Commented [C1]: Márgenes

Papel Bond Formato A4 (210mm x 297mm)

• arriba 2.5 cm
• abajo 2.5 cm
• izquierdo 3 cm
• derecha 2.5 cm

SEPARACIÓN DE LOS PIGMENTOS DE LAS PLANTAS POR CROMATOGRAFÍA EN

CAPA FINA

Carrasco Ccoyca Jorge (20151418I), Quispe Navarrete Jordan Enrique (20160425D)

Laboratorio de Química Orgánica I, PQ-311, FIP
CVM_CT@hotmail.com, Jordan.quinav@gmail.com
Realizado: 24 de mayo, 2018
Presentado: 31 de mayo, 2018 Commented [C2]: Encabezados iniciales
Estos encabezados corresponden al inicio del
artículo (Logo de la UNI, Título, Autores, E-mails, Resumen).
Deben estar escritos en una sola columna.
Estos estarán en el siguiente orden:
RESUMEN • Título: centrado, tamaño de fuente 14, en negrita, mayúsculas, sin
cursiva, sin subrayar. Después del título dejar una línea en blanco
(tamaño 11). EL TÍTULO resume en una frase el propósito del
En este informe se trabajó la separación de los pigmentos de la espina por cromatografía en capa fina. experimento. Calibri 14 negrita
• Nombres de los autores (y código UNI): centrados, tamaño de
Preparamos varias placas con silica de gel, una vez secas colocamos una gota de la muestra madre en fuente 11, mayúsculas y minúsculas, en cursiva, sin subrayar. Los
nombres de los autores deben estar
cada placa, las ponemos en cada vaso de precipitado, con cada solvente y cubiertas de papel de filtro, separados por comas.
• Nombres de la asignatura (como Laboratorio), código del curso y
luego se observará la separación de los pigmentos. Los objetivos son tener la separación de los de la facultad: centrados, tamaño de
pigmentos de la espinaca y determinar que solvente nos proporciona una mejor calidad de los fuente 11, mayúsculas y minúsculas, sin
negrita, en cursiva, sin subrayar.
pigmentos de la espinaca. Los resultados fueron como se esperaba obtener los pigmentos y determinar • E-mails: centrados, tamaño de fuente 11,
mayúsculas y minúsculas, sin negrita, sin cursiva, sin subrayar.
con que solvente se obtenía cada pigmento Separados por comas. Después del o de los e-mails dejar una línea
en blanco (tamaño 11) y separar mediante borde inferior.

Cromatografía de Adsorción: La cromatografía de adsorción emplea una fase estacionaria sólida de

carácter polar, ADSORBENTE y una fase móvil líquida, ELUYENTE

Cromatografía: cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo
identificar y determinar las cantidades de dichos componentes.

1
1. INTRODUCCIÓN Commented [C3]: Los informes de laboratorio se deben escribir
usando la voz pasiva. El experimentador es idealmente un
observador objetivo, y escribe sus informes como tal.
La cromatografía de capa fina es un procedimiento que se utiliza para separar moléculas relativamente
Commented [C4]: Debe incluirse: el problema a tratar, lo
pequeñas. Al igual que otras cromatografías, consiste en una fase estacionaria y una fase móvil y el escrito por otros al respecto (el estado del arte, pero breve), la
hipótesis y los objetivos.
principio es el mismo: la sustancia de interés se adherirá a la fase estacionaria o se moverá con la fase
móvil, viajando una distancia que es inversamente proporcional a la afinidad por la fase estacionaria.
La fase estacionaria puede ser variada. Puede ser de papel, de celulosa o de un gel de silicato (vidrio
molido bien fino) unido a una superficie sólida (una placa de vidrio, aluminio, plástico o papel). Esta
superficie sólida puede ser rígida o flexible. El tipo de fase estacionaria que se utilice en un experimento
dependerá del tipo de moléculas que se quieran separar. Incluso vienen algunas placas con indicadores
fluorescentes. La fase estacionaria consiste en un solvente que puede ser agua, un solvente orgánico o
una mezcla de ambos.

Si es líquido/gas, cabe distinguir entre:

Cromatografía gas-liquido (CGL), que es una cromatografía de partición.

Cromatografía gas-sólido (CGS), que es una cromatografía de adsorción.

Si es un fluido supercrítico, (fluido calentado a una temperatura superior a la temperatura crítica, pero
simultáneamente comprimido a una presión mayor que su presión critica), se trata de la cromatografía
de fluidos supercríticos (CFS), que puede ser de partición o de adsorción.
Las técnicas cromatografías, según el dispositivo utilizado para conseguir la separación entre la fase
móvil y la estacionaria, pueden ser: en columna y plana.

