PRACTICA Nº 3

DETERMINCAION BIOQUÍMICA DE OXIGENO (DBO)

1. INTRODUCCION

La demanda bioquímica de oxígeno (DBO) es una prueba usada para la determinación de los
requerimientos de oxígeno para la degradación bioquímica de la materia orgánica en las aguas
municipales, industriales y en general residual; su aplicación permite calcular los efectos de las
descargas de los efluentes domésticos e industriales sobre la calidad de las aguas de los cuerpos
receptores. Los datos de la prueba de la DBO se utilizan en ingeniería para diseñar las plantas de
tratamiento de aguas residuales.

La prueba de la DBO es un procedimiento experimental, tipo bioensayo, que mide el oxígeno

requerido por los organismos en sus procesos metabólicos al consumir la materia orgánica presente
en las aguas residuales o naturales. Las condiciones estándar del ensayo incluyen incubación en la
oscuridad a 20ºC por un tiempo determinado, generalmente cinco días. Las condiciones naturales de
temperatura, población biológica, movimiento del agua, luz solar y la concentración de oxígeno no
pueden ser reproducidas en el laboratorio. Los resultados obtenidos deben tomar en cuenta los
factores anteriores para lograr una adecuada interpretación.

Las muestras de agua residual o una dilución conveniente de las mismas, se incuban por cinco días
a 20ºC en la oscuridad. La disminución de la concentración de oxígeno disuelto (OD), medida por
el método Winkler o una modificación del mismo, durante el periodo de incubación, produce una
medida de la DBO.

La demanda de oxígeno bioquímico DBO expresa la cantidad de oxígeno que se consume por
procesos bioquímicos durante la degradación de ingredientes orgánicos. Mediante el análisis de
DBO se determinan los compuestos orgánicos degradables. Esto diferencia el DBO de la demanda
química de oxígeno (DQO) que determina adicionalmente sustancias orgánicas no degradables. La
determinación DBO constituye un importante instrumento en la determinación de la influencia de
aguas residuales domésticas y aguas residuales industriales sobre depuradoras y cauces de
evacuación.

2. METODO

Método volumétrico WINKLER

3. INTERFERENCIAS

1.- Existen numerosos factores que afectan la prueba de la DBO, entre ellos la relación de la materia
orgánica soluble a la materia orgánica suspendida, los sólidos sedimentables, los flotables, la
presencia de hierro en su forma oxidada o reducida, la presencia de compuestos azufrados y las
aguas no bien mezcladas. Al momento no existe una forma de corregir o ajustar los efectos de estos
factores.

2.-DBO carbonácea contra nitrogenácea. La oxidación de las formas reducidas del nitrógeno como
amoniaco y nitrógeno orgánico, mediada por los microorganismos, ejercen una demanda
nitrogenácea, que ha sido considerada como una interferencia en la prueba; sin embargo, esta puede
ser eliminada con la adición de inhibidores químicos. Cuando se inhiba la demanda nitrogenácea de
oxígeno, reportar los resultados como demanda bioquímica de oxígeno carbonácea (DBOC5);
cuando no se inhiba, reportar los resultados como DBO5.

3.- Requerimientos de dilución. Si el agua de dilución es de baja calidad, su DBO aparecerá como
DBO de la muestra, efecto que será amplificado por el factor de dilución, y el resultado tendrá una
desviación positiva. El método de análisis debe incluir agua de dilución de verificación y agua de
dilución como blanco para establecer su calidad, mediante la medición del consumo de oxígeno con
una mezcla orgánica conocida, generalmente glucosa y ácido glutámico. La fuente del agua de
dilución puede ser: destilada a partir del agua de grifo, o agua libre de sustancias orgánicas
biodegradables o bioinhibitorias tales como cloro o metales pesados. El agua destilada puede
contener amoniaco o compuestos orgánicos volátiles; el agua desionizada también puede estar
contaminada con compuestos orgánicos solubles lixiviados del lecho de la resina; el uso de
destiladores con conductos o accesorios de cobre en las líneas de agua destilada pueden producir
agua con cantidades excesivas de cobre, que actúa como biocida.

4. FUNDAMENTO

Las muestras de agua residual o una dilución conveniente de las mismas, se incuban por cinco días
a 20 días a 20ºC en la oscuridad. La disminución de la concentración de oxígeno disuelto, medida
por el método de WINKLER o una modificación del mismo, durante el periodo de incubación,
produce una medida de DBO5.

