FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

PROCESO PLAN CURRICULAR

MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL

INFORME DE LABORATORIO

Asignatura: Microbiología Industrial Nota:

Número de práctica: 2
Fecha de realización: 2018//10/02 Fecha de 2018/11/09
entrega:
Integrantes: Caizapanta Estalin, Guerrón Evelyn, Herrera Jenny, Vásquez Stefanía
Grupo N°: C2

1. Título: Nutrición de los microorganismos. Preparación de un medio de cultivo para el

microorganismo Lactococos lactis Cremoris y Lactococos lactis subsp Lactis presente
en el queso crema de la marca Tony.

2. Objetivos

2.1. Objetivo general:

● Preparar medios de cultivo con nutrientes mínimos a partir de sus componentes básicos,
para favorecer el crecimiento de Lactococos lactis Cremoris y Lactococos lactis subsp
Lactis presente en el queso crema de la marca Tony.

2.2. Objetivos específicos:

● Determinar las cantidades de los componentes de un medio para las bacterias

Lactotocos presente en el queso crema de la marca Tony.
● Comparar el aislamiento de Lactococos en el agar PCA y MRS
● Determinar si hubo crecimiento de Bacillus Clausii obtenido de la Enterogermina
inoculados en la escala McFarland 0,5 M en el medio de cultivo preparado.

3. Fundamento teórico:

3.1. Descripción del microorganismo.

Lactococcus lactis, es un microorganismo gram positivo, no esporulado de

fermentación ácida láctica de metabolismo homofermentativo, produce ácido láctico a
partir de azúcares, tiene forma de cocos que generalmente se encuentra en la leche y
productos lácteos. Produce nisina como compuesto antimicrobiano. (González-
Martínez, 2003)
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Bacillus clausii, es un gram positivo, estrictamente aeróbico, formador de esporas,

produce efectos beneficiosos en el tracto gastrointestinal, mediante la liberación de
compuestos antimicrobianos que modulan de la actividad inmune aumentando la
producción de inmunoglobulina secretada en el organismo. (MacFaddin, 2003)

3.2. Medios de cultivo utilizados.

Es el conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean

condiciones necesarias para el desarrollo del microorganismo.
El AGAR AGAR. Utilizado como agente gelificante para dar solidez al medio de
cultivo, su composición es dominante en un polisacárido que se obtiene de algas
marinas, no es utilizado como nutriente.
FUENTE DE PROTEÍNA Y FUENTE DE CARBONO. Se utilizó el lactosuero que se
produce como subproducto de la mayoría de las industrias queseras y debido a su alto
contenido de lactosa y diversas proteínas se considera una buena fuente de carbono y
nitrógeno. (M. Peñuela, 2001) Existen varios tipos de lactosuero: el primero,
denominado dulce, está basado en la coagulación por la renina a pH 6,5; el segundo,
llamado ácido, resulta del proceso de fermentación o adición de ácidos orgánicos o
ácidos minerales para coagular la caseína como en la elaboración de quesos frescos
(Panesar, 2007).
Como FACTOR DE CRECIMIENTO se utiliza el complejo B del plátano ya que son
sustancias que deben ser aportadas preformadas, porque la bacteria las requiere, pero no
puede sintetizarlos a partir de nutrientes ya sea por falla o ausencia de una vía
metabólica determinada, el complejo B ayuda a que el microorganismo cumpla sus
funciones correctamente y lleve a cabo sus tareas básicas del día a día.

4. Formulación:

Tabla Nº1. Composición elemental aproximada de la célula microbiana

Elemento Porcentaje del peso seco
Carbono 50
Oxígeno 20
Nitrógeno 14
Hidrógeno 8
Fósforo 3
Azufre 1
Potasio 1
(Stainer, 1977)
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Tabla Nº2. Componentes principales para la formulación del Agar destinado al

crecimiento de Lactococos.

FUENTE ALIMENTO SUSTRATO

Carbono y energía Suero Carbohidrato (Lactosa)
Nitrógeno Suero Proteína (Caseína y otras proteínas)
Factor de crecimiento Plátano Vitamina K
Inhibidor Mandarina Ácido ascórbico

● A continuación, se describirán los componentes principales de cada uno de los

componentes:
Tabla Nº3. Tabla de los componentes principales del suero de leche

Componentes % Porcentaje
Agua 87,56
Carbohidratos (lactosa) 5
Ceniza 6,03
Proteínas 0,6
Caseína 0,003
Grasa 0,10
Minerales: K, Ca ,P, Na , ------
Mg
(Kosikowski & Mistry, 2018)
Tabla N°4. Tabla de los sustratos principales del plátano y la mandarina
ALIMENTO COMPONENTES mg
Plátano Potasio K 1491
Mandarina Ácido Ascórbico 26,7
(USDA, 2018)
5. Cálculos

