Fondo

El trastorno del espectro autista (TEA) es un trastorno

del desarrollo neurológico de inicio temprano
caracterizado por luchas en las relaciones sociales,
deficiencia en el lenguaje y el habla y comportamientos
estereotipados [ 1 ]. Debido al aumento de la prevalencia
y al hecho de que no existen tratamientos efectivos en la
actualidad, el TEA trae enormes cargas económicas y
emocionales a las familias y sociedades afectadas [ 2 ].
Los estudios en este campo son de gran beneficio clínico.

Tanto los factores genéticos como los ambientales

desempeñan un papel en el desarrollo de la TEA [ 3 - 7 ].
Los estudios familiares y de gemelos proporcionan pruebas
sólidas que apoyan la contribución de la genética en el
desarrollo de la enfermedad [ 7 , 8 ]. Los estudios
genéticos moleculares han descubierto que el ASD es
posiblemente causado por diversas variantes genéticas,
como mutaciones genéticas, polimorfismos de un solo
nucleótido (SNP), anomalías cromosómicas y variaciones en
el número de copias (CNV). Debido a la alta heterogeneidad
de la TEA, solo se encuentran variantes genéticas en una
pequeña proporción de casos de TEA [ 9 ]. Las
interacciones entre la predisposición genética y los
factores ambientales se han propuesto como los principales
mecanismos en la etiología del TEA [ 5]., 10 ].

La vitamina B12 (cobalamina) y el folato participan en el

ciclo de metilación, así como en la biosíntesis de ADN y
ARN. Las anomalías metabólicas de la vitamina B12 y el
folato se han asociado con el riesgo de TEA. La
deficiencia de vitamina B12 se ha asociado con muchos
trastornos psiquiátricos y neurológicos [ 11 ]. Se
encontró que los pacientes con TEA tenían una vitamina B12
sérica más baja en comparación con los controles sanos [
12 ]. Un ensayo clínico reveló que la suplementación con
metil B12 mejoró los síntomas y redujo el estrés oxidativo
en un subgrupo de niños autistas [ 13 ]. Además, los niños
con deficiencia de folato en el cerebro tenían un mayor
riesgo de ser diagnosticados con TEA [ 14]]. La
suplementación con ácido fólico en el momento de la
concepción se ha relacionado con una menor incidencia de
TEA en la descendencia [ 15 , 16 ].
Las enzimas y las proteínas transportadoras desempeñan
funciones importantes en el metabolismo de la vitamina B12
y el folato. La transcobalamina II (TCN2) es la proteína
transportadora que transporta la vitamina B12 (cobalamina)
a las células dentro de los tejidos diana. Usando la
cobalamina como cofactor, la metionina sintasa (MTR)
convierte la homocisteína en metionina y transfiere grupos
metilo de 5-metiltetrahidrofolato a homocisteína,
produciendo tetrahidrofolato para la síntesis de ácido
nucleico y metionina para las reacciones de metilación. La
metionina sintasa reductasa (MTRR) es responsable de la
regeneración de las funciones de la MTR. Convierte 5,10-
metilentetrahidrofolato en 5-metilentetrahidrofolato y
regula el flujo intracelular de folato. La metilen
tetrahidrofolato reductasa (MTHFR) cataliza la conversión
irreversible de 5,10-metilentetrahidrofolato en 5-
metiltetrahidrofolato (Figura 1 ). Los polimorfismos en
los genes relacionados con el metabolismo de la vitamina
B12 y el folato se han examinado individualmente o en
combinación en estudios previos [ 17 - 22 ], pero los
resultados siguen siendo ambiguos o inclusivos. En
particular, los polimorfismos en estos genes no han sido
bien definidos en la población china.

Un archivo externo que contiene una imagen, una

ilustración, etc. El nombre del objeto es medscimonit-24-
370-g001.jpg
Figura 1
Las enzimas (TCN2, MTR, MTRR y MTHFR) son importantes en
el metabolismo de B12 y folato. TCN2 transporta la
vitamina B12 (cobalamina) a las células. La MTR convierte
la homocisteína en metionina y el 5-metiltetrahidrofolato
en tetrahidrofolato. MTRR es esencial para regenerar MTR
funcional. MTHFR convierte el 5,10-metilentetrahidrofolato
en 5-metiltetrahidrofolato. TCN2 - transcobalamina; MTR -
metionina sintasa; MTRR - metionina sintasa reductasa;
MTHFR - metilen tetrahidrofolato reductasa.

