TRABAJO PRACTICO DE MICROBIOLOGÍA DE SUELOS

Elaborado por:

Edinson Aurelio Castro Pérez

Código: 12.548.393
Víctor Manuel Redondo Herrera

Código: 12.625.085

Robinson Soto Macea

Código: 78.734.082

Grupo:

303019_33

Tutor:

Andrés Fernando Rubiano

Universidad nacional abierta y a distancia - UNAD

Escuela ciencias agrícolas, pecuarias y del medio ambiente

Curso de microbiología de suelos

Santa Marta, Magdalena

2017
INTRODUCCIÓN
 OBJETIVOS

Objetivo general
 Identificar por medio de un experimento la interacción que hay entre
microorganismo-planta.

Objetivos específicos
 Realizar inoculación en plantas de leguminosa de frijol.
 Observar el efecto de estos microorganismos en plantas de fríjol.
 HIPÓTESIS DE INVESTIGACIÓN

Que al aplicar el inoculo Bacillus subtilis se esperan que los rendimientos sean mucho
mejor en cuanto al crecimiento de las plantas.
Que el sistema radicular de las plantas sea más abundante.
Que el follaje de las plantas tengan un verde intenso
 MARCO TEÓRICO

En el suelo encontramos diferentes tipos de microorganismos beneficiosos que son de

gran importancia como bacterias, hongos, nematodos, etc. Usados como biofertilizantes
para corregir el daño ocasionado por el exceso uso de agroquímicos.

Los biofertilizantes son productos a base de microorganismos benéficos para suelos,

especialmente conformados por bacterias y hongos con el fin de acelerar los procesos
microbianos y así de esta manera hacer más asimilables los nutrientes que hay en el suelo
para las plantas para que de esta forma se pueda lograr mejores rendimientos y mayor
calidad del producto.
Para la realización de este experimento utilizamos una sepa de Bacillus subtilis que fue
preparada en un medio con agar más agua estéril.
El bacillus subtilis es una bacteria Gram positiva comúnmente encontrada en el suelo,
tiene una habilidad para formar una resistente endospora protectora permitiéndole tolerar
condiciones ambientalmente extremas. Actúa como promotores del crecimiento de la
planta y se propaga por toda la rizosfera medio en el cual conviven con las raíces de las
plantas. Las mayores poblaciones de Bacillus en el suelo se localizan entre los 2.5 y 5 cm
de profundidad.
Los beneficios que se le atribuye:
- Promotor del crecimiento en la planta.
- Estimula la producción de hormonas en la planta y solubiliza formas insolubles
de fosfatos, necesarias en el crecimiento de la planta.
- Producción de Auxinas
- Solubilizador de fosfato
MATERIALES
 40 semillas de fríjol.
 20 frascos o vasos plásticos con tapa para usar como maceta
 Suelo (suficiente para llenar 20 frascos)
 Inoculante: Bacillus subtilis el cual fue obsequiado por Corpoica.
 Hipoclorito de sodio al 20%
 Agua hervida durante 30 minutos.
 1 vasija normal.
 3 bolsas enmalladas de tela.
 1 bisturí.
 Regla
 Bisturí


MÉTODOS:
Para la realización de este experimento se tomó una porción de sustrato, el cual se pasó a
través de un cernidor o tamizador para eliminar partículas de materiales vegetales y dejar
el sustrato libre de cualquier material que pueda ser fuente de hospederos de
microrganismos.
Se tomó parte del sustrato cernido y se colocó en una vasija con agua y se pasó por fuego
durante 30 minutos. Luego se dejó en reposo hasta que la temperatura del sustrato
descendiera a nivel ambiente. Se procedió a llenar los recipientes plásticos (10)
previamente perforados en el fondo para evitar encharcamiento en el sustrato y sirvan
como medio de drenaje. Igualmente se tomó el sustrato que no se desinfectó y se llenaron
los otros 10 recipientes. Posteriormente se ubicaron los recipientes sobre bancos
metálicos para aislarlos del suelo. Por otra parte se tomaron 40 semillas de fríjol, cabecita
negra, se desinfectó en una solución de hipoclorito de sodio al 20% durante 20 minutos y
luego se lavó con agua estéril y se procedió a realizar la siembra depositando 2 semillas
por recipientes.
Se distribuyó los 20 recipientes con sustrato en 4 tratamientos y 5 repeticiones.
Por cada recipiente se le sembró 2 semillas de frijol las cuales se regaban diariamente con
agua esterilizada.
Para la toma de datos se utilizaron los parámetros de: altura, diámetro, número de hojas.
Esta actividad se realizó diariamente para lo cual con la ayuda de una regla se tomó la
altura de la planta desde la base hasta el ápice de crecimiento de la planta. Para tomar el
grosor de la planta utilizamos el pie de rey, a 2 cm por encima de la base de la planta y
el número de hojas, de acuerdo a las hojas verdaderas es decir abiertas.
 RESULTADOS Y DISCUCIONES