FORMULACIÓN
La formulación se realizó con el propósito de identificar el crecimiento Lactococcus
lactis Cremoris o Lactococcus lactis subsp presentes en el Queso crema Tony ambos
pertenecientes a la especie Lactococcus.
● Para la formulación del agar se consideró la formulación de 500 mL de agar de los
cuales la presencia de agua puede corresponder a 80 % de agua y 20 % de solutos (
(Stainer, 1977)
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Obtención de Lactosa
Partiendo de la consideración que el suero de leche contiene 5% de lactosa se estable el
porcentaje de carbono.
20 g de solutos 100 % de la solución
X 50% de la solución
X= 10 g de solutos que corresponden a la Lactosa
100 mL de suero 5g de Lactosa
X 10g de Lactosa
X= 200mL de suero para 500 mL de solución

Obtención de factores de Crecimiento (Potasio)

Se agregó 0,6 gramos de potasio tomando que está presente en forma de sales como
referencia la Tablaº N 4 (Stainer, 1977)

Obtención de los Inhibidores

Inicialmente se planteó el uso de mandarina proveedor del sustrato ácido ascórbico
como inhibidor y reducir el pH neutro =6,9 del suero teóricamente a un pH ácido de 4
óptimo para el crecimiento de Lactococos, sin embargo luego de la dilución de 200 mL
de suero se alcanzó el pH requerido sin la necesidad de agregar el ácido ascórbico.

6. Resultados

Tabla N°5. Composición del agar expresado en porcentaje de materia

FUENTE SUSTRATO CANTIDAD PORCENTAJE
Agua 300 mL 80%
Fuente de carbono y Lactosa 200mL 15,7%
energía
Factor de crecimiento Potasio 0,6g 0,12%
Gelificante Agar-Agar 20g 4%

Nota: La cantidad de agar empleado no gelificó por lo cual fue necesario duplicar el
porcentaje de Agar - Agar del 2% al 4% .
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Tabla N°6. Aislamiento de Lactococos en el agar PCA y MRS

AGAR PCA AGAR MRS

Crecimiento: Negativo Crecimiento: Negativo

Descripción: No se observa crecimiento
del microorganismo aislado, solo se
puede apreciar unos punto blancos en el 4
cuadrante causado por una contaminación
en el medio.
Descripción: No se observó crecimiento
del microorganismo solo se puede
apreciar un olor de lácteo por este motivo
tomamos un inóculo de este medio y se
procedió a inocular en caldo BHI.

Tabla N°7. Propagación del inóculo del medio MRS al caldo BHI.

Crecimiento: Negativo

Descripción:

Durante el proceso de siembra del Lactococos en el caldo

de BHI no se observó el enturbiamiento del medio por lo
tanto no se procedió a continuar con el microorganismo.
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➢ MEDIO DE CULTIVO
Posteriormente se cambió el microorganismo a Bacillus Clausii obtenido de la
Enterogermina inoculados en el agua estéril hasta obtener la escala McFarland 0,5 M en
el medio de cultivo preparado en el laboratorio. Se procedió a sembrar en el medio
formulado en donde se obtuvieron los siguientes resultados.

Tabla N°8. Resultados obtenidos del Bacillus Clausii obtenido de la Enterogermina

inoculados en el agua estéril hasta obtener la escala McFarland 0,5 M en el medio de
cultivo formulado.

AGAR ANTES DE INOCULAR AGAR DESPUÉS DE INOCULAR

Resultado: Crecimiento Negativo

Descripción: El medio es color blanco Descripción: No se observa el
pálido con puntos blancos, propio del crecimiento de microorganismos.
medio.

7. Discusión de resultados:

En la presente práctica se preparó un medio de cultivo, para favorecer el crecimiento de

Lactococos lactis Cremoris y Lactococos lactis subsp Lactis presente en el queso
crema de la marca Tony; se utilizó como fuente de carbono y energía además de
nitrógeno el suero de leche (lactosa), como factor de crecimiento el plátano (vitamina
K) y gelificante agar-agar, no se utilizó el ácido ascórbico presente en la mandarina
debido a que el pH bajo que presento el medio siendo el óptimo 4.
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El medio preparado presentó un precipitado después de la esterilización esto se debió al

uso del suero de leche provocando una desnaturalizando de las proteínas como las
lactalbúmina y lactoglobulina. Al provocarse esta precipitación no afecta el valor
nutritivo del medio, pero pueden hacer difícil la observación y la valoración cuantitativa
del desarrollo microbiano. (Stainer, R, 1977 pg 93).

El queso crema de la marca Tony presenta Lactococos lactis Cremoris este es un

microorganismo que ayuda a la palatabilidad de los quesos además en sus ingredientes
(Anexo Nº1) se declara la presencia de preservantes (Sorbato de potasio), esto va a
inhibir el crecimiento, teniendo por lo tanto microorganismos no viables, en la práctica
no se observó crecimiento en el agar PCA ni MRS (Tabla Nº6).