El presente estudio examinó los genotipos de SNP TCN2

rs1801198, MTR (rs1805087), MTR (rs1801394) y MTHFR
rs1801133 entre niños con TEA y controles saludables de la
población china Han. El propósito de nuestro estudio fue
examinar la asociación de estos SNP con el riesgo de TEA
infantil.
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Material y métodos
Pacientes con TEA y controles.
Todos los pacientes y controles fueron reclutados en el
distrito Xiaoshan de la provincia de Zhejiang desde
septiembre de 2012 hasta junio de 2016. Se incluyeron un
total de 201 niños chinos Han con TEA y 200 niños sanos,
con información detallada descrita anteriormente [ 23 ].
De acuerdo con la Escala de Calificación de Autismo
Infantil (CARS), los pacientes con puntajes de <36 se
clasificaron de leve a moderado y ≥36 como grave. El
Comité de Ética Médica del Hospital Zhejiang Xiaoshan
aprobó este estudio. El consentimiento informado fue
firmado por los padres o tutores de todos los niños.

Genotipado de SNPs
El ADN se extrajo de las células de la sangre entera
utilizando el mini kit de ADN de Qiagen Blood (Qiagen
China, Shanghai, China). Las sondas TaqMan se obtuvieron
de Applied Biosystems (Beijing, China). Los ID de ensayo
para rs1801198, rs1801394, rs1805087 y rs1801133 fueron
C__325467_10, C__3068176_10, C__12005959_10 y
C__1202883_20, respectivamente. Los genotipos de los SNP
se examinaron utilizando un método de PCR en tiempo real
basado en la sonda TaqMan utilizando el protocolo descrito
en estudios anteriores [ 2 , 24 ].

análisis estadístico
Todos los datos se analizaron utilizando el software SAS
9.3 (SAS Institute Inc., Cary, NC). El equilibrio de
Hardy-Weinberg se examinó mediante la prueba de chi-
cuadrado. La asociación entre los SNP y el riesgo de TEA
se probó mediante el modelo de regresión logística. Los
datos se presentaron como odds ratios (OR) e intervalos de
confianza (IC) del 95%. El valor de AP <0,05 se consideró
estadísticamente significativo.

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Resultados
Nuestros datos revelaron que las distribuciones
genotípicas de TCN2 rs1801198, MTR rs1805087, MTRR
rs1801394 y MTHFR rs1801133 estaban en el equilibrio
genético de Hardy-Weinberg ( Tabla 1 ).

tabla 1
Pruebas de equilibrio de Hardy-Weinberg ( valores de P )
de SNP en grupos de casos y controles.

SNPs Casos Controlar

rs1801198 0.0776 0.6458
rs1801394 0.9758 0.7129
rs1805087 0.2048 0.0730
rs1801133 0.5873 0.0991
El análisis de regresión logística no mostró diferencias
significativas en las distribuciones genotípicas y las
frecuencias alélicas de todos los SNP examinados entre los
grupos de casos y controles ( Tabla 2 ).

Tabla 2
Correlación entre los genotipos SNP y las frecuencias
alélicas con ASD infantil.

SNPs Genotipo / Alelo Casos n (%) Controles n (%)

O IC del 95% Valor de p
rs1801198
C / C 43 (21.4) 38 (19.0) 1
C / G 113 (56.2) 102 (51.0) 0.98 0.59–1.63
0.9353
G / G 45 (22.4) 60 (30.0) 0.66 0.37–1.19 0.1667
do 199 (49.5) 178 (44.5) 1
sol 203 (50.5) 222 (55.5) 0.82 0.62–1.08 0.1564
rs1801394
AUTOMÓVIL CLUB BRITÁNICO 121 (60.2) 123 (61.8) 1
A / G 70 (34.8) 68 (34.2) 1.05 0.69–1.59 0.8313
G / G 10 (5.0) 8 (4.0) 1.27 0.49–3.33 0.6259
UNA 312 (77.6) 314 (78.9) 1
rs1805087
AUTOMÓVIL CLUB BRITÁNICO 168 (83.6) 155 (77.5) 1

A / G 33 (16.4) 45 (22.5) 0.68 0.41–1.12 0.1252

UNA 369 (91.8) 355 (88.8) 1
sol 33 (8.2) 45 (11.2) 0.71 0.44–1.13 0.1477
rs1801133
AUTOMÓVIL CLUB BRITÁNICO 32 (15.9) 42 (21.1) 1
A / G 101 (50.3) 86 (43,2) 1.54 0.90–2.65 0.1179
G / G 68 (33.8) 71 (35.7) 1.26 0.71–2.22 0.4295
UNA 165 (41.0) 170 (42.7) 1
sol 237 (59.0) 228 (57.3) 1.07 0.81–1.42 0.6324
El papel de estos SNP en la ASD infantil se analizó más a
fondo utilizando modelos dominantes y recesivos. Nuestro
estudio mostró que MTRR rs1801394 y MTHFR rs1801133 no se
asociaron significativamente con el TEA infantil en
ninguno de los modelos ( Tabla 3 ).