De acuerdo a la información recolectada que empezó desde la siembra que se realizó el

16 de noviembre donde más del 90% de las semillas germinaron tres días después de la
siembra, donde como inicio las evaluaciones de los tratamientos 1, 2, 3 y 4 comprendidas
desde el día 20 de noviembre hasta el 4 de diciembre con los siguientes resultados:
Grafica 1: Comportamiento del frijol (phaseulus vulgari) sometido a diferentes
tratamientos para mirar su desarrollo fisiológico.
22.00
21.50

21.00 20.69
Promedio Altura (cm)

20.00 19.80

19.00

17.95
18.00

17.00

16.00
Suelo desinfectado + Suelo desinfectado + suelo no desinfectado + Suelo no desinfectado +
semilla inoculada semilla no inoculada semilla inoculada semilla no inoculada
Tratamientos Evaluados

De acuerdo con el grafico 1, se puede observar que el tratamiento que mejor resultado
presento fue cuando se utilizó suelo desinfectado + semilla inoculada, obteniendo plantas
con un crecimiento promedio en cuanto altura de 21,5 cm, diferente al tratamiento suelo
no desinfectado + semilla no inoculada las cuales mostraron promedios de altura de 17,95
cm. Además, se puede observar que sometiendo las semillas de frijol a procesos de
inoculación se obtienen mejores resultados teniendo como base de discusión los
tratamientos 1 y 3 donde la altura presento valores de 21,50 cm y 20,69 cm
respectivamente.
Finalmente se puede decir que estos procesos de inoculación ayudan a la planta a
comportarse mejor en cuanto vigor y crecimiento.
Gráfica 2: Promedio diámetro del tallo

0.30
0.27
0.25
Promedio Diam/Tallo (cm)

0.25 0.23
0.19
0.20

0.15

0.10

0.05

0.00
Suelo desinfectado Suelo desinfectado suelo no Suelo no
+ semilla inoculada + semilla no desinfectado + desinfectado +
inoculada semilla inoculada semilla no inoculada
Tratamientos evaluados

Según la gráfica que hace referencia del promedio del grosor del tallo de las plantas de
los tratamientos evaluados se puede observar que el mejor tratamiento fue el de suelo
desinfectado más semilla no inoculada con un promedio de 0.27 cm y el promedio más
bajo fue el de suelo desinfectado más semilla inoculada con 0.19 cm.

Gráfica 3: Promedio número de hojas

6.2 6.1
6.0
6.0
Promedio N° Hojas

5.8 5.8

5.6
5.4
5.4

5.2

5.0
Suelo desinfectado + Suelo desinfectado + suelo no Suelo no
semilla inoculada semilla no inoculada desinfectado + desinfectado +
semilla inoculada semilla no inoculada
Tratamientos evaluados

Según la gráfica que hace referencia del promedio del número de hojas de las plantas de
los tratamientos evaluados se puede observar que el mejor tratamiento fue el de suelo
desinfectado más semilla no inoculada con un promedio de 6.10 cm y el promedio más
bajo fue el de suelo no desinfectado más semilla inoculada con 5.4 cm.
Gráfica 4: Promedio largo de la raíz

14.00 12.88
Proemdio Largo/raiz (cm)

12.00 11.06

10.00
7.75
8.00
6.39
6.00

4.00

2.00

0.00
Suelo desinfectado Suelo desinfectado suelo no Suelo no
+ semilla inoculada + semilla no desinfectado + desinfectado +
inoculada semilla inoculada semilla no
inoculada
Tratamientos evaluados

Según la gráfica que hace referencia del promedio del largo de la raíz de las plantas de
los tratamientos evaluados se puede observar que el mejor tratamiento fue el de suelo no
desinfectado más semilla inoculada con un promedio de 12.88 cm y el promedio más
bajo fue el de suelo desinfectado más semilla no inoculada con 6.39 cm.

