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O
EFECTO IN VITRO DEL ZUMO DE Vaccinium corymbosum L. SOBRE
Escherichia coli BI
Y
I A
TESIS I
AC
M
Autores:
R
FA
Asesor:
IO
BL
TRUJILLO- PERU
2017
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PRESENTACION
A
“EFECTO IN VITRO DEL ZUMO DE Vaccinium corymbosum L. SOBRE
IC
M
Escherichia coli”
UI
Es propicia la oportunidad para manifestar mi sincero agradecimiento a los
Q
O
docentes de la Facultad de Farmacia y Bioquímica, quienes en su labor de
educadores nos han orientado durante mi formación profesional.
BI
Y
A
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JURADO EVALUADOR
_________________
A
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Presidente
M
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Q
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BI
Y
Mg. Ybañez Julca Roberto Osmundo
I A
AC
R M
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_________________
DE
Miembro
CA
TE
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BL
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_________________
Miembro
iii
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DEDICATORIA
A
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perseverancia para lograr mis sueños.
M
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ADRIANZEN RAMIREZ JILWER JOEL
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BI
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I A
AC
R M
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DE
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AGRADECIMIENTO
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BI
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I A
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INDICE
Página
RESUMEN i
A
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ABSTRAC ii
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I. INTRODUCCIÒN 1
O
II. OBJETIVOS BI 7
Y
I A
IV. RESULTADOS 17
R
FA
V. DISCUSIÒN 19
DE
VI. CONCLUSIONES 23
CA
TE
ANEXOS 29
BI
vi
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RESUMEN
El presente estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto del zumo de Vaccinium
corymbosum L. sobre el crecimiento in vitro de la cepa de Escherichia coli. La
cepa empleada fue reactivada en caldo Müller Hinton y se incubó durante 18
horas a 37°C. Luego se tomó una asada de la bacteria y se ajustó con solución
fisiológica al patrón de turbidez de Mac Farland N°0.5 (1.5x10 8 UFC/mL) para la
realización del ensayo se procedió a determinar la concentración mínima
bactericida (CMB) y la concentración mínima inhibitoria (CMI). Los resultados
A
IC
obtenidos muestran un efecto inhibitorio del zumo de Vaccinium corymbosum
M
L. sobre Escherichia coli, por presentar una menor turbidez del medio que
UI
contuvo a Escherichia coli en 50uL al 100%v/v y para la concentración mínima
Q
O
bactericida (CMB) se pudo evidenciar que el zumo de Vaccinium corymbosum
BI
L. difunde sobre la cepa de Escherichia coli, a la concentración de 100% v/v,
Y
evidenciándose un halo de 4 mm de diámetro.
I A
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ABSTRACT
A
IC
corymbosum L. on Escherichia coli, have a lower turbidity medium containing
M
Escherichia coli in 50uL 100% v / v for the minimum bactericidal concentration
UI
(MBC) was evident that the juice Vaccinium corymbosum L. spreads on the
Q
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strain of Escherichia coli, at the concentration of 100% v / v, showing a halo of
4 mm in diameter. BI
Y
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I. INTRODUCCION
A
1 000 millones de dólares4. En el Perú se desconocen cifras exactas de su
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incidencia.
UI
Q
Más de la mitad de todas las mujeres tiene al menos una ITU, durante su vida y
O
su presentación más común es durante el embarazo. Afecta al 50% de las
BI
mujeres, siendo rara en los hombres de 20 a 50 años 2. En el adulto mayor, la
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Las ITU, son clasificadas de diversas formas: alta o baja, aguda o crónica, no
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comunitaria o nosocomial. 1
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A
11,8%, cefalexina 41,1%, ciprofloxacino 3,8%, gentamicina 43,2%, meropenem
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2%, ácido nalidixico 29,3%, nitrofurantoína 13,3%, norfloxacino 11% y
M
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trimetoprima-sulfametoxazol 59,5%.5
Q
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Las tasas de resistencia antibacteriana han sufrido importantes variaciones con
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los años, por lo que el tratamiento empírico de la ITU, requiere la constante
Y
actualización de la sensibilidad antibiótica de las principales bacterias causantes
I A
AC
Aunque los antibióticos son casi siempre efectivos para eliminar la infección de
DE
con ITU. 1
BL
BI
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Hoy en día la medicina natural tiene un auge sin precedentes en todo el mundo,
estos conocimientos populares, son fuentes de estudio en busca de nuevos
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conocimientos y medicamentos más efectivos con menos efectos secundarios.