Tabla 3
Distribuciones de genotipos SNP y evaluaciones de riesgo
correspondientes para TEA utilizando modelos genéticos de
herencia.

SNPs / Modelos Genotipo Casos n (%) Controles n (%)

O IC del 95% Valor de p
rs1801198
Dominante C / C 43 (21.4) 38 (19.0) 1
G / G + C / G 158 (78.6) 162 (81.0) 0.86 0.53–1.41
0.5513
Recesivo C / C + C / G 156 (77.6) 140 (70.0) 1
G / G 45 (22.4) 60 (30.0) 0.67 0.43–1.05 0.0838
rs1801394
Dominante AUTOMÓVIL CLUB BRITÁNICO 121 (60.2) 123
(61.5) 1
G / G + A / G 80 (39.8) 77 (38.5) 1.06 0.71–1.58 0.7896
Recesivo AA + AG 191 (95.0) 192 (96.0) 1
G / G 10 (5.0) 8 (4.0) 1.26 0.49–3.25 0.6379
rs1801133
Dominante AUTOMÓVIL CLUB BRITÁNICO 32 (15.9) 42 (21.0)
1
G / G + A / G 169 (84.1) 158 (79.0) 1.40 0.84–2.33
0.1910
Recesivo AA + AG 133 (66.2) 129 (64.5) 1
G / G 68 (33.8) 71 (35.5) 0.93 0.62–2.22 0.1410
Ciento veintidós pacientes tenían TEA de leve a moderada y
79 tenían TEA grave entre todos estos niños con TEA. No
hubo asociación significativa entre los SNP examinados y
la gravedad de la TEA infantil ( Tabla 4 ).

Tabla 4
Correlación entre los genotipos de SNP y las frecuencias
alélicas y la gravedad de la ASD infantil.

SNPs Genotipo / Alelo Moderada-severa n (%) Grave n

(%) O IC del 95% Valor de p
rs1801198
C / C 25 (20.5) 18 (22.8) 1
C / G 71 (58.2) 42 (53.2) 0.82 0.40–1.68 0.5906
G / G 26 (21.3) 19 (24.0) 1.02 0.44–2.37 0.9726
do 121 (49.6) 78 (49.4) 1
sol 123 (50.4) 80 (50.6) 1.01 0.68–1.51 0.9651
rs1801394
AUTOMÓVIL CLUB BRITÁNICO 75 (61.5) 46 (58.2) 1
A / G 40 (32.8) 30 (38.0) 1.22 0.67–2.23 0.5104
G / G 7 (5.7) 3 (3.8) 0.70 0.17–2.84 0.6162
UNA 190 (77.9) 122 (77.2) 1
sol 54 (22.1) 36 (22.8) 1.04 0.64–1.68 0.8777
rs1805087
AUTOMÓVIL CLUB BRITÁNICO 100 (82.0) 68 (86.1) 1
A / G 22 (18.05) 11 (13.9) 0.74 0.34–1.62 0.4436
UNA 147 (93.0) 222 (91.0) 1
sol 11 (7.0) 22 (9.0) 0.76 0.36–1.60 0.4648
rs1801133
AUTOMÓVIL CLUB BRITÁNICO 22 (18.0) 10 (12.7) 1
A / G 59 (48.4) 42 (53.2) 1.57 0.67–3.65 0.2986
G / G 41 (33.6) 27 (34.2) 1.45 0.59–3.53 0.4151
UNA 103 (42.2) 62 (39.2) 1
sol 141 (57.8) 96 (60.8) 1.13 0.75–1.70 0.5541
Ir:
Discusión
En este estudio actual de casos y controles, analizamos
los polimorfismos de los SNP en genes relacionados con la
vitamina B12 y el metabolismo del folato en niños con TEA
y controles sanos de la población china Han. No hubo
diferencias significativas en las distribuciones
genotípicas y las frecuencias alélicas de los SNP
rs1801198 en TCN2, rs1805087 en MTR, rs1801394 en MTR y
rs1801133 en MTHFR entre niños con TEA y controles sanos.
No se observó una correlación significativa entre los SNP
examinados y la gravedad de la enfermedad.