Cromatografía en columna: Se utiliza un tubo cilíndrico, en cuyo interior se coloca la fase estacionaria
y a su través se hace pasar la fase móvil. El flujo de la fase móvil (líquido o gas) a través de la estacionaria
se consigue:
1) por presión,
2) por capilaridad,
3) por gravedad.

Cromatografía plana: La fase estacionaria está colocada en una superficie plana que en realidad es
tridimensional, aunque una de sus dimensiones es muy reducida, por lo que puede considerarse
bidimensional. Se divide en dos tipos generales:

1. -Cromatografía en papel: en la que el papel absorbente actúa como soporte de la fase estacionaria
(cromatografía de partición). Una muestra líquida fluye por una tira vertical de papel absorbente, sobre
la cual se van depositando los componentes en lugares específicos.

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2. -Cromatografía en capa fina: en la que un sólido actúa como fase estacionaria (cromatografía de
partición), se extiende en una capa delgada sobre una placa, generalmente de vidrio.
El uso de la cromatografía está ampliamente extendido en el análisis de alimentos, medicinas, sangre,
productos petrolíferos y de fisión radiactiva.[1]

La hipótesis de trabajo entonces es:

 Si logramos obtener una buena separación de los pigmentos de la espinaca, con los tres
compuestos orgánicos (acetona, dicloro de metano y éter de petróleo), lograremos sabes que
compuesto orgánico es mejor que otro para la obtención de cada pigmento.

Objetivos generales:

 Conocer la técnica de cromatografía de placa fina como criterio para la separación de

pigmentos de la espinaca.

Objetivos específicos:

 Adiestrarnos en el manejo de la técnica de cromatografía de placa fina, aplicada en el proceso

de separación de los pigmentos de la espinaca

 Observar que tan eficiente es este proceso para la separación de los pigmentos de la espinaca

2. DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN Commented [C5]: Encabezados principales

• CALIBRI Negrita, 12 puntos
• Mayúsculas, justificado a la izquierda.
Para llevar a cabo esta práctica de laboratorio se tuvo el siguiente diseño: • No subrayar
• No use cursivas.
Para empezar, hay que definir algunos conceptos claves para poder realizar la parte experimental • Una línea en blanco (tamaño 11) arriba y abajo, excepto cuando el
encabezado esté en la parte superior de la columna.

La cromatografía de adsorción: se caracteriza por utilizar una fase estacionaria sólida (Adsorbente) de
carácter polar y una fase móvil líquida (Eluyente) apolar, y se utiliza tanto con fines analíticos
(identificación de sustancias) como con fines preparativos (aislamiento), siendo su limitación más
importante la dificultad de separar sustancias de polaridad parecida.

Fase estacionaria: es la sustancia que está fija en una posición durante la cromatografía. Un ejemplo
es la capa de gel de sílice en la cromatografía en capa fina.

Fase móvil: es la fase que se mueve en una dirección definida. Puede ser un líquido (cromatografía de
líquidos o CEC). un gas (cromatografía de gases) o un fluido supercrítico (cromatografía de fluidos
supercríticos).

3
CROMATOGRAFÍA ANALÍTICA EN CAPA FINA (CCF): La fase estacionaria (adsorbente) se encuentra
depositada, formando una capa fina de un espesor uniforme sobre una placa de vidrio, plástico o una
lámina metálica. La mezcla que analizar se deposita con un capilar a una pequeña distancia del borde
inferior de la placa (Figura 1) y se introduce en una cubeta donde está la fase móvil (eluyente), que
ascenderá a lo largo de la capa por capilaridad eluyendo a los componentes de la mezcla a distintas
velocidades, lo que provoca su separación (Figura 3). Cuando el frente del disolvente se encuentra a ~
0.5 cm del borde superior, se saca la placa de la cubeta, se marca hasta donde ha llegado el eluyente y
se deja secar para, a continuación, proceder a la visualización de las manchas correspondientes a los
productos cromato grafiados.

Figura 1. Cromatografía por adsorción

Determinación del (R. f.): Se conoce como R f (rate factor) la relación entre las distancias recorridas
por un compuesto y por el disolvente desde el origen del cromatograma. Cada compuesto en unas
condiciones cromatográficas determinadas: adsorbente, disolvente, temperatura, etc.., tiene un valor
constante y característico de Rf . Sin embargo, solo se pueden establecer comparaciones entre los Rf
de dos compuestos cuando los dos se eluyan juntos en la misma placa. La distancia recorrida por el
compuesto se mide desde el centro de la mancha (Figura 2).

