INFORME DE MICROBIOLIGIA

PRESENTADO A:
LUIS FAMER LAMILLA

PRESENTADO POR:
Cristian Andrés Muñoz Rodríguez
Código: 1083918435

GRUPO 2

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD

PITALITO HUILA
29/10/2018
INTRODUCCION
En el siguiente informe se entrará a comprender el significado de la microbiología,
ya que es la ciencia que se dedica al estudio de los microorganismos. Para poder
entender de una forma clara realizaremos una serie de experimentos que se
realizaran iniciando con técnicas de desinfección del laboratorio dejándolo limpio
de otro microorganismo que nos pueda interrumpir los cultivos que vamos a
trabajar.
Practica a: Crecimiento de mohos en el pan.
Se utilizó dos clases de pan para este procedimiento:
 Se realizó la disolución de 2.5 g de azúcar en 20 ml de agua destilada
 Se adicionaron 20 gotas al pan
 Se introdujo la muestra del pan en una bolsa transparente y se incubo a
una temperatura de18-25°C.
PAN CASERO PAN INDUSTRIAL
Disolución 2.5 g de azúcar + 20 ml de agua destilada

Crecimiento de mohos del pan después de la incubación:

Moho del pan que creció después de la incubación

 Se utilizó un trozo de cinta adhesiva sobre el moho que creció del pan, para
obtener muestra del moho, se agregó una gota de lacto fenol sobre un
portaobjeto y posterior a ello se pasó la cinta suavemente sobre este.

 Observación en el microscopio utilizando 1 objetivo:

OBJETIVO 40X

Interpretación de los resultados obtenidos del crecimiento de mohos en el

pan
Después de haber estado la muestra de pan en la incubadora durante 7 días, se
procedió a observar los resultados de la muestra, se pudo observar que la muestra
de pan contenía un crecimiento de moho negro, como una capa de pelusa negra
que cubría una gran parte, que es un hongo perteneciente a las especies
saprofitas, que viven y forman tapices sobre el pan, frutas u otros alimentos en
descomposición; las esporas se encargan de posar en pan y el crecimiento del
moho comenzara. Este tipo de hongo se puede reproducir de roma asexual y
sexual, la reproducción asexual es por esporas, que son las unidades
reproductoras que se encargan de hacer crecer el pan, su reproducción sexual se
da por la unión de hifas con cepas que forman esporas y se repite nuevamente el
ciclo sexual. Este tipo de hongo también se forma mediante colonias de
crecimiento rápido que cubren la superficie del pan, con un crecimiento bastante
rápido.
Nombre del moho negro del pan: Rhizopus stolonifer
Familia: Mucoraceae
Reino: hongos
Género: Rhizopus

Practica b: Observación de levaduras

 Se realizó la disolución de 2.5 g de azúcar y 5g de levadura en 20 ml de
agua destilada
 Se incubo la disolución a 37°C por 15 minutos
 Se tomó la muestra de la disolución y se colocó sobre un portaobjetos, se
adiciono una gota de azul de metileno y se dejó actuar por 3 minutos.

Disolución de la levadura Incubación

Antes

Después
Disolución de 2.5 g de azúcar, 5 g de levadura y 20 ml de agua destilada
Se adiciono azul de metileno a la muestra de levadura

 Observación en el microscopio utilizando 4 objetivos:

OBJETIVO 4X
Se puede observar presencia de
gemas en la levadura grandes, pared
y núcleo.

OBJETIVO 10X
Se puede observar menos presencia
de gemas de levadura, un poco
borrosas, grandes.
OBJETIVO 40X
Se puede observar poca presencia de
gemas más pequeñas y dispersas.

OBJETIVO 100X
Se puede observar levemente muy
poca presencia de gemas, ya que el
objetivo es mucho más cercano y solo
deja ver escasa presencia de
estructura celular.

Gemas de las levaduras

Interpretación de los resultados obtenidos por la observación de levaduras

Se pudo observar que después de 15 minutos estando la muestra en la
incubadora a una temperatura de 37°C, se obtuvo que la levadura había crecido
notablemente su volumen, debido a la fermentación que se provocó por diversos
factores, se le conoce como el hongo del azúcar (levadura de panadería), se
utiliza para la prelación del pan para que este se esponje o se levante, es por ello
que es necesario tener la muestra tapada o incubada para que el calor cumpla con
el ciclo de fermentación, donde pudimos observar como la levadura actúa con el
agua y con el azúcar de una manera esporádica.
En los objetivos se pudo observar que a menor tamaña de objetivo se observaban
gran cantidad de gemas en la levadura, y a mayor aproximación se observaba que
su tamaño cambiaba gemas más pequeñas, más dispersa y de menor cantidad
Nombre de la levadura de pan: Saccharomyces cerevisiae
Reino: Fungí
Familia: Saccharomycetaceae
Género: Saccharomyces

