PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DEL ECUADOR

FACULTAD DE MEDICINA

CARRERA DE BIOQUÍMICA CLÍNICA

Laboratorio de Biología Molecular

Alumno: Rubilu Arroyo Grupo: N° 3

Fecha de entrega: 23 - Noviembre del 2018

PRÁCTICA NO. 7

Cuantificación de ADN

Resumen
La práctica de laboratorio tuvo como objetivo realizar la cuantificación de ADN obtenido en
prácticas anteriores mediante como: casera, Dnazol, DNA por ebullición y DNA por kit comercial.
Para realizar la cuantificación se empleó un espectrofotómetro de micro-volumen llamado
NanoDrop 2000. Este equipo arrojo los resultados y las curvas para cada tipo de muestra de ADN
medido de cada grupo y en base a esta información fue posible interpretar los valores obtenidos.
Objetivos

- Conocer los resultados del ADN extraído en prácticas anteriores en relación a cada
medición y correlacionarlos con las curvas obtenidas.
- Manejar el espectrofotómetro NanoDrop 2000 conociendo el fundamento de la técnica
de espectrofotometría.

Introducción

Thermo Scientific ™ NanoDrop 2000 y 2000c son espectrofotómetros UV-Vis de espectro

completo utilizados para cuantificar y evaluar la pureza del ADN, ARN, proteínas y más. Los
NanoDrop 2000 y 2000c son los únicos espectrofotómetros de microvolumen con tecnología
patentada de retención de muestras que miden volúmenes de muestra tan pequeños como
0.5µL.

El sistema patentado de retención de muestras de los espectrofotómetros NanoDrop 2000 y

2000c permite pipetear una muestra directamente sobre una superficie de medición óptica. Una
vez que se completa la medición, las superficies simplemente se limpian con un paño de
laboratorio sin pelusa. El NanoDrop 2000c integra el sistema de retención de muestras con
capacidad de cubeta.

La cuantificación de ácidos nucleicos se lleva a cabo mediante espectroscopia UV-Visible, dicho

material genético absorbe eficientemente la luz ultravioleta debido a la presencia de bases
aromáticas nitrogenadas a lo largo de las cadenas de DNA. La absorción UV de DNA es una
característica de la molécula, que es usada eficientemente para determinar su concentración.

Procedimiento experimental:

1. Abrir el software NanoDrop 2000 y seleccionar la aplicación de ácidos nucleicos.

 2. Limpiar las superficies ópticas superiores e inferiores del sistema de espectrofotómetro
de la siguiente manera:
 Colocar 10 µL de agua destilada en el cabezal y limpiar con papel absorbente.
 Encerar el equipo con TE 1X para la cuantificación de DNA por extracción casera
y por técnica de ebullición.
 Colocar 1µL del DNA de dichas extracciones
 Cerrar el pedestal superior con delicadeza
 Leer la curva respectiva
 Limpiar la cabecilla óptica superior después de cada medición
 Encerar nuevamente el equipo con NaOH
 Colocar 1µL de DNAzol en el cabezal
 Cerrar el pedestal
 Leer la curva respectiva
 Limpiar la superficie óptica superior
 Encerar con buffer de elución (kit PureLink Genomic)
 Colocar 1µL de DNA de kit PureLink Genomic
 Cerrar el pedestal
 Leer la curva respectiva

Resultados y Análisis:

Gráfico N°1: Medición de DNA por extracción casera

 La cuantificación de ADN del limon mediante la técnica de extracción casera fue de 4,3
ng/µL

Gráfico N°2: Medición de DNA por técnica de ebullición

 La cuantificación de ADN mediante la técnica de extracción por ebullición fue de
0,1ng/µL

Gráfico N°3 Medición de DNAzol

- La cuantificación de ADN por la técnica de extracción mediante DNAzol fue de 16,4ng/µL

siendo la más pura. .
 Gráfico N°4 : Medición de DNA por kit comercial.

- La cuantificación de ADN por la técnica de extracción mediante kit comercial fue de 0,2
ng/µL.
- Interpretamos los resultados del ADN extraído en prácticas anteriores en relación a cada
medición y correlacionamos con las curvas obtenidas.

Conclusiones

- La relación 260/280 DO es un indicativo de la pureza de los ácidos nucleicos y el 260/230

DO es como un segundo filtro de análisis de pureza, que marca valores superiores a la
relación 260/280.
- Cuestiona Estimamos la concentración de ADN en las muestras que fueron trabajadas
en los laboratorios anteriores.

Cuestionario

1. ¿A qué longitud de onda mido la concentración de ADN y en que unidades expreso?

260 nm

2. ¿A qué longitud de onda mido la concentración de ARN?

El ARN se mide en rangos de 210 nm a 300nm

¿A qué longitud de onda mido la concentración de proteínas?

Las proteínas se miden a 280 nm

3. Bajo que cálculo determino si mi ADN es de buena calidad

1.8-2.0 en la relación A260/280 para considerar una pureza óptima del DNA.

4. Cómo interpreto la relación 260/280. Colocar ejemplos

La relación 260/280 DO indica pureza de la muestra, es decir, se debe a la proporción de bases

nitrogenadas y los valores de concentración.

5. Cómo interpreto la relación 260/230. Colocar ejemplos

La relación 260/230 DO establecida por Invitrogen posee un rango de 2.0-2.2 y puede verse
afectado debido a las interferencias presentes en la muestra.

1. Completar el cuadro realizado para la práctica número 6

Extracción por Extracción de DNAzol Extracción de DNA Extracción casera de

ebullición con High Pure PCR DNA
Template
Preparation Kit
Resultados Observamos DNA Observamos Obtuvimos DNA de Observamos
más purificado ya filamentos blancos de una muestra de filamentos blancos de
que la muestra material genético en la hisopado bucal material genético en la
fue sometida por interface entre el mediante una interface entre el
ebullición y las alcohol y el agua en técnica de mayor alcohol y el agua en
interferencias tubo Eppendorf. El sensibilidad y tubo Eppendorf. El
fueron contenido puede ser especificidad. método empleado, no
eliminadas. más puro ya que el Mediante este es específico ni
método es más procedimiento se patentado.
sensible espera que el DNA
este en óptimas
condiciones.

Bibliografía:

1. Castillo, M. (2014). Extracción de DNA. Madrid, España. Obtenido el 18 de noviembre

del 2018 de: https://es.scribd.com/doc/22072177/Extraccion-del-ADN
2. Invitrogen. 2015. Cuantificación de ácidos nucleicos. Sabana, USA. Obtenido el 18 de
Nov. de 18 de: