UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

INGENIERA AGRICOLA MENCION AGROINDUSTRIAL

ASIGNATURA:
MICRIOBIOLOGÍA INDUSTRIAL

PRACTICA # 4

TEMA:
CONSERVACIÓN POR CONGELACIÓN DE UN MICROORGANISMO DE
INTERES INDUSTRIAL
ESTUDIANTES:
 FERNANDA VACA
 GALO VARGAS
 MICHELLE VERA
 BRYAN VILLAREAL
 LIDIA VILLALOBOS
 JESSICA GARCÍA
 ISAAC IZURIETA

CURSO:
4 SEMESTRE “B”

DOCENTE:
ING. PAULA PINTO BONILLA
2018 - 2019
 I. OBJETIVOS:
Conservar un microorganismo de interés industrial aplicando el método
de congelación.

II. INTRODUCCIÓN:

Los microorganismos pueden ser conservados para su posterior estudio o

utilización a través de diferentes métodos. La congelación se ha convertido
en la elección con más ventajas y por ello es necesario considerar los
diferentes factores que están implicados en este proceso: papel de la
membrana, estrés bacteriano, criopreservantes y medios de conservación.
La congelación bacteriana es un método físico químico que permite
conservar microorganismos viables por un tiempo sin sufrir cambios
genotípicos. En este proceso se involucra el agua como microambiente y
es ella la que cambia su estado de líquido a sólido; de otro lado, la bacteria
inmersa en este medio debe adaptarse a las condiciones de este nuevo
ambiente, transformar la velocidad de su metabolismo, conservar su
viabilidad y evitar que los cristales de hielo formados por el cambio de
temperatura del agua le ocasione algún daño. En el proceso de adaptación
bacteriana inducido por la congelación, es significativa la reducción en la
velocidad metabólica, a tal punto que su metabolismo se hace
imperceptible, pero suficiente para mantener el microorganismo vivo.
Algunas de estas adaptaciones son: la producción de enzimas resistentes
al frio, sistemas de transporte adaptados a bajas temperaturas, el aumento
de la concentración de ácidos grasos en la cadena de fosfolípidos de la
membrana celular, esta última, para que continúe el estado semifluido de
la membrana y evitar la congelación.

III. FUNDAMENTOS

Criopreservantes.-
Las sustancias denominadas criopreservantes impiden por interacción
molecular con el agua, la acción destructiva del congelamiento sobre las
células, es decir, protegen de la formación de cristales de hielo con un
grado bajo de toxicidad para las células vivas.
Estrés bacteriano.-
El estrés es una situación que condiciona cambios de adaptación en la
bacteria. Uno de los mayores problemas a los que puede llevar este estrés
es generarle cambios que pueden ser transitorios o permanentes en su
actividad enzimática, capacidad antigénica o viabilidad.
 IV. MATERIALES Y REACTIVOS.
 Placa con bacteria purificada
 Palillos de dientes estériles
 1 tubo de ensayo de caldo nutritivo o BHI con glicerol al 10%
 Microtubos estériles de 2 ml
 Etiquetas y marcador permanente
 Mechero
 2 jeringuilla de 1ml
 Gradilla con tapa

V. PROCEDIMIENTO
1. Tomar 1 Ml de caldo de cultivo con glicerol al 10% y colocarlo en 1
microtúbo.
2. Con palillos de dientes estériles tomar suficiente inoculo y resuspender en
el caldo, tratando de no dejar grumos, todo tiene que estar resuspendido.
La solución debe estar bien cargada de células (bien turbia).
3. Homogenizar bien.
4. Distribuir en alícuotas de 100 ul utilizando nuevo criotubo, rotular bien
cada tubito con código y fecha.
5. Guardar en la respectiva caja para congelación.

VI. CÁLCULOS

GLICEROL ? 10% 90%--------1000UL

10%--------X
90% X=111.11 (GLICEROL AL 10%)
1ML

VII. RESULTADOS
Después de obtener cultivos puros a partir de un aislamiento fue
necesario conservar los microorganismos obtenidos, se desarrolló la
técnica de conservación basada en congelación y glicerol al 10%.

VIII. CONCLUSION
Algunos de los criopreservantes presentan toxicidad para la célula viva a
temperatura ambiente, por lo tanto en los procesos de congelación y
descongelación se debe tener en cuenta los tiempos de exposición de las
células a estas sustancias.
IX. BIBLIOGRAFIA
http://www.unicolmayor.edu.co/invest_nova/NOVA/ENSAYO1_3.pdf
https://es.slideshare.net/JuAnDo11/almacenamiento-de-
microorganismos
X. ANEXOS

Fig1. Materiales a utilizar en la práctica. Fig.2 Placa con bacteria

purificada.

Fig3.Tomar 1ml del caldo del cultivo. Fig.4 Colocar el caldo de cultivo
con glicerol al 10% en el
microtubo.
Fig5.Tomar una asada con palillo de Fig.6 Resuspender en el caldo
diente e introducirlo en el microtubo. de cultivo con glicerol al 10%.

Fig7. Antes de guardar el microtubo en

su respectiva caja para su congelación
rotularla con toda la información
necesaria.