4
 Figura 2. Determinacion del R.F.

3. PARTE EXPERIMENTAL Commented [C6]: En la descripción experimental, se asume

que el lector está instruido en las técnicas de la química orgánica.
Tenga en cuenta las cantidades reales que se utilizan, no
Preparación de las placas: necesariamente las cantidades que figuran en la guía de laboratorio

Tomamos 4 placas de vidrio del mismo tamaño y lavamos muy bien con agua y detergente
abundante, se enjuagaron con abundante agua para remover todo el detergente. Por agitación con
una varilla se hizo una suspensión lo más homogénea posible de 20 gr de sílica gel para capa fina con
suficiente agua de tal forma que quede una papilla no tan espesa ni tan aguada. Vertemos la papilla
en cada placa de vidrio de tal forma que cubra toda la placa uniformemente y no quede transparente
luego con cuidado lo llevamos al horno por unos minutos hasta que se seque completamente. Una
vez listo colocamos una gota de la muestra madre encada placa de modo que este un centímetro por
encima de un borde, previo a ello se tiene los vasos de precipitado con papel de filtro en los
alrededores del vaso (figura 3.), en el primer vaso colocamos con acetona(10mL), en el segundo
diclorometano(10mL), en el tercero éter de petróleo(10mL). Esperamos que se moje todo el papel de
filtro y colocamos cada placa en el vaso, pasado varios minutos se vera que se comienza a separar los
pigmentos de la espinaca (figura 4.).

5
Figura 3. El papel de filtro en el interior del vaso

Figura 4. Obtención de los pigmentos

6
Diagrama de Flujo del experimento Commented [C7]: La parte experimental debe incluir un
diagrama de las principales operaciones realizadas durante la
actividad. Este diagrama debe realizarse obligatoriamente con el
A continuación, el Diagrama 1 muestra las principales operaciones realizadas durante el experimento. software ChemSketch o similares.
Commented [C8]: Subencabezados
• Calibri Negrita, 11 puntos
• Mayúsculas y minúsculas
• No subrayar
• No use cursivas.
• Justificado en el margen derecho.
• Una línea en blanco (tamaño 11) arriba y abajo, excepto cuando el
encabezado esté en la parte superior de la columna.

Diagrama 1. Principales operaciones para la separación de los pigmentos

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4. RESULTADOS

Para la determinación de los resultados, se tuvo que saber el concepto de RF (figura 5.)

Figura 5.

PARA EL CASO EN EL QUE ES SOLVENTE ES LA ACETONA (FIGURA 6.)

Aplicando la fórmula del RF

Distancia recorrida por el compuesto =2.2 cm
Distancia recorrida por el solvente = 6 cm
Quedando un RF =0.367
Imagen de la acetona

8
 Figura 6. acetona

PARA EL CASO EN QUE EL SOLVENTE ES EL DICLOROMETANO (FIGURA 7.)

Como se puede apreciar en la imagen hay 4 colores de 4 componentes distintos, hallaremos el RF de

cada uno .

Imagen del diclorometano:

Figura 7.diclorometano

Aplicando la fórmula del RF para la primera manchita

Distancia recorrida por el compuesto =0.6 cm
Distancia recorrida por el solvente = 5.8 cm
Quedando un RF1 =0.103

Aplicando la fórmula del RF para la segunda manchita

Distancia recorrida por el compuesto =1,2 cm
Distancia recorrida por el solvente = 5.8 cm
Quedando un RF2 =0.207

Aplicando la fórmula del RF para la tercera manchita

Distancia recorrida por el compuesto =2.5 cm

9
Distancia recorrida por el solvente = 5.8 cm
Quedando un RF3 =0.431

Aplicando la fórmula del RF para la cuarta manchita

Distancia recorrida por el compuesto =4.0 cm
Distancia recorrida por el solvente = 5.8 cm
Quedando un RF4 =0.690

PARA EL CASO EN QUE EL SOLVENTE ES EL ETER DE PETROLEO (figura 8.)

