Bacterias oxidadoras del azufre

 Donadores de electrones: H2S, S°,S2O23

 Producto final de la oxidación: SO2-4
 La oxidación del H2S ocurre por etapas

Primero: Produce S°, que algunas bacterias lo depositan en forma de gránulos de

reserva energética.

Segundo: cuando se agtan las fuentes externas de H2S, utilizan este azufre
elemental almacenado

Tercero: en aquellas situaciones donde el azufre elemental está disponible mediante

fuentes exógenas, el organismo crece adherido a partículas de azufre, dada la alta
insolubilidad del S° los productos de azufre mensionados, hacen que aunmente la
concentacion de protones por lo que reduce el PH y acidifica el medio. El ácido
formado es el ácido sulfúrico H2SO4.

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  Presentan gran importancia biotecnológica y ecológica, ejemplo de ello puede ser la
biominería o la biolixiviación de minerales como el uranio y el cobre. (Los metales se
liberan del mineral por solubilización con el ácido sulfúrico derivado de la oxidación del
azufre en la membrana de las bacterias oxidadoras del azufre como Acidithiobacillus).
 Participan también en la desulfuración del carbón ayudando a separar el azufre
inorgánico de éste. Lo transforman en un compuesto soluble en agua para evitar que
en la combustión se produzca SO2, un gas contaminante, que en la atmósfera da
lugar a lluvia ácida.

6. BACTERIAS OXIDADORAS DE HIERRO POR QUIMILITOTROFOS AEROBIOS

 El paso de Fe2+ a Fe3+, sin embargo, a pH neutro y en presencia de O2, el Fe2+

reacciona químicamente (sin intervención bacteriana), transformándose en Fe3+. De
ahí que la mayoría de bacterias del hierro sean acidófilas.
 Cadena respiratoria, oxidación de hierro ferroso (Thiobacillus ferrooxidans)
 La elevada electro positividad del potencial de reducción del par Fe3+/Fe2+ (+0.77 V a
pH ácido 2), hace que la vía de transporte de e- hacia el O2 será muy corta,
presentando sólo 2 cyt.
 Pese a que exista un gradiente natural en el paso de H+ del medio exterior al interno a
través de las ATPasas, dichos H+ han de consumirse rápidamente en la formación de
H2O a partir de O2, para mantener el pH interno bacteriano entre 6.5 - 7.

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  Estas bacterias, gastan la mayor parte del ATP producido en las reacciones del
transporte inverso del e- para obtener el poder reductor necesario en la fijación de
CO2 (de ahí su autotrófica).

7. Bioquímica Bacterias de las Bacterias oxidantes del hierro y del azufre

CARACTERISTICAS Bacterias Oxidantes del Hierro

 Usan el hierro reducido como única fuente de energía

 Algunos son capaces de usar también azufre: Acidithiobacillus ferrooxidans.
 pH neutro: Gallionella ferruginea, Leptothrix ochracea, Sphaeritillus natans.
 pH acido: Acidithiobacillus ferrooxidans
 Bacilos Gram negativos o filamentosos Acidithiobacillus ferrooxidans Gallionella
ferruginea

CARACTERISTICAS Bacterias Oxidantes del Azufre

 Usan compuestos reducidos de azufre como fuente de energía : HS-, S°, S2O3 2−
 pH neutro o alcalino: Thioalkalispira sp. Thioalkalivibrio sp. Thioalkalimicrobium sp.
 pH acido: Sulfobacillus thermotolerans, Acidithiobacillus sp., Beggiatoa, Sulfolobus
 Gránulos de azufre: Beggiatoa sp., Thiothrix sp., Thioploca sp.
 Bacilos Gram negativos, algunos Gram positivos (Sulfobacillus)
 Filamentosos Thioalkalivibrio sp. Beggiatoa sp. Sulfolobus sp.

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8. CONDICIONES ESPECIFICAS PARA EL DESARROLLO DE T. ferrooxidans

 PH: 1.5 - 2.5 Normalmente los Thiobacilllus se desarrollan en pH ácidos. El ph define

que especie de bacteria se desarrollan en el medio.
 O2: Debido a que es un microorganismo aerobio estricto, se requiere la presencia de
oxígeno que es utilizado como oxidante por los microorganismos en ambientes de
lixiviacion.
 CO2: Thiobacillus ferrooxidans utiliza el CO2 como fuente de carbono, para la
fabricación de su arquitectura celular o generación de biomasa.
 H2O
 Otros Nutrientes: Se requiere de fuentes de Nitrógeno, Fósforo, Azufre e iones
metálicos como el Magnesio.
 Fuente de Energía: Se utilizan como fuente de energía los iones ferrosos y azufre
inorgánico. En la lixiviación de mineral el ion ferroso (Fe+2) es producido
biológicamente y por ello no es necesario añadirlo.
 Luz: Al ser organismos Quimio autótrofos, la Luz no suele ser necesaria, al contrario…
Algunos rayos visibles suelen inhibir algunas especies de Thiobacillus, pero el ion
férrico ofrece una protección contra los rayos visibles.
 Temperatura: Como la mayoría de las bacterias, suele crecer entre 25ºC y 35ºC

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9. COMPOSICION DEL MEDIO HIERRO OXIDASA

COMPOSICIÓN DEL MEDIO HIERRO-

OXIDASA: (Ingrediente - g/L)