Practica c: Observación de bacterias prebióticas

 Se tomó una muestra de yogurt y se mezcló con una gota de agua destilada
 Se extendió la muestra y posterior a ello se secó con la ayuda del mechero
 Se cubrió la muestra con etanol durante 10 s y luego se escurrió el alcohol
adicionado y se dejó secar a temperatura ambiente
 Una vez seca se cubrió con azul de metileno por 2 minutos y se dejó secar
nuevamente

 Observación en el microscopio utilizando 3 objetivos:

OBJETIVO 4X
Se pudo observar gran
presencia de cocos y bacilos
muy juntos
 OBJETIVO 10X
Se pudo observar presencia de
cocos y bacilos muy pocos y
demasiado dispersos

OBJETIVO 40X
Se pudo observar presencia de
bacilos y cocos muy dispersos

COCOS Y BACILOS

Interpretación de resultados obtenidos de bacterias prebióticas

Se pudo obtener que en el objetivo 4x, hay gran presencia de cocos y bacilos de
una forma muy clara, que se pudieron identificar con gran facilidad debido a su
tamaño. Para el objetivo 10x, se observó poca presencia de cocos y bacilos y
demasiado dispersos debido a la aproximación más cercana, tuvimos dificultad
para identificarlos debido a que casi no se observaban con gran facilidad; para el
lente 40x, pudimos observar que los cocos y bacilos se encuentran dispersos, más
pequeños donde los pudimos identificar.
 ACTIVIDADES POR ESTACIONES

Estación 4: Aislamiento de bacterias habitadas en la piel

 Se marcó una división en la caja de Petri con AN

 Se humedecían un escobillón con agua destilada
 Se pasó el escobillón por toda la mano sin lavar
 Se extendió el escobillón sobre la mitad de la caja de Petri con AN
 Nos lavamos las manos con jabón
 Se repitió el mismo procedimiento y se realizó el extendido sobre la otra
mitad de la caja de Petri con AN
 Se incubo por 2 días a 37°C

 Registro fotográfico del procedimiento:

Procedimiento antes de la incubación

Cajas de Petri con la mitad (manos sin lavar)

 Cajas de Petri con la mitad (manos lavadas)

 Resultados después de la incubación : Registro fotográfico

  Análisis de bacterias habitantes en la piel en relación al estado anterior y
posterior al lavado

En el estado anterior, se realizó la toma de muestra de bacterias habitantes en la

piel, sin lavar las manos en la mitad de la caja de Petri, posterior a ello se realizó
el lavado de la mano, y se tomó nuevamente la muestra en la otra mitad de la caja
de Petri, para observar si todavía quedaban bacterias que habitaban en la piel.
Después de haber dejado en la incubadora durante 2 días, se pudo observar que
no hubo crecimiento de agentes bacterianos, debido a los diversos factores,
químicos como el pH, físicos, microbianos que tuvieron interferencia para que el
crecimiento bacteriano se realizara y no se pudo observar ni establecer un análisis
más claro sobre el crecimiento de bacterias ni hongos en la piel.
Estación 1: Bacterias en el suelo.
• Se adiciona 10 g de suelo y se mezcló con 90 mL de agua destilada
estéril. Y se Agito gentilmente por 10 minutos e incubo a 37 °C por
30 min. Esta preparación se llamó 10˚
• Se Agito la dilución 10. Se tomaron 1 mL y se mezcló con 9 mL de
agua destilada estéril. Esta correspondió a la dilución 10-1.
• Se Repitió el paso anterior utilizando la dilución 10-1como partida
para preparar la dilución 10-2. hasta obtener la dilución 10-4.
• Se Tomo 0.1 mL de la dilución 10-4 y se dispenso en una caja de
Petri con agar nutritivo (AN). Se Realizo un duplicado.
• Se Utilizo la misma pipeta, se tomó 0.1 mL de la dilución 10-3 y se
dispenso en una caja de Petri con AN. Se Realizo un duplicado.
• Se Utilizo la misma pipeta, y lego se tomó 0.1 mL de la dilución 100
y se dispenso en una caja de Petri con agar nutritivo. Se Realizo un
duplicado.
• Se Disperso cada gota sobre la superficie completa del medio de
cultivo. Se asistió esta labor con un rastrillo de plástico estéril para
todas las cajas de Petri utilizadas. Luego se dispersó primero
aquellos montajes correspondientes a la dilución mayor. Primero las
dos cajas de 10-4, luego las dos de 10-3 y finalmente las dos de
100.
• Y finalmente se Marco las tapas de las cajas de Petri e incube a 37
°C por 2 días.