Gráfica 5: Número de nódulos

16
14
14
N° Inoculos encontrados

12
10
8
6
4
4
2
2 1

0
Suelo desinfectado + Suelo desinfectado + suelo no desinfectado Suelo no
semilla inoculada semilla no inoculada + semilla inoculada desinfectado +
semilla no inoculada
Tratamientos evaluados

Según la gráfica que hace referencia del número de nódulos encontrados en las raíces de
las plantas de los tratamientos evaluados se puede observar que el mejor tratamiento fue
el de suelo no desinfectado más semilla inoculada con 14 y el más bajo fue el de suelo
desinfectado más semilla no inoculada con tan solo 1.
 CONCLUSIONES

 El tratamiento que mejor respondió en el experimento realizado fue el tratamiento

3 (suelo desinfectado + semilla inoculada) en cuanto a su crecimiento vegetativo
con un promedio de altura de 21.5.
 Que el tratamiento que presentó un mayor desarrollo en cuanto al diámetro fue el
tratamiento 1 (suelos desinfectado + semillas no inoculada)
 Aunque los valores son relativamente insignificante en cuanto al número de hoja
se puede decir que el rango más alto se presentó en el tratamiento 1 (suelo
desinfectado + semilla no inoculada) con un promedio de 6.1.
 De los tratamientos observados el que presentó mayor desarrollo radicular fue el
tratamiento 4 (suelo no desinfectado + semilla inoculada)
 De los tratamientos observados el que presentó mayor número de nódulos fue el
tratamiento 2 (suelo no desinfectado + semilla no inoculada) a pesar que en este
tratamiento no se le hizo inoculación es probable que el sustrato estaba infectado.
 La variable más representativa donde se puede observar el efecto del inóculo
Bacillus subtilis, tanto en el tratamiento 3 (suelo desinfectado + semilla inoculada)
como el tratamiento 4 (suelo no desinfectado + semilla inoculada) es en el de
desarrollo fisiológico que presentan las mayores altura 21.50 y 20.69 cm
respectivamente contra 19.80 y 17.98 cm.
 Del mismo modo estos tratamientos (3 y 4) que son los que están inoculados,
presentan el mayor desarrollo radicular 11.6 y 12.8 cm respectivamente contra
6.39 y 7.75cm
CUESTIONARIO RESUELTO CON ARGUMENTACIÓN ACADÉMICA.

 1. Que es una simbiosis. ¿Porque es importante en la agricultura?

La simbiosis, significa en griego σύν (sýn) ‘con’, y βίωσις (bíosis), medios de

subsistencia, siendo así, aquella asociación íntima y a largo plazo que existe entre
organismos de dos especies diferentes, ya sean animales o vegetales, de la cual al menos
uno de ellos se beneficia y donde pueden llegar a tener una vida en común.
Por su parte, en relación a la importancia que tiene el proceso de simbiosis en la
agricultura se puede decir que, posee un gran beneficio que se genera dentro del curso
productivo entre planta y microorganismo, es más, dentro del ensayo se evidenció la
simbiosis entre la bacteria y la raíz de la leguminosa elegida, donde se pudo observar
aquella fijación que había de nitrógeno atmosférico logrando establecer una simbiosis
como tal.
De igual manera, se hace esencial en la agricultura, ya que esta es favorecida, puesto
que, produce significativamente más nitrógeno combinado en suelos desnudo y que
carecen de este, no olvidando que el nitrógeno es uno de los nutrientes fundamentales
para el crecimiento de las plantas y en sí, aumentando la producción agrícola, ahora
bien, en la economía muchas industrias con énfasis en la agricultura dependen de la
cosecha de leguminosas, por lo cual, el hecho de que éstas puedan crecer sin abonos
nitrogenados (pues la bacteria los remplazaría) hace que sea posible el ahorro de
fertilizantes.
Por ende, lo que son las leguminosas, parte fundamental de la rama de la agricultura
ha manifestado que también son beneficiadas porque gracias a ellas pueden crecer en
áreas donde otras plantas no podrían desarrollarse.

 2. Cómo se transforman el nitrógeno atmosférico las plantas para incorporarlo y

utilizarlo en su metabolismo?

El nitrógeno atmosférico se transforma como resulta de algunas bacterias y

cianobacterias que poseen esa cualidad de generar u originar una reacción química, por
medio del cual el nitrógeno atmosférico es transformado en amoníaco, éste último es
transformado en nitritos, consecutivamente en nitratos por distintas clases bacterianas
que operan en cada paso, entonces, es allí cuando las plantas añaden el nitrógeno
atmosférico (N2), cuando absorben el nitrógeno del suelo disuelto en agua en forma de
nitratos, estos son utilizados en su metabolismo formando las proteínas.