Aplicando la fórmula del RF solo vemos una mancha amarilla

Distancia recorrida por el compuesto =1.7 cm
Distancia recorrida por el solvente = 6.1 cm
Quedando un RF =0.279

Imagen del eter de petroleo

Figura 8.eter de petróleo

PARA EL CASO DE UNA MEZCLA DE SOLVENTES DE 2ML DE ACETONA CON 8 ML DE ETER (figura 9.)

10
Para esta mezcla de solventes se obtuvo 4 colores

Aplicando la fórmula del RF para la primera manchita

Distancia recorrida por el compuesto =0.5 cm
Distancia recorrida por el solvente = 6.1 cm
Quedando un RF =0.082

Aplicando la fórmula del RF para la segunda manchita

Distancia recorrida por el compuesto =1.3 cm
Distancia recorrida por el solvente = 6.1 cm
Quedando un RF =0.213

Aplicando la fórmula del RF para la tercera manchita

Distancia recorrida por el compuesto =2.0 cm
Distancia recorrida por el solvente = 6.1 cm
Quedando un RF =0.328

Aplicando la fórmula del RF para la cuarta manchita

Distancia recorrida por el compuesto =3.6 cm
Distancia recorrida por el solvente = 6.1 cm
Quedando un RF =0.590

Figura 9. Mezcla de acetona y éter de petróleo

5. DISCUSIÓN DE RESULTADOS Commented [C9]: Al interpretar los datos A FONDO,

Como sabemos en la cromatografía de capa fina hecha en el laboratorio, de nuestra madre que
estuvo hecha de los pigmentos de la espinaca, tenemos que identificar carotenos y clorofilas , pero la
cromatografía de capa fina tiene dos fases, la fase móvil , y la fase estacionaría y el movimiento que
tenga cada uno de los componentes de nuestra muestra madre (así como los carotenos, clorofilas )
está dado por su polaridad y por la polaridad del solvente a utilizar , sabemos que la silica gel(la
pastita blanca colocada en la placa de vidrio ) es la fase estacionaría , la cual hará que en el solvente ,
los componentes de la muestra madre se estiren de acuerdo a su polaridad .
En nuestro experimento utilizamos 3 solventes, y una mezcla de dos de ellos , en el primer solvente
que utilizamos , al tener un estiramiento del punto origen nos damos cuenta que son polares, y al ver
que todos tienen esos estiramientos, vemos que todos los solventes son polares , después vemos que
proporciona el significado de cada uno de sus datos, y se establece
lo que se puede concluir de estos datos.
La discusión es la parte esencial del informe, no se trata de repetir
los resultados obtenidos, si no de analizarlos, compararlos con
otros reportados en la literatura o con las predicciones teóricas. Se
recomienda ser críticos cuando los resultados no soy muy buenos
indicando que causas se le atribuyen y que mejoras pudieron
hacerse.
Su discusión debe estar fundamentada y apoyada en los
conocimientos propios que usted posee en química orgánica o de la
química en general. Usted puede hacer uso de libros, artículos o
revistas de carácter científico únicamente para soportar su
discusión. Así mismo, debe citar todas las fuentes que use.
Recuerde que, si incluye mecanismos de reacción, estos se
consideran como esquemas.

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está relacionado con el RF a mayor RF el solvente es menos polar , vemos que con la acetona solo se
puede identificar un color, quizá sea porque con este solvente , resalta más el verde y tapa a los
colores amarillos y medios anaranjados
Eso es debido a que el verde(sería el de la clorofila, tiene un gran estiramiento con el acetona),
después vemos en el segundo solvente con el diclorometano , nos salen 4 Rf, el cual vemos que con
este solvente hay algunas que son menos polares que otros como por ejemplo el RF4 es menos polar
en el solvente diclorometano , ahora en el éter de petróleo no sale solo un color amarillo y maso
menos alejado, lo que indica que con este solvente se puede identificar más las xaritofilas y que es
poco polar , y ahora con una mezcla de solventes de acetona y éter de petróleo , donde el éter de
petróleo esta en mayor cantidad , vemos que se puede identificar 4 distintos componentes de
muestra , y se puede ver que componente de esta muestra es más polar que el otro ,lo que hace la
acetona es que haya mayor estiramiento y el éter hace que se muestren más los contenidos , debido
a su polaridad.

6. RECOMENDACIONES Y CONCLUSIONES Commented [C10]: Las conclusiones se escriben en tiempo

presente.