Imágenes del proceso

Suelo 1 Suelo 10-1
Todas las muestras Vista del número de colonias

Interpretación de resultados
Antes de todo, hay que recalcar que para la realización de esta
estación 1 de “bacterias en el suelo” no se adiciono el 0.1g de
peptona pancreática de caseína en el suelo 1 lo que se supone que
hizo que al primer momento no se evidenciaron cambios en los
resultados. Pero luego de dos días se vieron los cambios, al conocer
las necesidades nutricionales y los factores que afectan el desarrollo
de estos microorganismos, se pudo concluir que este tipo de cultivo
permitió la supervivencia y crecimiento del microorganismo.
Esta práctica consistió en analizar la presunción en que las bacterias
se hallan uniformemente distribuidas en un medio líquido, o sea que
las muestras del mismo tamaño de un mismo producto tendrían el
mismo número de microorganismos. Efectivamente analizamos que
las bacterias rara vez están separadas de sus vecinas. Se evidencia
que estas se agrupan en racimos, en especial cuando se reproducen
activamente.
• Realice conteo de unidades formadoras de colonia (UFC) y
repórtelos en el siguiente cuadro:
 Dilución Conteo Reporte

10-1
0 0 0

10-4
55 0,1ml 550.000
0 0 0
10-5
Volumen de siembra: 0,1ml
UFC/ ml= 55x1000/.01
UFC/ ml= 55.000

Estación 2: Recuperación de Hongos Acuáticos

• Se Limpiaron las semillas de marihuana con agua destilada
estéril durante 30 s.
• Se realizo un segundo lavado con etanol durante 30 s y se
elimine el exceso con agua. se utilizó un mechero encendido
mechero para mantener estéril el lugar.
• Se hicieron cortes de las semillas utilizando bisturí estéril.
Manténgase cerca de un mechero.
• Se dispuso de las semillas en una caja de Petri vacía y se añadió
en 20 mL de la muestra de agua que trajo.
• Se Incube a temperatura ambiente en un lugar oscuro por una
Semana
Imágenes
Interpretación de resultados Recuperación de Hongos
Acuáticos
Los hongos acuáticos tienen unas características especiales que los
hacen distinto a los demás hongos, ya que, en el micelio, cuando
Existe, es típicamente cenocítico, las esporas asexuales se producen
Comúnmente dentro de los esporangios, y al efectuarse la
reproducción sexual se forman estructuras de resistencia que
pueden ser oosporas o esporangios de latencia, dependiendo del
phyllum al que pertenezcan, En este caso las
hifas del hongo crecieron y se ramificaron formando redes
complejas. Esta red de hifas de hongos en conclusión es un
micelio o cuerpo del hongo. El micelio se extendió por toda la
superficie es decir por la fuente de alimento en este caso el agar
nutritivo.

Estación 5: Aislamiento de organismos endófitos

 Marcar una división en la caja de Petri con AN, y en una caja de Petri con
ASD
 Limpiar la hoja de la planta con agua durante 30 segundos para remover el
polvo y tierra
 Se realiza el segundo lavado con etanol al 70% (v/v) durante 30 segundos y
se elimina el exceso con agua
 Se realiza un tercer lavado con hipoclorito de sodio al 3% (v/v) durante 15
segundos y se elimina el exceso con agua
 Se realizan 6 cortes de la hoja de 1cmx1cm
 Se realiza la impresión de los 3 cortes sobre la primera mitad de la caja de
Petri con AN, y luego las pone en la segunda mitad
  Se realiza el mismo procedimiento con los otros 3 cortes en la caja de Petri
con ASD.