Ahora bien, casi siempre se debe a la asociación de compuestos del N por los
organismos, más existen autores ven la fijación de N2 como una manera distinta de
asimilación, dicho concepto frecuentemente describe la afiliación de amonio, de nitrato o
de nitrito. Por lo tanto, las formas oxidadas de N, originariamente se reducen por nitratos
o nitritos a amonio el cual ocasionalmente es equiparado en la materia orgánica. Las
plantas absorben NO3 (nitrato) desde el suelo y pueden conservar concentraciones
superiores de este ion en sus células o en la savia xilemática. Para esto, el NO38 (nitrato)
atraviesa la membrana plasmática de células epiteliales de la raíz mediante
transportadores específicos con gasto de ATP (fuente de energía de la planta).
Cuando una planta leguminosa germina, les envía señales estimulantes a las bacterias
y, éstas, una vez que reciben la información, empiezan a moverse hacia las raíces de esa
planta. Entonces, las bacterias empiezan a penetrar las paredes de la raíz de la planta,
estimulando con una sustancia hormonal el crecimiento de los nódulos. En estos nódulos
viven, se reproducen e intercambian nutrientes con la planta. En ese intercambio la planta
da azúcares a las bacterias, y las bacterias toman nitrógeno del aire, lo transforman en
nutriente aprovechable para la planta y de esa manera brindan este alimento básico a la
planta.

1. Es posible la traslocación de compuestos nitrogenados u otros nutrientes desde el

suelo a la planta mediada por microorganismos? En que casos?

4. ¿Porque es necesario menor adición de fertilizante nitrogenado en algunas

especies de leguminosas?

En la actualidad, como bien sabemos, las leguminosas son las únicas plantas que
logran fijar y almacenar el N del aire en sus raíces, y así poder aportar de esta manera
aquel nutriente primordial para el suelo y el desarrollo de la planta como tal, por ejemplo,
existen leguminosas que pueden fijar hasta 300 kg de nitrógeno por ha, permitiendo el
ahorro del fertilizante químico, es por ello que se han ganado el reconocimiento de que
fertilizan el suelo y que tienen gran transcendencia en la activación biológica del suelo.
 En términos generales, se hace necesaria una menor adición de fertilizante nitrogenado
en algunas especies de leguminosas, puesto que ellas por sí mismas tienen la capacidad
de asimilar el nitrógeno atmosférico fijado por bacterias simbióticas que relacionan sus
raíces, siendo necesarias tanto como por su alto valor nutricional como alimentos para
personas y hasta como forrajes para los animales. Dicha fijación biológica de nitrógeno
en los cultivos de leguminosas se hace cada vez más substancial para desarrollar una
producción agrícola más económica y sostenible hoy en día.

5 ¿Cómo los microorganismos asociados inducen el crecimiento de las plantas al

producir sustancias promotoras, protegerlas de la sequía o de los patógenos?

Los microorganismos asociados inducen el crecimiento de las plantas al producir

sustancias promotoras, protegerlas de la sequía o de los patógenos como asociación
simbiótica, debido a que gran parte de los microorganismos habitan alrededor de las
raíces de las plantas, donde las raíces liberan sustancias naturales en el suelo donde crecen
y donde van apoyando en el proceso de absorción de los nutrientes, promoviendo y
manteniendo el desarrollo de territorios microbianos, proporcionándoles el azúcar
procedente de la actividad fotosintética de la planta.
 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

fertilizantes polecam (s.f.). bacillus-subtilis-los-microorganismos-del-suelo. Obtenido

de: https://www.fertilizantespolecam.es/bacillus-subtilis-los-microorganismos-del-
suelo/
Guerrero J. (2.014). Hortalizas. los-beneficios-de-b-subtilis-en-tomates. protección-
de-cultivos/biorracional-orgánico. Obtenido de:
http://www.hortalizas.com/proteccion-de-cultivos/biorracional-organico/los-beneficios-
de-b-subtilis-en-tomates/
Wikipedia.org (2.017). Bacillus_subtilis. Obtenido de:
https://es.wikipedia.org/wiki/Bacillus_subtilis
ANEXOS

TABLA DE DATOS DIARIOS

 Promedios de altura, diámetro del tallo, numero de hojas, nódulos encontrados y largo de la raíz en cuatro tratamientos evaluados en
frijol (Phaseolus vulgaris), bajo condiciones de invernadero.

Numero de Promedio
Promedio Promedio N°
Tratamientos Promedio Altura nodulos Largo de la
Diam/Tallo hojas
encontrados raiz

Suelo desinfectado + semilla inoculada 21,50 0,19 6,0 2 11,06

Suelo desinfectado + semilla no inoculada 19,80 0,27 6,1 1 6,39
suelo no desinfectado + semilla inoculada 20,69 0,25 5,4 4 12,88
Suelo no desinfectado + semilla no
17,95 0,23 5,8 14 7,75
inoculada