UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

INSTITUTO DE BIOTECNOLOGÍA
CONTEXTO BIOTECNOLOGÍA PARA NO BIOTECNÓLOGOS
TALLER TÉCNICAS MOLECULARES
2-2018

Nombre: Juan José Saiz Culma Código: 25471963 Carrera: Ing. Mecánica

1. ¿Cuál es el principio de la electroforesis?

La electroforesis es un método de separación de moléculas al ser sometidas a una
corriente eléctrica. Al final las moléculas son divididas por tamaño molecular y carga
eléctrica. Para la electroforesis se usa un gel de agarosa como soporte al que se le
hacen una serie de poros por donde pasaran las moléculas por acción de la corriente
eléctrica. Las moléculas de mayor tamaño se quedarán atrás mientras que las de
menor tamaño seguirán adelante.

2. ¿Cuáles son las aplicaciones que se le han dado a esta técnica?

La electroforesis en gel permite separar las hebras de ADN permitiendo identificar

sus componentes. Las pruebas paternales se pueden hacer a través de este
método. La electroforesis se puede usar en la medicina ya que puede ayudar a
determinar los genes dañados de una persona.

3. ¿Por qué es importante el aporte de la electroforesis al desarrollo de la

biotecnología?

Por medio de la electroforesis podemos detectar diferentes tipos de agentes

patógenos y enfermedades cancerígenas. Daños desde el punto de vista bioquímico
como deficiencia en la capa de mielina de las neuronas ubicadas en el encéfalo.

4. ¿Cuál es el origen de las enzimas de restricción?

La piedra angular de la tecnología del DNA recombinante son un tipo de

endonucleasas denominadas enzimas de restricción. Su descubrimiento hacia
finales de la década del los 60 por Werner Arber, Hamilton Smith y Daniel
Nathans les valió el premio Nobel de 1978. Aisladas en bacterias, reconocen y
escinden secuencias específicas de DNA de una longitud de unos 4 o 6 pb., lo que
constituye un mecanismo de defensa de las células bacterianas contra las
infecciones de fagos al degradar su genoma.

Las enzimas de restricción se denominan según el organismo en que se aíslen

siguiendo un sistema alfanumérico. Así, la enzima EcoRI proviene de Escherichia
coli, de donde fue aislada por Herbert Boyer en 1969; y escinde el DNA entre G y A
en la secuencia de bases GAATTC.
5. ¿Cómo se nombran las enzimas de restricción?

1. Tres letras que corresponden al nombre científico del microorganismo

(ej. Escherichia coli (Eco); Haemophilus influenzae (Hin)); y por ello las tres
primeras letras del nombre se escriben en cursiva.
2. La cepa o estirpe si la hubiese (ej. EcoR, aislada de la cepa "RY13" de E. coli)
3. En números romanos, un número para distinguir si hay más de una
endonucleasa aislada de esa misma especie. No confundir con el tipo de enzima
de restricción.
4. Todas deberían llevar adelante una R de restricción o un M de metilasa según
la función de la enzima, pero generalmente se omite.

6. A continuación, se muestran algunas enzimas de restricción con sus características:

Se tiene una muestra de ADN cuya secuencia es la siguiente:

A esta muestra se le realiza una restricción con EcoRI y posteriormente con HindII,
luego se visualizan los productos de digestión en un gel de agarosa.

Carriles:
A. Fragmento sin digerir.
B. Fragmento digerido con sólo EcoRI
 C. Fragmento digerido con EcoRI y HindII

7. Indique en la figura la polaridad de los electrodos.

8. ¿Por qué se observa una banda en el carril A?

Es el marcador de la prueba que ayuda a comparar y determinar el tamaño de las

otras bandas.

9. ¿Por qué se observa una sola banda en el carril B?

Indica que con EcoRI se tiene tamaño grande, ya que la velocidad de migración de
las moléculas de ADN en el gel es inversamente proporcional a su tamaño.

10. ¿Por qué se observan dos bandas en el carril C?

Indica que con EcoRI y HindII se tiene tamaño pequeño, ya que la velocidad de
migración de las moléculas de ADN en el gel es inversamente proporcional a su
tamaño.

11. Explique brevemente cuáles son las etapas de una PCR.

1. Desnaturalización (96 °C): La reacción se calienta bastante para separar, o

desnaturalizar, las cadenas de ADN. Esto proporciona los moldes de cadena
sencilla para el siguiente paso.
2. Templado (55 – 65 °C): La reacción se enfría para que los cebadores puedan
unirse a sus secuencias complementarias en el molde de ADN de cadena
sencilla.
3. Extensión (72 °C): La temperatura de la reacción se eleva para que la Taq
polimerasa extienda los cebadores y sintetice así nuevas cadenas de ADN.

12. ¿Cuáles son las aplicaciones que se le han dado a esta técnica?

Mediante el uso de la PCR, una secuencia de ADN se puede amplificar millones o

miles de millones de veces y producirá suficientes copias de ADN para que se
analicen mediante otras técnicas. Por ejemplo, el ADN se puede visualizar por
 electroforesis en gel, enviar a secuenciar o digerir con enzimas de restricción y
clonar en un plásmido.

La PCR se utiliza en muchos laboratorios de investigación, y también tiene

aplicaciones prácticas en medicina forense, pruebas genéticas y diagnósticas. Por
ejemplo, la PCR se utiliza para amplificar genes asociados con trastornos genéticos
a partir del ADN de los pacientes. También, puede utilizarse para detectar el ADN
de una bacteria o un virus en el cuerpo de un paciente: si el patógeno está presente,
es posible amplificar regiones de su ADN de una muestra de sangre o tejido.

13. De acuerdo con la carrera que usted estudia, realice una corta discusión de los
posibles beneficios y perspectivas que puede tener la PCR.

La PCR es una técnica que tiene como objetivo obtener un gran número de copias
de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mínimo. La Ingeniería Mecánica
tiene una línea de estudio llamada biomedicina, en la cual se puede aplicar esta
técnica para comprobar compatibilidades con materiales extraños al cuerpo.

14. ¿Por qué es necesario secuenciar fragmentos de ADN?

La secuenciación de ADN es el proceso de determinar la secuencia de nucleótidos

(As, Ts, Cs y Gs) de un fragmento de ADN, la cual tiene muchas posibilidades en la
investigación biológica y en aplicaciones biomédicas.

15. Explique brevemente uno de los procedimientos que son utilizados para secuenciar.

Método de Sanger: La muestra de ADN que se secuenciará se combina en un tubo

con el cebador, la ADN polimerasa y los nucleótidos del ADN (dATP, dTTP, dGTP
y dCTP). También se añaden los cuatro nucleótidos didesoxi terminadores de la
cadena, marcados con su pigmento, pero en cantidades mucho más pequeñas que
los nucleótidos normales.

Primero se calienta la mezcla para desnaturalizar el molde de ADN y luego se enfría

para que el cebador pueda unirse al molde de cadena sencilla. Una vez que se ha
unido el cavador, se eleva la temperatura para que la ADN polimerasa pueda
sintetizar ADN nuevo a partir del cebador. La ADN polimerasa añadirá nucleótidos
a la cadena hasta que aleatoriamente agregue un nucleótido didesoxi en lugar de
uno normal. A partir de ese momento, no es posible agregar más nucleótidos y la
cadena terminar con el nucleótido didesoxi. Este proceso se repite cierto número de
ciclos. Cuando los ciclos terminan, está prácticamente garantizado que se ha
incorporado un nucleótido didesoxi en cada una de las posiciones del ADN blanco
en al menos una reacción.