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UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”

GUIA DE PRATICA
BIOQUÍMICA II

DOCENTES:

- Dra. CHACALTANA RAMOS, Luz


- Dra. PARI OLARTE, Bertha
- Q.F. CHUMBES HUAMAN, Andrea.

ICA – PERÚ
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”

PRÓLOGO

Es indudable que las relaciones entre el Laboratorio y la Bioquímica práctica son cada vez
más estrechas y se complementan de una forma más evidente cada día, como se pone de
manifiesto en esta “Guía Práctica de Bioquímica”.

En este contexto de continuos avances en la bioquímica y por la patogenia de las


enfermedades; que existe una amplia evidencia de la importancia que puede jugar la
inflamación en el inicio y progresión de la enfermedad, así como los datos de “recientes”
publicaciones que sugieren que ciertas infecciones bacterianas o víricas podrían dar lugar
al mencionado proceso inflamatorio.

De aquí la importancia de las determinaciones analíticas, que el laboratorio nos puede


proporcionar en la detección precoz y el estudio y conocimiento de la misma. Todo esto ha
conducido a una nueva terminología para los avances de las fases aguadas de las
enfermedades hoy en día.
Esta es la novedad que aporta esta “guía de práctica”, avalada por los trabajos químicos y
bioquímicos más recientes de la literatura médica.
Se prosigue a un protocolo analítico simple y a unas determinaciones bioquímicas séricas
rápidas y precisas. Es por ello, por lo que nosotras podamos disponer de un laboratorio de
bioquímica en continua evolución y que incorpora en todo momento los últimos avances
en determinaciones analíticas.

Estos hechos benefician a nuestros alumnos siendo este nuestro objetivo desde siempre.

BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”

OBJETIVO DE LA GUÍA PRÁCTICA

OBJETIVO GENERAL
Al final de semestre del curso práctico el estudiante será capaz de explicar cómo funcionan
los principales procesos metabólicos y los mecanismos moleculares que le subyacen a la
función fisiológica de células, tejidos, y órganos del cuerpo humano, bajo distintas
condiciones fisiológicas.

OBJETIVO ESPECIFICOS
- Que el estudiante entienda los fenómenos fisiológico desde el punto de vista
bioquímico y que sea capaz de integrar este conocimiento en la estructura
fisiológica de la célula, del tejido y del organismo.
- Que el estudiante conozca los mecanismos bioquímico del funcionamiento del
organismo humano de una manera dinámica e integral y, al mismo tiempo,
comprenda cómo esos mecanismos se encuentran alterados en la enfermedad.
- Que el estudiante aplique el método científico como una herramienta en la
identificación, el análisis y la solución de problemas médicos.
- Que el estudiante demuestre, mediante actividades, que ha podido integrar el
conocimiento a nivel bioquímico como una herramienta fundamental para la
comprensión de los procesos fisiológicos y de la fisiopatología y con ello entienda
los principios en los que se apoya la tecnología empleada en el diagnóstico de
enfermedades.

NORMAS PARA EL USO Y TRABAJO EN EL LABORATORIO

Las prácticas de Bioquímica son una parte esencial en la formación de un alumno en esta
materia. Para el buen aprovechamiento de las mismas es necesario leer con atención estas
notas y en particular, cada práctica antes de entrar en el laboratorio.

1. Realizar las prácticas de Laboratorio con el debido interés y responsabilidad.


2. Lea cuidadosamente la Guía de Práctica y tenga en cuenta las indicaciones de los
Profesores sobre el uso del material y equipo de Laboratorio, así como el orden,
limpieza y seguridad que debe mantenerse.
3. El o la estudiante deberá acudir a todas las Prácticas de Laboratorio provisto de
mandil blanco con su respectivo logo de la facultad.