M
Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), el 80% de la población mundial
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Q
recurre a la medicina natural para atender sus necesidades básicas de salud. 8,9
O
BI
En el Perú existen unas 20 000 especies de plantas a las que se les atribuyen
Y
propiedades medicinales, de las cuales 1 109 son plantas medicinales nativas,
I A
utilizadas por los grupos indígenas para cubrir sus necesidades de salud. 10
AC
M
Se han realizado diversos estudios de los extractos de plantas sobre los efectos
antimicrobianos de muchas bacterias.
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A
de Pimpinella anisum “anís” y evaluación de su actividad biológica sobre
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microorganismos patógenos, se reportó que la extracción metanólica de
M
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Pimpinella anisum, presenta una inhibición porcentual del 75 % sobre
Q
Escherichia coli a una concentración mínima inhibitoria (CMI) de 45.5 mg. 15
O
En el siguiente estudio sobre la BI
actividad antibacteriana in vitro del extracto
Y
etanólico de propolis de Apis mellífera en bacterias aisladas, de pacientes
I A
AC
frutillas. 17
BI
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A
de flavonoides, antocianinas, polifenoles y ácido ascórbico. 19
IC
M
El jugo de arándano es una opción para prevenir la infección de vías urinarias,
UI
cualidad demostrada en diferentes publicaciones recientes, en las que se
Q
O
destaca que su mecanismo de acción radica en el efecto que ejercen las
BI
proantocianidinas, especialmente las de tipo A, en el urotelio, que evitan que
Y
Escherichia coli se adhiera a éste; es así como ejerce su acción
I A
AC
antibacteriana20.
M
coli a las células endoteliales cuando las bacterias son preincubadas con 5 a 75
mg de proantocianidinas tipo A. También se ha demostrado in vitro que estas
DE
células epiteliales. 20
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Existe una creencia generalizada de que el jugo de arándano puede tratar las
infecciones del tracto urinario. No hay evidencia concluyente de ya sea in vitro o
en estudios in vivo para confirmar esto. Sin embargo, hay una fuerte evidencia
in vitro e in vivo que confirma la hipótesis de que las infecciones urinarias se
puede prevenir por la disminución de la adherencia bacteriana a las células
uroepiteliales. 21
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A
España; En nuestro país la producción de arándanos se desarrollan en: Mala,
IC
Cañete, Arequipa, La Libertad, Caraz, Pisco, Cajamarca, Cusco y Lima. 23
M
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Cada día se hace más difícil el tratamiento antimicrobiano por la capacidad de
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O
dichos microorganismos de crear resistencia, tal fenómeno ha sido considerado
BI
emergente en todo el mundo, especialmente en los hospitales mostrando cifras
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anuales en aumento del 25% en el manejo de pacientes.
I A
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II. OBJETIVOS
A
IC
Determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI) del zumo de Vaccinium
M
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corymbosum L. sobre Escherichia coli.
Q
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BI
Determinar la concentración mínima bactericida (CMB) del zumo de Vaccinium
Y
corymbosum L. sobre Escherichia coli.