Parte A: Parte B:
-Sulfato de Amonio - 3.00gr
-Cloruro de Potasio - 1.00gr
-Sulfato ferroso - 44.22gr
-pH Final - 3.1 - 3.5
-Fosfato de Potasio - 0.50gr
(25ºC)
-Sulfuro de Potasio
heptahidratado -0.50gr
-Nitrato de Calcio - 0.01gr

10. MÉTODO DE PREPARACIÓN:

Medio de cultivo
Suspender 3.85 g de Parte A del medio en 700 mL de
agua destilada, que contenga 1 mL de Ácido Sulfúrico
10 N.
- Disolver el medio completamente, y añadir calor si es
necesario. Aparte suspender 44.2gr de Parte B del
medio en 300 mL de agua destilada. Esterilizar las
Partes A y B del medio en el autoclave a 121ºC por 15
minutos.
- Dejar enfriar a temperatura ambiente y mezclar las
dos partes en condiciones asépticas

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11. Técnicas usadas para el aislamiento de Acidithiobacillus sp

Para el aislamiento de los microorganismos se partió de muestras tanto de aguas como

de minerales procedentes de la mina "Peñasquito" ubicada en Mazapil, Zacatecas
México.Se ensayaron distintos medios (9K, Norris, Mí), así como diferentes
temperaturas (30, 37, 50 y 70”C) y valores de pH (entre 1 y 6).
Como método de aislamiento se utilizó el sistema de diluciones seriadas, consistente
en hacer un banco de diluciones decrecientes (desde l0~ hasta lOA) en el medio que
mejor resultado había dado durante el proceso de enriquecimiento. Del matraz con La
última dilución que crecía, se volvía a inocular un nuevo banco de diluciones. El proceso
se repitió hasta que las observaciones al microscopio electrónico mostraron un solo tipo
de microorganismos en el cultivo.

.
12. ASPECTOS GENÉTICOS:(Diferenciación de Acidithiobacillus ferrooxidans y A.
thiooxidans (cepas basadas en 16S-23S rDNA spacer Polimorfismo análisis)

Se utilizaron polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) y análisis

de secuencias del espaciador intergénico 16S-23S rDNA amplificado por PCR (ITS)
para diferenciar cepas de Acidithiobacillus thiooxidans de otros aciditiobacilos
relacionados, incluyendo A. ferrooxidans y A. caldus. Las huellas RFLP obtenidas con
AluI, DdeI, HaeIII, HinfI y MspI permitieron la diferenciación de todas las cepas de
referencia de Acidithiobacillus en grupos de especies. Las cepas de A. thiooxidans
investigadas (aislamientos de mina de metal) produjeron patrones de RFLP idénticos a
la cepa del tipo A. thiooxidans (ATCC 19377T), excepto para la cepa DAMS, que tenía
un patrón distinto para todas las enzimas ensayadas. Catorce cepas de mina de A.
ferrooxidans fueron asignadas a 3 grupos de RFLP, la mayoría de los cuales fueron
agrupados con A. ferrooxidans ATCC 23270T. La región espaciadora de una cepa
representativa de cada uno de los grupos RFLP obtenidos se sometió a análisis de

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 secuencia, además de once cepas adicionales de A. thiooxidans aisladas de muestras
de sedimento y agua, y A. caldus DSM 8584T. Los genes tRNAIIe y tRNAAla,
presentes en todas las cepas analizadas, mostraron una alta similitud de secuencias.
El análisis filogenético de las secuencias ITS diferenció las tres especies de
Acidithiobacillus. Las variaciones genéticas inter e infraespecíficas detectadas se
debieron principalmente al tamaño y secuencia del polimorfismo de la región ITS3.
Mantel pruebas no mostraron correlación significativa entre ITS secuencia similitud y el
origen geográfico de las cepas. Los resultados mostraron que la región espaciadora de
rDNA 16S-23S es un objetivo útil para el desarrollo de métodos basados en moléculas
dirigidos a la detección, diferenciación rápida e identificación de aciditibacilos.
13. CONCLUSION

 Se realizar los estudio morfo-fisiologico y genéticos de proteobacteria Acidithiobacillus

sp.
 Se realizar los estudio de estas bacterias que tienen la capacidad de obtener energía
a partir de la oxidación de compuestos de azufre reducido.
 Se conocer las aplicaciones industriales de Acidithiobacillus sp en el manejo y
obtención de minerales en la industria minera en la obtención de oro y cobre.
 Las bacterias que han sido estudiadas a lo largo del ciclo, son de verdadera ayuda ya
que con muchas de ellas si se realiza una recuperación, pero tenemos que tomar que
esta forma de recuperación es más costosa.

14. Referencias bibliográficas

0.1. BACTERIAS OXIDANTES DEL HIERRO Y DELAZUFRE Universidad Nacional Pedro

Ruíz Gallo Facultad de Ciencias Biológicas Escuela Profesional de Microbiología y
Parasitología Contreras Mogollón Hans J.

0.2. Kuenen, J. Gijs, et al. “The Genera Thiobacillus, Thiomicrospira, and

Thiosphaera.” The Prokaryotes. Ed. Albert Balows, et al. New York: Springer-Verlog,
1992. 2638-9, 2650.

0.3. Rawlings, Douglas, and Tomonobu Kusano. “Molecular Genetics of Thiobacillus

ferroxidans.” Microbial Review 58.1 (1994): 39-55. 30 Mar. 2008.

Página web

1. http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=372952.
2. http://microbewiki.kenyan.edu/index.php/Thiobacillus

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15