purificación simple de otras proteínas recombinantes

GST MicroSpin y Sus módulos de purificación MicroSpin, GSTrap, HiTrap quelante y

HisTrap son productos que utilizan cromatografía de afinidad para aislar y purificar una
proteína de fusión específica. Sin embargo, muchas otras proteínas de fusión y de no
fusión también se pueden aislar a un grado satisfactorio de pureza mediante una única
etapa de purificación usando cromatografía de afinidad. La cromatografía de afinidad
aísla una proteína específica o un grupo de proteínas con características similares. La
técnica separa proteínas sobre la base de una interacción reversible entre la proteína (s) y
un ligando específico unido a una matriz cromatográfica. Cada vez que un ligando
adecuado está disponible para la proteína (s) de interés, una única etapa de purificación
por afinidad ofrece alta selectividad, por lo tanto, de alta resolución, y por lo general de
alta capacidad para la proteína (s) objetivo.
Realización de una columna específica purificación
En los casos cuando un medio de afinidad hecho listo no está disponible, se puede
considerar la pena desarrollar una columna de purificación “casera” de afinidad, por
ejemplo, cuando una proteína recombinante específica necesita ser preparado
eficientemente sobre una base regular. El ligando debe estar preparado (después de
procedimientos específicos para el tipo de ligando, por ejemplo, mediante el aumento de
anticuerpos), la prueba de afinidad a la proteína diana y se purificó antes de ligarse a una
matriz cromatográfica

purificación Multi-paso de proteínas recombinantes (fusión y de no fusión)

sistemas de fusión son simple y conveniente y, para muchas aplicaciones, una única etapa
de purificación usando cromatografía de afinidad es suficiente para lograr el nivel
deseado de pureza. Sin embargo, si no existe un sistema de fusión adecuado de modo que
la cromatografía de afinidad no se puede utilizar, o si se requiere un mayor grado de
pureza, será necesario una purificación de múltiples pasos. Una ventaja significativa
cuando se trabaja con productos recombinantes es que a menudo hay una considerable
información disponible sobre el producto y contaminantes.
Selección y combinación de técnicas de purificación
Las proteínas se purifican usando técnicas de purificación cromatográficas que separan
según las diferencias en propiedades específicas

Cada técnica ofrece un equilibrio entre la resolución, capacidad, velocidad y

recuperación.
Capacidad, en el modelo simple que se muestra, se refiere a la cantidad de proteína diana
cargadas durante la purificación. En algunos casos la cantidad de muestra que puede ser
cargado puede estar limitado por volumen (como en la filtración en gel) o por grandes
cantidades de contaminantes en lugar de por la cantidad de la proteína diana.
Velocidad es de la mayor importancia en el inicio de la purificación donde los
contaminantes tales como proteasas deben eliminarse lo más rápidamente posible.
Recuperación se vuelve cada vez más importante como la purificación ingresos a causa
del aumento del valor del producto purificado. La recuperación está influenciada por
procesos destructivos de la muestra y las condiciones desfavorables en la columna.
Resolución se consigue la selectividad de la técnica y la capacidad de la matriz
cromatográfica para producir picos estrechos. En general, la resolución es más difícil de
lograr en las etapas finales de purificación cuando las impurezas y proteína diana es
probable que tengan propiedades muy similares.