I A
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3.1. MATERIAL
A
3.1.2. Material de vidrio
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Placas Petri 100x15mm
M
Frasco de vidrio ámbar con tapa de plástico de 100ml
UI
Q
Tubos de ensayo 150x15mm
O
BI
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3.1.3. Equipos
I
AC
Incubadora Memmert
FA
3.1.4. Reactivos
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Agua destilada
A
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3.1.5. Material Microbiológico
UI
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Escherichia coli ATCC 25992
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3.2. MÉTODOS
A
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3.2.2. Método farmacognóstico
Q
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3.2.2.1. Obtención de la muestra
BI
Los frutos maduros y frescos de Vaccinium corymbosum L. de entre 12 y
Y
15 mm de diámetro fueron obtenidos del valle de Virú (50 msnm), distrito
I A
destilada, se cortó por la mitad retirándose las pepas y se realizó cortes del
pericarpio en rajas de 5 cm de largo y 0,5 cm de ancho. Las muestras fueron
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A
IC
Vaccinium corymbosum L., en un tubo de ensayo, luego lo llevamos a
M
sequedad, después se redisolvió en 1ml de metanol y se añadió II gotas de
UI
tricloruro férrico al 5% en etanol.
Q
O
3.2.3.1. 1. 3. Identificación de Saponinas: BI
Y
Ensayo de espuma: Se midió XX gotas del zumo de Vaccinium
I A
15 en reposo.
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3.2.4. MÉTODO ANTIBACTERIANO
A
Vacciniun corymbosun L. se trabajó por triplicado, mediante el método
IC
de Agar en placa, a la concentración de 5%v/v, 25%v/v, 50%v/v y 100%v/v,
M
UI
utilizando agua bidestilada como solvente y blanco y, al al ciprofloxacino
Q
como control.
O
La concentración mínima inhibitoria
BI
(CMI), del zumo Vacciniun
Y
Corymbosun L. se trabajó por triplicado, mediante el método de dilución en
I A
AC
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A
IC
solución fisiológica al patrón turbidez de Mac Farland N°0.5 (1.5x10 8
M
UFC/mL).
UI
Q
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3.2.4.3.1.3. Sembrado
BI
Y
Se colocó en 6 placas petri, 20 mL de Agar Müller Hinton, luego se sembró
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A
a concentraciones de 10µL, 20 µL, 30 µL, 40 µL y 50 µL disueltos en agua
IC
bidestilada.
M
UI
3.2.4.3.2. 2. Reactivaciones de las cepas
Q
O
BI
Las cepas de Escherichia coli fueron reactivadas en caldo Müller Hinton y
Y
se incubó durante 18 horas a 37°C. Luego se tomó una asada de la bacteria
A
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Para la lectura del CMI, se utilizó como criterio la turbidez, para esto se
colocó cruces de acuerdo a la intensidad de turbidez en los diferentes tubos
de ensayo, máximo de cruces fueron 3, este es que presenta mayor turbidez
y cero (0), al que presenta la CMI.
A
IC
La CMI fue interpretada como la concentración de antimicrobiano, contenida
M
UI
en el tubo de la serie que inhibió el crecimiento visible de la bacteria, para lo
Q
cual fue necesario comparar cada uno de los tubos con los controles positivo
O
y negativo. BI
Y
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IV. RESULTADOS
A
IC
los grupos
M
UI
Total 70,11277778 17
Q
O
BI
Y
I A
45
R
50
FA
40
DE
30
20
CA
2 4
10 0 0
TE
0
1
IO
A B C D Ciprofloxacino 2mg/ml
BL
BI
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Tubo 1 +++
10 µl Tubo 2 +++
Tubo 3 +++
Tubo 4 +++
A
20 µl Tubo 5 +++
IC
M
Tubo 6 +++
UI
Zumo de Tubo 7 +++
Q
O
Vaccinium 30 µl Tubo 8 +++
corymbosum L. Tubo 9 BI +++
Y
A
Tubo 10 +++
I
AC
40 µl Tubo 11 +++
M
Tubo 12 +++
R
FA
Tubo 13 +
DE
50 µl Tubo 14 +
CA
Tubo 15 +
TE
Tubo 16 0
IO
50µl Tubo 17 0
Ciprofloxacino
BL
2mg/ml Tubo 18 0
BI
Tubo 19 +++
Fuente: Investigadores.
