TECNICAS BASICAS DE CULTIVO

Medios líquidos

Los medios líquidos se preparan en tubos o matraces que se cubren con tapones de
algodón o tapones especiales. Un cultivo líquido puede ser transferido mediante un asa
microbiológica, un hisopo, pipeta o pipeta Pasteur; el inóculo se deposita dentro del caldo
o medio líquido. En este tipo de cultivos los microorganismos presentan un desarrollo
particular que se manifiesta en la superficie o a través de todo el líquido. Una de las
ventajas que presenta este tipo de cultivo se refiere a la posibilidad de agitarlos acelerando
la velocidad de microorganismos anaerobios, por otra parte, en este tipo de cultivos, las
poblaciones se encuentran suspendidas y es fácil homogenizarlas, lo que permite
estandarizar la concentración del inóculo. La desventaja que presentan, es que en ellos e
difícil detectar contaminación a simple vista.

Medios semisólidos

Los medios semisólidos se preparan en tubos, se inoculan con aguja de siembra (asa recta)
o pipeta Pasteur; en este último caso es necesario calentar el medio y cuando se encuentra
en estado líquido y a una temperatura de aproximadamente 42ºC se agrega el inóculo, se
homogeniza y se deja solidificar. Estos medios se emplean para estudiar la movilidad de
los microorganismos y para favorecer la separación de microorganismos con diferentes
requerimientos de oxígeno.

Medios sólidos

Ilustración 1Medio Solido

Fuente: (Malajovich, 2015).
  Siembra por inmersión

Se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el mismo se vierte el medio de
cultivo previamente fundido. Este método se utiliza para microorganismos aerobios
(Malajovich, 2015).

 Siembra en doble capa

Se procede de la misma manera que por inmersión. Una vez solidificado el medio se
vierte una cantidad extra de medio necesaria para cubrir la capa anterior (generalmente
10 ml. aprox.). Este método se utiliza para microorganismos anaerobios facultativos y
microaerofílicos (Santambrosio, Ortega, & Garibaldi, 2009).

 Siembra en superficie

Se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido, se deja solidificar y se
coloca sobre la superficie el inóculo. Con ayuda de una espátula de Drigalsky se extiende
el inóculo hasta su absorción total por el medio de cultivo. Este tipo de siembra se
recomienda para microorganismos aerobios estrictos (Percy, 2015).

 Siembra en estría

Se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido y se deja solidificar.

Existen distintas técnicas para la siembra en estrías, el objeto es obtener colonias aisladas

 Técnica A

Consiste en cargar el ansa con la muestra y hacer estrías paralelas en la cuarta parte de la
superficie de la placa, se quema el ansa, se enfría, se gira la placa a 90° y se vuelve a
estriar tocando 3 o 4 veces el área sembrada inicialmente y cubriendo otro cuarto de la
placa. Por último, sin quemar el ansa, se estría el resto de la superficie sin sembrar
(Malajovich, 2015).

Ilustración 2 Técnica A
Fuente: (Malajovich, 2015).
  Técnica B

Con el ansa cargada se hacen 3 o 4 estrías; se quema el ansa, se hacen 3 o 4 estrías

perpendiculares a las anteriores, se quema el ansa y se repite el procedimiento hasta agotar
la superficie de la placa (Malajovich, 2015).

Ilustración 3 Técnica B
Fuente: (Malajovich, 2015).

Siembra en agar en tubo inclinado o bisel: en este caso se colocan 5 ml de medio de

cultivo fundido y estéril, se inclina el tubo y se deja enfriar (Malajovich, 2015).

Ilustración 4 Siembra Agar

Fuente: (Malajovich, 2015).

El inóculo se siembra, con ayuda de ansa, de la siguiente manera:

 Ilustración 5 siembra con ayuda de un ansa
Fuente: (Santambrosio, Ortega, & Garibaldi, 2009).

• En profundidad con ansa de punta: se pica con el ansa el cultivo a sembrar y se

introduce mediante punsión en el medio contenido en la parte inferior del tubo.

Ilustración 6 Ansa de punta

Fuente: (Santambrosio, Ortega, & Garibaldi, 2009).

• En superficie con ansa de aro: se pica con el ansa el cultivo a sembrar y se esparce el
mismo sobre la superficie en bisel en forma de zigzag
 Ilustración 7Ansa de aro
Fuente: (Santambrosio, Ortega, & Garibaldi, 2009).

