CUADERNO DE PROTOCOLOS

Determinación de proteínas (Bradford)

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gradilla 1
Fundamento: El método DNS determina la Vasos pp 250/ 50 mL 4
presencia de grupos carbonilos libres de los Masking 1
azucares reductores. Se basa en una reacción servitoallas 1
redox, que ocurre en la utilización de acido 3,5 pizeta 1
dinitrosalicilico para provocar la oxidación de
azucares y al mismo tiempo su propia Equipos e instrumentos:
reducción endotérmica. Prendo
Baño maría MC 301-
-Fundamento del espectrofotómetro: 4x6
Cuantificar el cambio de color de DNS midiendo Espectrofotómetro METLER
la absorbancia a Λ 540. Se enciende el
equipo> Configurar la Λ> llenar la celda de cuarzo
con el blanco (3Ml DNS+5mL agua)> Leer
absorbancia del blanco> Leer absorbancia de la Soluciones
muestra> Repetir los dos últimos pasos por cada
lectura. DNS
- Fundamento de preparación de DNS: 100 ml
1. Oxidación de la fructosa en el grupo hidroxilo Ingredientes:
del carbono 1, por ello es necesario calentar la NaOH 50mL
muestra. Tartrato de sodio 20 gr
2. la adición del NaOH, proporciona un medio Sulfito de sodio 0.05
alcalino permitiendo la oxidación de la fructosa.
3.La adición de tartrato de sodio y potasio y la Fenol 0.2 gr
oxidación de la fructosa permitirá que el DNS DNS 1 gr
se reduzca. 1. Mezclar todos los reactivos
4. El acido perderá una de sus configuraciones 2. Aforar a 100 mL
3 o 5… acido 3-amino 5-nitrosalicilico La solución se debe guardar en un frasco de
5. Se producirá una coloración amarilla-rojo. vidrio ámbar ypeso
conservas
Se frenara la reacción con hielo, para que la horas. Registrar libre deenhumedad.
un lugar fresco.
fructosa adquiera nuevamente su Procedimiento:
configuración. 1. Construcción de la curva de fructosa; prepara un
estándar de 1,0 mg/ml de fructosa, realizar las
diluciones 0.2, 0.4,0.6,0.8,1.00,1.2,1.4 mL
Objetivo: Determinar la concentración de 2. Tomar 1mL de la solución acuosa de muestra
azúcar reductor en una muestra problema.
adicional 3 mL del reactivo de DNS y calentar por 10
Símbolos y abreviaturas: min 100 ºC en baño maría.
ml Mililitros 3.enfriar los tubos en hielo, durante 5 min,
g Gramo aproximadamente.
Abs Absorbancia 4. Leer la absorbancia de color producido a 540nm
°C Grados centígrados frente a un blanco de reactivos y agua tratado igual
Λ Longitud de onda que la muestra.
5. graficar los datos de absorbancia de los tubos
Reactivos: de la curva de calibración VS concentración de
Agua destilada H2O la fructosa.
Hidróxido de Sodio NaOH 6. Realizar una regresión lineal para obtener la
3,5 dinitrosalicilico DNS ecuación de la recta y=mx+b y despejar a “x”
Fenol C6H6O para calcular la concentración de fructosa de las
Sulfito de sodio Na2SO3 muestras problemas.

Materiales:
Tubos de ensayes 13x100 12
Micropipeta 1mL 1
Matraz aforado 2
Expresión de resultados:
Los resultados se obtienen cuantificando
los azucares reductores, interpolando los
valores de absorbancia obtenidos de la
curva estándar preparada con el
carbohidrato reductor (fructosa) en dichas
concentraciones realizadas.

Referencia:
 Gil Bello., et al. ICIDCA. Sobre los
derivados de caña de azúcar; ciudada la
Habana, Cuba, 2006
 Avila Ramona., et al. Contenido de azúcares
totales, reductores y no reductores en
Agave cocui Trelease; Santa Ana de Coro,
Falcón, Venezuela., 2012.
Procedimiento:

1. Colocar los matraces, y

cartuchos a peso constante a
una estufa a 60 °C por