INSTITUTO TECNOLÓGICO DE TUXTLA GUTIÉRREZ

INGENIERÍA BIOQUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA DEL NITROGENO

PRÁCTICA N° 4: “ELECTROFORESIS DE ADN”

ALUMNO (A): TORRES TRINIDAD VICTORIA ANAHI FECHA: 22/11/18

RESUMEN
Se realizó la identificación de ADN presente en la muestra de células vegetales mediante la técnica de electroforesis en gel de
agarosa; así como la cuantificación de ADN contenido en dicha muestra. La identificación se llevó acabo mediante el protocolo
adecuado, utilizando la extracción antes realizada de la muestra vegetal de hoja de Neem.

INTRODUCCIÓN
La electroforesis es una técnica que permite separar moléculas cargadas
eléctricamente, entre las cuales se encuentran los ácidos nucleicos (DNA
y RNA) o las proteínas. Se usa para describir la migración de una
partícula cargada bajo la influencia de un campo eléctrico La
electroforesis en geles de agarosa o poliacrilamida es una de las
metodologías más utilizadas en el laboratorio en todo lo relacionado
con el trabajo con ácidos nucleicos. Mediante la electroforesis podemos
separar fragmentos de ADN y ARN en función de su tamaño,
visualizarlos mediante una sencilla tinción, y de esta forma determinar
el contenido de ácidos nucleicos de una muestra, teniendo una
estimación de su concentración y grado de entereza. Podemos además
extraer del gel los fragmentos de ADN que sean de interés, para
posteriormente utilizarlos en diferentes aplicaciones.
El principio de la técnica de electroforesis se basa en la separación de
moléculas según la movilidad de estas cuando son sometidas a un
campo eléctrico; la carga neta negativa del ADN hará que se muevan en
dirección al ánodo. Si se fuerza a los ácidos nucleicos a moverse a través
de un gel formado por una malla tridimensional de un polímero como la
agarosa, la fricción hará que las moléculas de mayor tamaño migren con
más lentitud, mientras las de menor tamaño avanzan más en el gel,
permitiendo que las diferentes moléculas se separen en función de su
tamaño. Del mismo modo, moléculas de ADN o ARN con topologías o
estructuras tridimensionales diferentes también se comportarán de
forma diferente ante la fricción con la malla del polímero, permitiendo
su separación.
El objetivo de este trabajo fue la identificación y cuantificación de la
cantidad de ADN extraído de células vegetales, mediante la técnica de
electroforesis horizontal en gel de agarosa.
METODOLOGÍA
1.Preparación de agarosa. En un matraz Erlenmeyer colocar 100 ml de
solución TAE 1X y disolver 0.8 gr de agarosa tipo I y agitar. Colocar la
solución en el microondas con el tiempo requerido (hasta que la
solución este totalmente diluida). Posteriormente colocar la agarosa en
el molde de la cámara de electroforesis. 2. Llenado del gel: Colocar las
muestras en cada pozo correspondiente en el gel de agarosa. En el pozo
No. 1 colocar 2 μl del marcador DNA, previamente mezclado con 3 μl de
colorante azul de Bromofenol. De la misma manera colocar las muestras
problemas en los pozos en su respectivo orden consecutivo. 3.
Electroforesis: Colocar los moldes de agarosa en la cámara de
electroforesis y llenar la cámara con solución TAE 1X. Correr a 110 Volts
durante 35 minutos. 4. Revelado del gel de agarosa: Colocar el gel
tratado en un recipiente con bromuro de etidio al 5% y revelar la
muestra durante 10 minutos. Después, lavar el gel con agua corriente.
5. Verificación del ADN: Analice el gel de electroforesis en un
transiluminador a una longitud de 302 nm.
RESULTADOS
FIGURA 01. REVELADO DEL GEL
DE AGAROSA.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
La electroforesis en gel de agarosa es un método normalizado que se
utiliza para separar, identificar y purificar fragmentos de ADN. Se trata
de una técnica sencilla y rápida que permite diferenciar fragmentos de
ADN presentes en una muestra. En nuestro caso se utilizó para
identificar y cuantificar la presencia de ADN de la muestra que
extrajimos anteriormente de la hoja de Neem. Como se puede apreciar
en la Figura 01, la banda 1 (de izquierda a derecha) corresponde al
marcador molecular; en la banda 2 y 5 corresponden a la bacteria;
posteriormente, la banda 3 y 6 contienen muestra de macromiceto.
Finalmente, la banda 4 y 7 corresponden a la muestra vegetal (hoja de
Neem), lo cual indica que no se logró identificar la presencia de ADN.
CONCLUSIÓN
La electroforesis de ADN es útil para comparar patrones de bandas de
diferentes muestras biológicas, para identificación de ácidos nucleicos
de agentes infecciosos o para la obtención de un fragmento
determinado de ADN que, a su vez localizado en el gel, puede ser
extraído para análisis posteriores.
La aplicación básica de las técnicas de electroforesis de ADN es la
separación de fragmentos de ADN en una muestra y su visualización,
para comprobar aspectos como el tamaño de los fragmentos, la
concentración, la entereza, etc. Para la cuantificación de ADN es
importante la utilización de un marcador molecular ya que es
fundamental para tener una referencia de los tamaños del ADN en las
muestras puesto que nos permiten calcular los pesos moleculares de
las muestras problema.
BIBLIOGRAFÍA
1.Mathews,CK,V.Holde,Ke(2013).Bioquimica,ADN.México,DF:Person
Educación. Pag: 715-718
2.Fierro F., S. Gutiérrez, J. Casqueiro y J. F. Martín. 2001. Karyotyping
of fungi by Pulsed Field Gel Electrophoresis. Págs. 105-125 En: S.G.
Pandalai (ed.), Recent ResearchDevelopments in Genetics, vol. 1.
Research Signpost, Trivandrum, India.
3.Nelson DL, Cox MM (2001): “Principios de Bioquímica”, 3ª ed.
Editorial Omega (Barcelona, España), pp 1119-1128. 