BIODEGRADACIÓN DE CARBOFURAN Y CARBARIL POR Sphingomonas

sp., S8-M3-13

El carbofuran y el carbaril son plaguicidas N-metilcarbamatos comúnmente usados en la

agricultura para controlar plagas en cultivos como papa, arroz, maíz, fresa, tabaco, entre
otros. La alta toxicidad de carburofan y carbaril y de sus metabolitos en animales y seres
humanos, sumada a las malas prácticas de manejo. Asociadas entre otras a la
sobredosificación, lo han convertido en un riesgo para la salud pública. Si bien es cierto,
las bacterias juegan un papel muy importante en la biodegradación de plaguicidas tóxicos
en el ambiente. Las bacterias que presentan degradación de carbuofuran y carbaril son:
Bacillus sp, Acinetobacter baumannii, Burkholderia sp., Aminobacter ciceronei,
Rhizobium sp, Micrococcus sp, Pseudomonas sp, Arthrobacter sp, Rhodococcus sp. Los
plaguicidas N-metilcarbamatos son degradados por microorganismos mediante
reacciones de hidrólisis, hidroxilación y oxidación. Algunas de las bacterias degradan
este tipo de plaguicidas parcialmente, y pueden generar metabolitos que podrían llegar a
ser más toxicos que el compuesto parental.

Lo que realmente ha llamado la atención es el comportamiento de las bacterias que

pertenecen al grupo de Sphingomonas sp., debido a que son micrrorganismos obicuos,
muy versátiles metabolicamente para degradar aceleradamente compuestos xenobióticos
generando metabolitos menos tóxicos, La ruta de degradación de carbofuran para estas
bacterias es la hidrólisis como primer punto, generando carburofan 7-fenol metabolito
menos tóxico que el carburofan. Son pocas las Sphingomonas sp., que degradan carbaril,
se ha comprobado que la bacteria Novosphingobium sp. Cepa FND-3, además de degradar
carbofuran degradó carbaril; Sphingobium qiguonii sp. nov, aislada de una planta de
trataiento de aguas residuales y esta cepa degrada carbaril. Sphingomonas paucimobilis
cepa S8-M3-13, es una de las bacterias caracterizadas en esta investigación y degrada
carbofuran como unica fuente de carbono y nitrogeno, y esta investigación esta
encaminada directamente a determinar las tasas de biodegradación de carbofuran y
carbaril por esta bacteria.

MATERIALES Y MÉTODOS

Se usó tripticasa de soya, glucosa, leche descremada en polvo, glicerol, dimetilsulfoxido,

agar-agar, K2HPO4, KH2PO4, NaCl, MgSO4·7H2O, CaCl2 . 2H2O, Na2 MoO4· 2H2O,
H3BO3, ZnCl2, CuCl2, FeCl3, carburofán, carbaril, 1-naftol, metanol, acetonitrilo,
cloroformo, agua HPLC, obtenida de un sistema de purificación de agua.
Los medios de cultivo usados fueron caldo Gherna, agar nutritivo, medio minimo de sales
minerales con 300 mg/l de carbofuran como unica fuente de carbono y nitrogeno, medio
mínimo de sales minerales con 200 mg/l de carbaril como unica fuente de carbono y
nitrógeno, y medio mínimo de sales minerales sin carburofan y sin carbaril como control
negativo.

BIODEGRADACIÓN DE CARBUROFAN
Para determinar la tasa de biodegradación de carbofuran Sphingomonas sp., cepa S8-
M3-13.
 Fue cultivada de forma masiva en agar nutritivo a 25ºC durante 24h. La biomasa
bacteriana fue recolectada y dispersada completamente en caldo MMS-
carbofuran con 200 mg/l de carbofuran mediante agitación.
 Fue recuperada mediante centrifugación a 5000 r.p.m durante 5 minutos a 25ºC
y ajustada a una absorvancia de 1,2 a 600 nm en espectofotómetro.
 Luego, 1ml de la biomasa fue inoculado en frascos con 100 ml de caldo MMS-
carbofuran. Realizado por triplicado.
 Los frascos fueron colocados en una incubadora con agutación orbital a 25ºC y
150 r.p.m, bajo oscuridad.
 Para determinar el crecimiento celular fueron tomadas muestras de 100µl del
medio e cultivo y diluidas de forma seriada en cloruro de sodio, las dilusiones
fueron sembradas en cajas petri, incubadas a 25ºC y posterior se realizo el
recuento de UFC/ml.
 Para evaluar la biodegradación se tomaron muestras de 1ml de medio de cultivo
con y sin bacteria, tratados con cloroformo volumen/volumen liquido-liquido 5
veces, agitando con vórtex durante 90 segundos.
 Los extractos orgánicos fueron obtenidos, recolectados y evaporados en un
desecador a temperatura ambiente.
 Los residuos fueron disueltos en metanol, filtrados mediante membranas de
nitrocelulosa y analizados por cromatografía líquida de alta resolución.

DEGRADACIÓN DE CARBARIL
 Se empleo la misma metodología descrita anteriormente.
 El caldo MMs con 200 mg/l carbofuran reemplazado por caldo MMS con 200
mg/l carbaril.

RESULTADOS

Se comprobó la degradación de carbofuran por el crecimiento de colonias amarillas

pequeñas, convexas, definidas, las cuales aparecieron sobre el agar descrito despues de
un tiempo de incubación de 72h a 25ºC.
Sphingomonas sp., cepa S8-M3-13, efectivamente degradó carbofuran como única fuente
de carbono y nitrógeno a una tasa de 4,5 mg/l a 25ºC, 150 rpm y pH 7. Durante el
experimento, se observó la aparición de un color rojo en los matraces inoculados con las
bacterias, los cuales fueron correlacionados con la disminución de las concentraciones de
carbofuran.
En cuanto al carbaril, la degradación fue lenta, los resultados indicaron que el carbaril fue
degradado en una tasa de 1.1 mg/l. La bacteria alcanzó su máximo crecimiento a los 5
días de incubación, se mantuvo y disminuyó lentamente. A diferencia del carbofuran no
se observó ningún pigmento en el medio de cultivo. El carbaril fue degradado
completamente después de 15 días a 1-naftol, pero el metabolito naftol no es degradado
por la bacteria.

Los estudios de biodegradación realizados con Sphingomonas sp, demuestran que son
bacterias que presentan una extraordinaria versatilidad metabólica. Además de degradar
los plaguicidad N-metilcarbamatos, carbaril, carbofuran, posee la capacidad para
degradar otros compuestos como propoxur, aldicarb, gentisato y ácido procatecoico,
fenol. Nitrobenceno, anilina e hidrocarburos aromáticos policíclicos como fenantreno;
aún así, se recomienda evaluar los metabolitos generados duante la degradación y su
toxicidad para mitigar el efecto sobre el ambiente y la salud de las personas.