Leyenda:
18
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V. DISCUSION
A
IC
En la Gráfico 1, se observa que el zumo de Vaccinium corymbosum L. a la
M
concentración de 100%v/v, presentó efecto mínima bactericida (4mm) sobre las
UI
cepas de Escherichia coli. Su efecto mínima bactericida se debe a una menor
Q
O
concentración proantocianidinas presentes en el zumo Vaccinium
corymbosum L., estos metabolitos se encuentran en mayor proporción en suBI
Y
piel.24
I A
AC
19
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A
otro lado, en el estudio realizado en la Universidad de Salamanca, España;
IC
determinaron que las cepas Escherichia coli eran susceptibles a ciprofloxacino
M
UI
en 77,2%. 30
Q
O
En el Gráfico 1, se observa que el zumo de Vaccinium corymbosum L. a la
BI
concentración de 5%v/v y 50%v/v, en la primera observamos que las cepas de
Y
Escherichia coli, no presentaron sensibilidad. En la segunda concentración
I A
AC
Gram negativa, presenta dos membranas lipídicas una interna y otra externa,
entre las que se localiza una fina pared celular de peptidoglucano. La membrana
DE
cepa. 30
BI
20
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inhibitorio (CMI) por presentar una mayor turbidez del medio que contenía la
cepa de Escherichia coli.
A
IC
corymbosun L. inhibe la adherencia de cepas independientemente de si
M
producen P-fimbrias y fimbrias tipo 1, así como tanto resistente a los antibióticos
UI
y las cepas susceptibles31.
Q
O
BI
Durante el paso inicial en el desarrollo de una infección urinaria, Escherichia
Y
Coli produce fimbrias-pelo así sobresalen de la superficie bacteriana. Estas
A
uroepiteliales31.
R M
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VI. CONCLUSIONES
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A
IC
3. Polanco F.; Loza R.; Resistencia antibiótica en infecciones urinarias en
M
niños atendidos en una institución privada, periodo 2007 – 2011. Rev Med
UI
Hered. 2013; 24:210-216.
Q
O
4. Gonzales C.; Jaulis J.; Tapia E.; Sensibilidad antibiótica de bacterias
BI
causantes de infecciones del tracto urinario en un hospital general: Enero-
Y
junio 2008. Rev Med Hered. 2009; 20 (1) 11-15.
I A
AC
2005;23(Supl.4): 3-8
7. Molina J.; Manjarrez A. UNAM: Infecciones de vías Urinarias- Escherichia
IO
BL
http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/bacteriologia/enferme
dades-vias-urinarias.html
8. Vásquez L. Potencial agroindustrial de 50 plantas medicinales nativas del
norte peruano. 2010. [Citado 29 marzo de 2015]. Disponible en:
http://www.elcientifico.com/inicio/_C3VTDDatmVHPhVuTbS8mfIWvMdV
y8C3gBzaCX9iFkgA.
24
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A
IC
Revista ECIPerú Volumen 10, número 2. Perú. 2014.