Como mínimo se requieren 3 conclusiones y máximo 5 y no deben

numerarse. Adicionalmente, se pueden incluir recomendaciones
se recomienda hacer todo paso por paso como dice en la guía , lavar muy bien las placas de vidrio que emanen del trabajo realizado. No se consideran como
porque una mancha puede alterar el estiramiento , ser muy cuidadoso a la hora de añadir la silica gel conclusiones extractos copiados de libros o internet.
(añadir una cantidad moderada de manera que parezca trasparente ), a la hora de verter en la silica
seca la muestra madre ser cuidadoso porque es una gota que se ve bien pronunciada , y etiquetar con
que solvente trabajamos a la hora de la cromatografía , para no equivocarse.

En este experimento nos dimos cuenta de que la cromatografía de capa fina es muy importante método
de separación de sustancias orgánicas como las vegetales, y que esta separación depende del solvente
a utilizar para una muestra dada.

también se logró identificar que sustancia tiene un color característico debido a la fotosíntesis el verde
es de las clorofilas el oscuro es de las clorofilas tipo B, el claro es de las tipo A, el anaranjado es de los
carotenos y el medio amarillento es de las xantofilas .

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7. CUESTIONARIO Commented [C11]: Al final se presentará el cuestionario o las
cuestiones adicionales que el profesor crea conveniente presentar

1. En todas las formas de cromatografía hay una fase móvil y una fase estacionaria.
A) En general, en cromatografía de capa fina ¿cuál es la fase estacionaria?
La fase estacionaría sería la sílica gel (es la capa blanca que colocamos en la placa de vidrio)
B) En general, en la cromatografía en capa fina, ¿cuál es la fase móvil?
En la cromatografía de capa fina la fase móvil sería el diluyente (en este caso el solvente utilizado , el
éter de petróleo, la acetona , y el diclorometano.

2. Este diagrama, similar al de la guía, muestra los resultados de un experimento simple de

cromatografía en capa fina.

A) Describe breve, pero precisamente, lo que habría hecho para llegar a esta etapa. Usted puede
suponer que se le ha dado una placa de cromatografía de capa fina adecuada.
Lo que se hizo primero para llegar a esta imagen fue lavar de manera higenica la placa de vdrio , secar
el vidrio , luego añadir una adecuada capa fina de silica gel y llevar al horno por unos 15 minutos ,
cuando se secó la silica, se añadió una gota de nuestra muestra madre en la parte inferior de la placa,
luego se colocó un papel filtro alrededor del vaso de precipitado , se hecho el solvente a utilizar, y se
colocó la placa un poco inclinada, y se tapo el vaso.
B) ¿Por qué hay una tapa sobre el vaso de precipitados?
La tapa esta por que los solvente que utilizamos son muy volátiles, lo cual hace que se estire los
componentes de la muestra madre , si esta destapado, no se va a poder apreciar bien la parte húmeda
y la parte seca.
C) Para ayudar a identificar las cosas en un cromatograma, puede medir el valor de Rf para cada
mancha. ¿Cómo calcularía el valor de Rf para cada uno de los puntos del cromatograma anterior?
Para medir el Rf de cada uno de los puntos, solo vasta aplicar esta formula
Rf=distancia recorrida por el compuesto/distancia recorrida por el disolvente.

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Tomando como referencia el punto rojo
D) El valor de Rf para un componente particular en una mezcla es solamente constante si usted controla
cuidadosamente ciertas variables durante el experimento. Sugiere tres variables que tendrían que ser
controladas.
El Rf podría depender del tipo de adsorbente, del eluyente (de la fase móvil o fase estacionaria que se
le añade), asi como de las condiciones a la que esta sometida la placa , ya sea temperatura, presión de
vapor , etc.

3. Se ensayó una mezcla de aminoácidos (M) contra cinco aminoácidos conocidos (1 a 5) y se realizó
el siguiente cromatograma:
¿Qué puedes decir sobre la mezcla M?
Que cada cada solvente utilizado en cada una de las muestra tiene la carácter espicifico para determinar
que tan polar es el solvente , y lo estira de acuerdo a la volatilidad del solvente .
Podemos decir que en la muestra 1 solo se determino el color morado, lo que indica que este color de
acuerdo a la distancia tiene una polaridad media en este solvente en la segunda, parecido pero con
menor polaridad todav´´ia, cada solvente puede identificar a uno compuesto del aminoácido,
tendríamos que saber cuando usar cual de manera cualitativa para hallar cierto compuesto.

8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Commented [C12]: Las REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS se

insertan automáticamente por WORD y deben insertarse al final del
informe.
[1] Morrys R. Boynd R.1998.Química orgánica. Pearson.5 edición.1446Pp.

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