 Registro fotográfico del procedimiento:

Procedimiento de aislamiento de organismos endófitos

Lavado con hipoclorito Lavado con agua

Placas de Petri con AN y ASD

6 cortes sobre las 2 hojas de las plantas

Se realiza la impresión de los cortes en las cajas de Petri

Posterior incubación

Resultados después de la incubación:

Interpretación de resultados de microorganismos endófitos
Se pudo observar que hay presencia y crecimiento de microorganismos endófitos
en las cajas de Petri con ASD, que son microbios que viven dentro de la planta se
les considera endófitos, las bacterias se encuentran dentro de estos
microorganismos a medida que estas se maduran.se observo además que las
muestras de la planta se maduraron tornando un color café claro en la planta 1,
en la planta 2 tomo un color tornándose a verde , formándose café poco a poco,
es decir por la presencia de bacterias en las plantas. Estos microorganismos
ingresaron a la planta por diferentes medios.
Se observó además que hay las plantas tienen microbios sobre ellas (epifitos), se
hallaron en las cajas de Petri, se observó el crecimiento de hongos sobre las
plantas, donde se formaron colonias sobre las plantas.
Endófito: Microbios que viven dentro de las plantas
Epifitos: Microbios que viven en el exterior de las plantas
 PREGUNTAS ANEXAS AL INFORME

1. ¿Qué es agar nutritivo y para qué sirve?

RTA:
Es un medio de cultivo usado para ver el crecimiento de bacterias, este tipo de
agar se usa con el fin de suplir las necesidades nutritivas específicas de las
bacterias ya que se debe usar determinada sustancia que cumpla con las
características necesarias para el cultivo bacteriano que desee implementar, el
agar es una sustancia solidificante empleado para la preparación de medios de
cultivo para todo tipo de bacteria. Es muy útil porque permanece sólido incluso a
relativamente altas temperaturas.

2. ¿Cómo se prepara el agar nutritivo casero?

RTA:
Para preparar el agar nutritivo casero se utiliza la gelatina Simplemente se tienen
que seguir con las instrucciones que aparecen en el paquete.
-Calentar agua en un recipiente
-Añadir a éste el contenido del paquete y remover enérgicamente la composición,
hasta que el soluto (los granos de gelatina) dejan de observarse y la disolución se
vuelve homogénea.
-Aun estando caliente la disolución se vierte en los recipientes donde se van
a cultivar las bacterias.
-Una vez preparados los recipientes hay que cerrarlos herméticamente (para
evitar una posible contaminación), y meterlos en la nevara durante la noche, para
que la gelatina solidifique.

3. ¿Cuál es la diferencia entre los dos tipos de agar AN Y ASD?

RTA:
AGAR NUTRITIVO (AN) AGAR SABOURAUD DEXTROSA (A.S.D)
El agar nutritivo se utiliza para el cultivo de una El Sabouraud Glucosa Agar y Sabouraud
variedad de microorganismos en un entorno de Dextrose Broth son medios utilizados para
laboratorio. aislamiento y cultivo de hongos (levaduras,
Este es muy útil a la hora a la hora de hongos y dermatofitos). El Agar Sabouraud con
implementar y ver el crecimiento de Cloranfenicol y el Agar Sabouraud con
microorganismos. Gentamicina y Cloranfenicol son medios
selectivos para aislamiento de hongos de
muestras clínicas y no clínicas. El Sabouraud
Dextrose con Cloranfenicol y Cicloheximida es
un medio selectivo recomendado para
aislamiento y diferenciación de dermatofitos.
(Melguizo, 2009)

4. ¿Por qué se deben colocar invertidas las cajas de Petri para inocular?
RTA:
Se usa así para evitar la evaporación si la placa es almacenada durante períodos
prolongados de tiempo, la que puede afectar las eficiencias del crecimiento
bacteriano, o permitir el crecimiento de organismos indeseados, como el moho. Si
la placa no es invertida durante la incubación, la bacteria no podrá colonizar el
agar apropiadamente, lo que evitará que crezca y forme colonias adecuadamente.

5. ¿Qué es un agar blanco?

RTA:
El agar blanco una sustancia gelatinosa, obtenido de la pared celular de varias
especies de algas de los géneros Gelidium, Euchema y Gracilaria, entre otros,
resultando, según la especie, de un color característico.
 BIBLIOGRAFIA

Bibliografía
biblioteca mac ceibal. (s.f.). hongo negro del pan. Obtenido de
https://contenidos.ceibal.edu.uy/fichas_educativas/_pdf/ciencias-naturales/reino-de-los-
hongos/005-hongo-negro-del-pan.pdf

consejo superior de investigaciones cientificas. (s.f.). seres modelicos en la naturaleza. Obtenido

de http://seresmodelicos.csic.es/llevat.html

Melguizo, F. S. (2009). SABOURAUD DEXTROSE AGAR. Madrid: DIFCO. Obtenido de http://f-

soria.es/Inform_soria/Difco%20Fichas%20tecnicas/TUBOS%20DIFCO/FT%20SABOURAUD
%20DEXTROSE%20AGAR%20tubo.pdf