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4. Por cada Práctica de Laboratorio, cada mesa de Trabajo presentará un único


informe, el cual consta de las siguientes partes: INTRODUCCIÓN, OBJETIVOS,
RESULTADOS, DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS, CONCLUSIONES, CUESTIONARIO
Y BIBLIOGRAFÍA. Debiéndose presentar a la semana siguiente en el horario y grupo
respectivo que le corresponda; ò ciertos informes de práctica puede ser
entregados en el mismo día de la práctica realizada. La presentación del informe
será CON LETRA CLARA Y LEGIBLE DESARROLLADO A MANO.
5. El inicio de la práctica es en la hora exacta programada. Se tendrá una tolerancia
de 5 minutos, luego de ese lapso de tiempo no se tendrá derecho a Nota de
prácticas.
6. Las inasistencias a las Prácticas de Laboratorio NO SON RECUPERABLES EN
NINGUNO DE LOS GRUPOS, por lo tanto dichas faltas deberán de ser justificadas
con un máximo de una (01) semana.

7. Cada Alumno será integrante de una Mesa de Trabajo, a la cual pertenecerá a lo


largo del Semestre Académico.
8. Por mesa de trabajo, será nombrado un responsable del material y equipo recibido.
9. En caso de daño, deterioro o pérdida del material y equipo, el responsable de mesa
informará del hecho al Profesor. TODO EL GRUPO ES RESPONSABLE DEL Daño
CAUSADO y deberá repararlo en la brevedad posible, no máximo de una (01) semana
después del incidente, con la detención de sus Carnet Universitarios.
10. Al final de la Práctica, se procederá a limpiar el material usado, con el fin de
entregarlo en las mismas condiciones en las que fueron recibidos.
11. Una vez limpio el material, el responsable de mesa lo devolverá a la persona
encargada de laboratorio.
12. El laboratorio deberá quedar completamente limpio, las mesas secas y limpias,
debiendo arrojar todos los desechos al tacho de basura, según corresponde al
material utilizado

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PRACTICA N° 1

BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO BIOQUÍMICO

La bioseguridad es un conjunto de medidas probadamente eficaces para evitar la


adquisición accidental de infecciones con patógenos contenidos en las muestras, así como
los riesgos relacionados con la exposición a agentes químicos, físicos o mecánicos a los que
está expuesto el personal en los laboratorios.
Recuerden que la bioseguridad es un conjunto de medidas preventivas reconocidas
internacionalmente orientadas a proteger la salud y la seguridad del personal y su entorno.
Complementariamente se incluye normas contra riesgos producidos por agentes físicos,
químicos y mecánicos.
Modernamente se incorporan también las acciones o medidas de seguridad requeridas para
minimizar los riesgos derivados del manejo de un organismo modificado genéticamente
(OMG), sus derivados o productos que los contengan, y uso de la tecnología del ADN
recombinante (ingeniería genética) y otras técnicas moleculares más recientes.

OBJETIVO:
Establecer la normativa para proteger la salud de las personas que puedan estar expuestas
a riesgos relacionados con la exposición a agentes biológicos, químicos, físicos, en los
laboratorios de ensayo clínicos.

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PRINCIPIOS DE BIOSEGURIDAD
1.- UNIVERSALIDAD. Las medidas de bioseguridad deben involucrar a todas las
dependencias de la institución. Todo el personal, pacientes (si los hubiera) y
visitantes deben cumplir de rutina con las normas establecidas para prevenir
accidentes.

2.- USO DE BARRERAS. Establece el concepto de evitar la exposición directa a todo


tipo de muestras potencialmente contaminantes, mediante la utilización de
materiales o barreras adecuadas que se interpongan al contacto con las mismas,
minimizando los accidentes.

3.- MEDIOS DE ELIMINACIÓN DEL MATERIAL CONTAMINADO. Es el conjunto de


dispositivos y procedimientos a través de los cuales se procesan y eliminan muestras
biológicas y químicas sin riesgo para los operadores y la comunidad.

4.- EVALUACIÓN DE RIESGOS. Es el proceso de análisis de la probabilidad de que


ocurran daños, heridas o infecciones en un laboratorio. Debe ser efectuada por el
personal de laboratorio más familiarizado con el procesamiento de los agentes de
riesgo, el uso del equipamiento e insumos, los modelos animales usados y la
contención correspondiente.