Así si hay materia orgánica fácilmente biodegradable en una muestra, una población de
microorganismos aeróbicos adicionada a esta, deberá crecer sin dificultad si hay un crecimiento
apreciable en la población de estos microorganismos, entonces ocurrirá un descenso en la
concentración del oxígeno disuelto del sistema. Por tanto, el descenso en la concentración de
oxígeno disuelto en la muestra, es directamente proporcional a su concentración de materia
orgánica.- la magnitud de este descenso es lo que se conoce como DBO

𝑀𝑖𝑐𝑟𝑜𝑜𝑟𝑔𝑎𝑛𝑖𝑠𝑚𝑜𝑠
𝑀. 𝑂. +𝑂2 𝐶𝑂2 + 𝐻2𝑂
𝑎𝑒𝑟𝑜𝑏𝑖𝑐𝑜𝑠
En la medición se compara el oxígeno disuelto inicial en la muestra, en el existente en una muestra
similar que ha sido incubada durante 5 días, a unas determinadas condiciones preestablecidas.- ya
que la medición involucra la participación de organismos vivos, se requiere especial cuidado , tanto
en la realización de las mediciones como en la interpretación de los datos.- por ello es
absolutamente indispensable realizar las mediciones, como mínimo por triplicado y correr
paralelamente ¨blancos de reactivo¨ y muestras control.

5. OBJETIVO

Determinar la demanda bioquímica de oxigeno (DBO5) en una muestra de agua residual.

6. MATERIAL Y EQUIPO

 Botellas de incubación para DBO5

 Matraces volumétricos de 1000 ml
 Matraces volumétricos de 100 ml
 Soporte con pinzas para bureta
 bureta de 25 ml
 Matraces Erlenmeyer de 500 ml
 Pipeta de 20 o 25 ml
 Frasco gotero

6.1 SOLUCIONES Y REACTIVOS

1. Sulfato manganoso (MnSO44H2O, MnSO42H2O, MnSO4H2 O) disolver en agua de 480 g

de sulfato manganoso, 400g de MnSO42H2O, 364g de MnSO4H2 O, filtrar y diluir a 1L.
esta disolución debe usarse siempre y cuando no de color al adicionarle una disolución
acida de yoduro de potasio en presencia de almidón
2. Hidróxido de potasio (KOH) o sodio NaOH
3. Disolución alcalina de yoduro – acida de sodio. Disolver en agua 500g de NaOH 135g de
NaI, diluir a 1 L con agua destilada. A esta disolución agregar 10 gotas de azida de sodio
disueltos en 40ml de agua. Esta disolución no debe dar color con la disolución de almidón
cuando se diluya y acidifique
4. Disolución indicadora de almidón disolver 2 g de almidón soluble y 0,2g de ácido salicílico
como conservador en 100ml de agua destilada caliente. Mantener en refrigeración siempre
que no esté en uso.
5. Disolución estándar de tiosulfato de sodio (aprox. 0,025M) pesar aproximadamente 6,205g
de tiosulfato de sodio disolver en agua destilada y diluir a1L. agregar 1g de NaOH en
lentejas. Titular con una disolución de Dicromato de potasio 0,0 25 N, usando la solución
de almidón, como indicador (1ml de la disolución valorada de tiosulfato de sodio 0,025M
es equivalente a 1mg de oxígeno disuelto)
6. Ácido sulfúrico concentrado (H2SO4)

7.-Procedimiento

7.1PRE -TRATAMIENTO DE LA MUESTRA

1. Si la muestra ha sido clorada, siémbrese el agua de dilución

2. Muestras sobresaturadas con OD en aguas frías o en aguas donde se produce la fotosíntesis,
es posible encontrar muestras que contienen más de 9mgOD/L a 20ºC, calentar la muestra
aproximadamente a 20 + C en frascos parcialmente llenos mientras se agita con fuerza o
se airea con aire limpio.
7.2INCUBACION

Incube a 20ºC + 1ºC las botellas deDBO5 que contengan las muestras con diluciones deseadas, los
controles de siembra y los blancos de reactivos.

7.3DETERMINACIÓN DEL OD INICIAL

1) Para fijar el oxígeno adicionar a la botella de DBO5 que contiene la muestra, 2ml de sulfato
manganosos con una pipeta graduada cuidando que la punta de la misma penetre
aproximadamente 0.5cm en el seno del agua.
2) Agregar 2ml del reactivo álcali- yoduro-azida, en la misma forma que el reactivo anterior.
3) Tapar la botella de DBO (evitar burbuja ) y agitar vigorosamente y dejar sedimentar el
precipitado ( al menos a la mitad del frasco)
4) Añadir 1ml de ácido sulfúrico concentrado, volver a tapar y mezclar por inversión hasta
completa disolución del precipitado
5) Titular 100ml de la muestra con la disolución de tiosulfato 0.025N agregando el almidón
hacia el final de la titulación, cuando se alcance un color amarillo palido.
6) Continuar hasta la primera desaparición del color azul. Después de 5dias de incubación
determínese el OD en las diluciones de la muestra, en los controles y e los blancos.

8. CRITERIO DE AVALUACION

9. REPORTE DE RESULTADOS

Volumen de la muestra (ml)………………………

Mililitros gastados del titulante (ml)……………….

Concentración del titulante (N)…………………….

Concentración DBO (mg/L)……………………….