Como no se obtuvo microorganismos viables del queso crema de la marca Tony se

procedió a cambiar de microorganismo utilizando el Bacillus Clausii presente a la
Enterogermina. Para elaborar un medio de cultivo para un microorganismo debe tener
una mezcla equilibrada de los nutrientes requeridos para este, a concentraciones que
permitan un buen crecimiento (Stainer, R, 1977 pg 86). Por lo tanto el medio que se
preparó a partir de los componentes antes mencionados fue para el Lactococos al
cambiar de microorganismo al Bacillus Clausii no tuvo los requerimientos
nutricionales para su crecimiento Tabla N º8, teniendo como resultado microorganismos
no viables.

8. Conclusiones:

Se preparó un medio con nutrientes mínimos a partir de sus componentes básicos, para
favorecer el crecimiento como el suero de leche (fuente de carbohidrato y nitrógeno),
plátano (factor de crecimiento) , agar-agar para el microorganismo Lactococos lactis
Cremoris y Lactococos lactis subsp Lactis presente en el queso crema de la marca
Tony, donde se evidencia la presencia de microorganismos no viables, debido a la
composición del queso crema (presencia de conservantes).

Se determinó las cantidades de los componentes de un medio para las bacterias

Lactotocos presente en el queso crema de la marca Tony, las cuales fueron de agua 300
mL siendo su porcentaje en materia del 80%, lactosa 200 mL aportando 15,7% de la
composición final, potasio 0,6 g, agar-agar 20 g aportando el 4% de la composición
final del medio.
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Se comparó el aislamiento de Lactococos en el agar PCA y MRS de los cuales PCA

hubo una contaminación del medio no hubo crecimiento de colonias de Lactococos, en
MRS se pudo apreciar un olor lácteo en el medio pero no se evidenció la presencia de
colonias.

Se determinó que no hubo crecimiento de Bacillus Clausii obtenido de la

Enterogermina, por lo tanto el medio formulado no es un medio óptimo para el
crecimiento de este microoganismo.

9. Cuestionario:

Mencione 3 microorganismos homofermentativos y 3 microorganismos

heterofermentativos.

HETEROFERMENTATIVAS:
Lactobacillus buchneri es el mejor ejemplo de un heterofermentador. En la
fermentación heteroláctica los Lactobacillus están formados por: Lactobacillus
plantarum, Lactobacillus ramnosus, Lactobacillus kéfir, Lactobacillus reuteri. (Parra,
2010); (Pérez, 2006 ).

HOMOFERMENTATIVAS:
La especie homofermentativas más común es Lactobacillus plantarum. Otras especies
comunes homofermentativas incluyen Lactobacillus o Pediococcus y Enterococcus
faecium.
Bacterias ácido-lácticas homofermentativas: Mesófilas: Lactococcus lactis subesp.
Lactis; Lactococcus lactis subesp. Cremoris (Rodríguez, 2012).

9. Bibliografía:

▪ González-Martínez, B. E.-T.-S. (2003). Bacteriocinas de probióticos. Salud Pública y

Nutrición, 2, 4.
▪ M. Peñuela, G. V. (2001). Evaluación de medios de cultivo preparados a partir de suero
de leche enriquecido, para la producción de ácido láctico, con Lactobacillus plantarum y
Lactobacillus casli. Facultad de Ingeniería, 24, 35-39.
▪ MacFaddin, J. F. (2003). Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de
importancia clínica. Ed. Médica Panamericana.
▪ Panesar, P. K. (2007). Bioutilización de suero para la producción de ácido láctico.
▪ Kosikowski, F., & Mistry, V. (2018). Cheese and Fermented Milk Foods. Connecticut. .
▪ Stainer, R. (1977). Microbiología . Madrid .
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▪ USDA. (Abril de 2018). Base de datos nacional de nutrientes del Servicio de

Investigación Agrícola del Departamento de Agricultura de los Estados Unidos .
Obtenido de
https://ndb.nal.usda.gov/ndb/foods/show/09041?fgcd=&manu=&format=&count=&m
▪ Parra, R (2010). Bacterias acido lácticas papel funcional en los alimentos. Recuperado
de http://www.scielo.org.co/pdf/bsaa/v8n1/v8n1a12.pdf. Obtenido el 08/11/18.
▪ Pérez, M. (2006 ). Inoculantes Microbiales para ensilaje. Recuperado de
https://fyi.uwex.edu/forage/files/2014/01/Microbial-Inoculants-for-Silage-Espanol.pdf.
Obtenido el 08/11/18.
▪ Rodríguez, E (2012). Industrias alimentarias, productos lácteos fermentados.
Recuperado de
https://edgardopedullarodriguez.wordpress.com/tag/heterofermentativas/. Obtenido el
08/11/18.

10. ANEXO

ANEXO Nº1. Descripción de los microorganismos presentes en el Queso crema Tony

Microorganismos

Lactococos lactis
Cremoris
Lactococos lactis
subsp Lactis
presentes

ANEXO Nº2. Descripción de la Enterogermina

Microorganismos

Bacillus Clausii