El gen TCN2 se posiciona en el cromosoma 22. SNP rs1801198

(C776G) afecta el plegamiento de la proteína y, por lo
tanto, altera su afinidad de unión por B12 [ 25 ]. Este
polimorfismo en el gen TCN2 se ha asociado con menores
niveles circulantes de vitamina B12 y mayores niveles
circulantes de homocisteína [ 26 ]. El metabolismo
alterado de la metionina-homocisteína causado por el SNP
rs1801198 (C776G) en el gen TCN2 puede conducir al
desarrollo de ASD. Un estudio previo informó una
diferencia significativa en la distribución genotípica y
la frecuencia de alelos de rs1801198 entre los pacientes
con TEA y los controles sanos [ 27 ]. SNP rs1801198 se ha
asociado con neuropatía periférica [ 28]]. En contraste,
nuestros datos revelan que rs1801198 en el gen TCN2 no es
un factor de riesgo para el TEA infantil.

El gen MTR se encuentra en el cromosoma 1. El polimorfismo

rs1805087 (A2756G) en el gen MTR influye en la actividad
de su enzima codificadora, lo que lleva a un aumento de la
homocisteína circulante [ 29 ]. Haghiri et al. [ 17 ]
realizó un estudio de casos y controles con 108 niños
autistas y 130 controles sanos de una población iraní.
Aunque no se observó una diferencia significativa en la
distribución genotípica de rs1805087 (A2756G) entre los
casos y los controles, el alelo G de rs1805087 se asoció
con un mayor riesgo de TEA en comparación con el alelo A.
Además, la homocigosidad para el alelo A se asoció con una
mayor gravedad de la demencia [ 18 ]. El presente estudio
no encontró una asociación significativa entre rs1805087 y
el riesgo de TEA en la población china Han.

El gen MTRR se encuentra en el cromosoma 5. El rs1801394

(A66G) en el gen MTRR conduce a una afinidad reducida por
el sustrato [ 30 , 31 ]. Un estudio de casos y controles
encontró que el alelo A de rs1801394 en el gen MTRR estaba
asociado con un riesgo reducido de TEA [ 21 ]. Nuestros
datos no mostraron una asociación significativa entre SNP
rs1801394 y ASD infantil o su gravedad. rs1801394 en el
gen MTRR ha sido identificado como un factor de riesgo
para varios trastornos neuropsiquiátricos [ 32 ].

El gen MTHFR se encuentra en el cromosoma 1. rs1801133

(C677T) en el gen MTHFR influye en la actividad enzimática
y los niveles séricos de homocisteína [ 33 , 34 ]. Las
interacciones sinérgicas entre MTHFR C677T y MTRR A66G
aumentan la homocisteína, que se considera un factor de
riesgo significativo para el autismo [ 35 ]. Se realizó un
estudio previo con 186 casos y 186 controles de la
población china Han. Los resultados encontraron que tanto
el genotipo TT como el alelo T de rs1801133 se asociaron
con un riesgo significativamente mayor de TEA infantil [
22 ]. Un metaanálisis reciente analizó las distribuciones
geográficas y étnicas de MTHFR C677T entre las poblaciones
chinas. Se encontró que MTHFR C677T se correlacionó
significativamente con el riesgo de TEA [ 36]. El SNP
rs1801133 se asoció con el riesgo de autismo en indios [
21 ] y norteamericanos [ 20 ]. En contraste, no se observó
asociación entre rs180113 y TEA en nuestro estudio, y no
se encontró tal asociación en las poblaciones brasileña [
37 ], turca [ 38 ] o egipcia [ 39 ].

Las limitaciones del estudio actual deben abordarse,

incluido su diseño de casos y controles y su tamaño de
muestra relativamente pequeño. Solo 4 SNPs en genes
relacionados fueron examinados en este estudio. Además,
los metabolitos de la vitamina B12 y el folato están
implicados en la metilación redox y del ADN que son
relevantes para el desarrollo de la TEA [ 10 ]. La
medición de los metabolitos del folato fue capaz de
separar los sujetos con TEA de los controles y predecir la
gravedad de la enfermedad [ 40 ]. Sin embargo, los niveles
de vitamina B12, folato y sus metabolitos relacionados no
se examinaron en estos niños. Los trastornos metabólicos
de las vitaminas pueden interactuar con ciertos
polimorfismos en estos genes para aumentar el riesgo de
TEA. El papel de tales interacciones no fue examinado en
este estudio.

Ir:
Conclusiones
Nuestro estudio revela que TCN2 rs1801198, MTR rs1805087,
MTRR rs1801394 y MTHFR no son factores de riesgo para la
susceptibilidad al TEA infantil o la gravedad de la
enfermedad en la población china Han.