M
12. Roopashree T.; Raman D.; Shobha R.; Narendra C. Antibacterial
UI
activity of antipsoriatic herbs: Cassia tora, Momordica charantia and
Q
O
Calendula officinalis. International Journal of Applied Research in Natural
Products Vol. 1(3). India. 2008. pp.: 20-28. BI
Y
13. Bishnu J.; Lekhak S.; Anuja S. Antibacterial Property of Different
I A
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A
IC
Agrícolas. Colegios de Postgraduados. Montecillo, Texcoco, Estado de
M
México. 2013. [Tesis]
UI
20. Neri E.; Celis C.; León S.; et al. El jugo de arándano y su papel en las
Q
O
infecciones de las vías urinarias. Ginecol Obstet Mex 2009; 77(11):512-
517. BI
Y
21. Vincent S.; Lowe F. Cranberry juice for the prevention and treatment
I A
AC
http://www.sierraexportadora.gob.pe/perfil_comercial/PERFIL%20COMER
CIAL%20ARANDANOS.pdf
IO
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2015]. Disponible
en:http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0031942205002499
26. Jepson R.; Williams G.; Craig J. Arándanos para prevenir las infecciones
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10: CD001321. Fecha de acceso [07 oct 2015]. Disponible
enhttp://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/14651858.CD001321.pub5/f
ull [Metaánalisis]
27. Medscape. Ciprofloxacino. Fecha de acceso [15 oct 2015]. Disponible en
http://reference.medscape.com/drug/cipro-xr-ciprofloxacin-342530#10
28. Coronado J. susceptibilidad de escherichia coli a trimetropin
A
IC
sulfametoxazol y ciprofloxacino en pacientes con infección de vías
M
urinarias en cartagena de indias 2005-2007. Asociación Colombiana de
UI
Nefrología e Hipertensión. Vol.1 Núm. 4. 2009. Fecha de acceso [10 oct
Q
O
2015]. Disponible en
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A
IC
M
UI
Q
O
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Y
I A
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R M
FA
DE
CA
TE
IO
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BI
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ANEXOS
REACCION/
METABOLITO COLORACION PRECIPITADO RESUTADO
PRUEBA
A
Flavonoides Shinoda Rojo - Positivo (+++)
IC
M
Antocianinas Rosenhein Marrón - Positivo (+++)
UI
Tricloruro
Q
Fenoles Verde oscuro - Positivo (+++)
O
férrico
Fuente: Investigadores. BI
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REACCION/
TE
Fuente: Investigadores.
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DE
FIGURA 1
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FIGURA 2
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FIGURA 3
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FIGURA 4
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FIGURA 5
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FIGURA 6
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presentar una mayor turbidez del medio que contenía la cepa de Escherichia
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coli.
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FIGURA 7
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L. sobre la cepa de Escherichia coli por presentar un alto grado de turbidez del
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Flavonoides: Shinoda
Ensayo: (+)
A
Color: rojo
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Saponinas: Ensayo de la espuma
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Ensayo: (-)
No se formó espuma.
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Ensayo: (-)
No se evidencio el color rojo
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Ensayo: (+++)
Color: Verde oscuro
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Antocianinas: Rosenhein
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Ensayo: (+++)
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Color: Rojo
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Bilberry
(Vaccinium
Corymbosum)
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Figura 1. Total antocyanins content in bilberry and blueberry cultivarse, Berry and Berry skins
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Tabla 1. Antocyanins content in bilberry and blueberry cultivars berry skins
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Muestras de Vaccinium
A
corymbosum L. aptas
IC
para realizar el trabajo
M
de investigación
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Patrón: Ciproquin Mechero de
(Ciprofloxacino) Asa bacteriológica BI
Placas petri
alcohol
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Sembrado.
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Asada de Echerichia coli
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Enfrentamiento.
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Vaccinium corymbosum L.
frente a Echerichia coli, para
BI
determinar la CMI
Extracción de ul de zumo de
Enfrentamiento del zumo de Vaccinium corymbosum L.
Vaccinium corymbosum L.
frente a Echerichia coli, para
determinar la CMB
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Incubación.
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Incubación de las placas petri (CMB) y tubos de ensayo (CMI) se incubaron a 37°C por 24 horas.
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cepas
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Lectura de la capacidad
Lectura de la capacidad antibacteriana (CMB) de Zumo de
antibacteriana (CMI) de Zumo de
Vaccinium corymbosum L. Halos de inhibición
Vaccinium corymbosum L. Turbidez
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Lectura de la capacidad antibacteriana (CMB y CMI) de Zumo de Vaccinium
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Corymbosum L.
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Liofilizando el Vaccnium
corymbosum L.
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Conservando el liofilizado de Vaccnium corymbosum L. en bolsas de polietlieno.
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