PROTOCOLO PARA LA TOMA DE MUESTRA DE AGUA

Para análisis microbiológico se utilizarán frascos con capacidad de 250 a 300 ml, de
plástico o vidrio, esterilizados, con tapa hermética y en lo posible de boca ancha. También
se debe tener presente al seleccionar los envases que este tipo de muestras debe
mantenerse refrigerada (sí o sí) hasta su llegada al laboratorio y procesamiento.
Normalmente se suelen utilizar envases esterilizados que se pueden adquirir en farmacias
a muy bajo costo con una capacidad menor a la recomendada.

Toma de muestra para análisis microbiológico

Precauciones para la toma de la muestra en función de su origen.

 Agua de perforación, pozo calzado o de red

Donde el material lo permita, se debe calentar el grifo, canilla o caño que viene
directamente del mecanismo de bombeo o del depósito principal durante el tiempo
necesario para que el agua provenga directamente de la fuente (deseable) o del depósito
principal. Para el calentamiento se puede utilizar un mechero o un hisopo con algodón
bien embebido en alcohol. Cuando el agua a muestrear se encuentre clorinada, no debe
olvidarse el agregado de Tiosulfato de Sodio, o utilizar envases que lo contengan en
pastilla, con la finalidad de neutralizar los restos de cloro.

 Agua que proviene de un recurso superficial o de un depósito

En el caso particular de aguas superficiales o de depósitos de almacenamiento (río, canal,

aljibe, cisterna, etc.) es conveniente lavarse previamente las manos con jabón para
manipular los recipientes esterilizados y tomar la muestra.
Pasos prácticos para la toma de la muestra para análisis microbiológico

1) El envase a utilizarse deberá estar esterilizado y durante la toma debe prestarse atención
a mantener una adecuada asepsia para evitar la contaminación accidental de la muestra.

2) Rotular el envase o verificar que el rótulo sea el correcto.

3) Si el grifo, canilla o caño es metálico quemar con un mechero donde sale el agua (si el
material es plástico realizar el mismo procedimiento, pero un menor tiempo para que no
se deteriore el material plástico), luego abrir el grifo, canilla o activar el mecanismo de
bombeo y dejar salir el agua el tiempo suficiente hasta que se esté seguro que es agua de
la fuente de agua o depósito, de manera que el chorro no sea intenso.

4) Abrir el recipiente estéril, evitando todo contacto de los dedos con la boca e interior
del mismo y sosteniendo la tapa de manera que ésta mire para abajo.

5) Llenar el frasco dejando una cámara de aire. Durante el llenado es conveniente tener
la precaución de mantener el frasco inclinado a 45° para evitar la introducción de
partículas externas.

6) Tapar inmediatamente asegurando un cierre perfecto.

7) La muestra debe ser guardada en una conservadora obscura y con hielo bien limpia y
que no contenga otros elementos propios del muestreo, o en la parte de abajo de una
heladera. Nunca poner la muestra en la hielera o en un freezer. En cualquier caso también
el mecanismo de conservación (conservadora, heladera) debe tener la mayor higiene
posible y en el caso de la conservadora es indispensable no guardar otros elementos allí
(comidas, bebidas, etc.)

8) Trasladarla lo más pronto posible a Laboratorio (tiempo máximo 2 días y

correctamente refrigerada en lugar obscuro). Ideal es llegar al Laboratorio en unas pocas
horas

Bibliografía
Malajovich, A. (2015). INTRODUCCIÓN A LAS TÉCNICAS MICROBIOLÓGICAS. Recuperado el 14
de Noviembre de 2018, de Biotecnología: enseñanza y divulgación:
https://bteduc.com/roteiros_es/2015_Tecnicas_microbiologicas.pdf
Percy, W. (14 de Septiembre de 2015). Siembra microbiologica. Recuperado el 14 de
Noviembre de 2018, de https://www.slideshare.net/PERCYWILLIAMS2/siembra-
microbiologica

Santambrosio, E., Ortega, M., & Garibaldi, P. (2009). Universidad Tecnica Nacional. Recuperado
el 14 de Noviembre de 2018, de FACULTAD REGIONAL ROSARIO:
https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/prac
ticoIII.pdf