Una vez establecido, el nivel de riesgo debe ser reevaluado y revisado permanentemente,
a fin de formular un plan de minimización.

La mayoría de los accidentes están relacionados con:


- El carácter potencialmente peligroso (tóxico o infeccioso) de la muestra.
- Uso inadecuado de equipos de protección.
- Errores humanos. Malos hábitos del personal.
- Incumplimiento de las normas.

A su vez, los accidentes pueden ser causados por:

a) AGENTES FÍSICOS Y MECÁNICOS: Efectos traumáticos quemaduras por exposición a


muy altas/bajas temperaturas, cortaduras por vidrios o recipientes rotos, malas
instalaciones que generan posturas inadecuadas, caídas por pisos resbalosos, riesgo
de incendios, inundaciones, instalaciones eléctricas inadecuadas, etc.

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b) AGENTES QUÍMICOS: Exposición a productos corrosivos, tóxicos, irritantes o


cancerígenos por inhalación, contacto con la piel o mucosas, por heridas o ingestión.
Exposición a agentes inflamables o explosivos.

c) AGENTES BIOLÓGICOS: El riesgo dependerá de la naturaleza del agente, su


patogenicidad, virulencia, modo de transmisión y la vía de entrada natural al
organismo y otras rutas (inhalación de aerosoles, inyección por pinchazos con
agentes punzantes, contacto), concentración en el inóculo, dosis infecciosa,
estabilidad en el ambiente y la existencia de una profilaxis eficiente o la posibilidad
de una intervención terapéutica. Las prácticas que se realizan en los laboratorios
presentan riesgos propios de cada actividad.

BARRERAS DE BIOSEGURIDAD:
1.- EQUIPOS DE SEGURIDAD (BARRERAS PRIMARIAS): El concepto de barrera primaria
incluye elementos de protección personal, tales como: guantes, delantales, cobertores de
zapatos, botas, respiradores, máscaras faciales, anteojos de seguridad, propipetas y
cabinas de seguridad biológica.
- Se trabajará con guantes en caso de que las tareas así lo requieran o de que existan
lastimaduras o alguna erupción; es fundamental saber utilizarlos, esto implica que
el usuario deberá abstenerse de tocar otros elementos de uso común con la mano
enguantada (por ejemplo: teléfono, manijas de cajones o puertas, etc.).
- Se recomendará el uso de guantes, mandiles o uniformes de laboratorio a fin de
evitar que la ropa de calle se pueda contaminar o ensuciar.
- La protección ocular se llevará a cabo si existe el riesgo de que durante los
procedimientos se produzcan salpicaduras con microorganismos u otros materiales
peligrosos.
- Los equipos de protección personal se utilizarán en forma individual, según la
necesidad, o en combinación con las cabinas de seguridad biológica y otros
dispositivos que contengan los agentes, animales o materiales que se manipulan.
- En cada lugar de trabajo, se deberá conocer la ubicación de los elementos de
seguridad, tales como extintores, señales de salidas, mantas ignífugas, lavaojos, kits
para contener derrames, alarmas, duchas, etc.
- Bajo ninguna circunstancia se podrá correr en los laboratorios.
- Es fundamental que las rutas de escape o pasillos no estén bloqueadas con bancos,
sillas, equipos u otros elementos que entorpezcan la correcta circulación.

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2.- HÁBITOS E HIGIENE PERSONAL:


- Las personas se lavarán las manos todas las veces que sea necesario, luego de
manipular materiales viables, luego de quitarse los guantes y antes de retirarse del
laboratorio.
- No estará permitido comer, beber, fumar, manipular lentes de contacto,
maquillarse o almacenar alimentos para uso humano en áreas de trabajo.
- Las personas que usan lentes de contacto en laboratorios deberán también utilizar
antiparras o un protector facial.
- Se evitará el uso de accesorios colgantes (aros, pulseras, collares) y, aquellas
personas que así lo requieran deberán trabajar con el cabello recogido.
- Los alimentos se almacenarán fuera del área de trabajo en gabinetes o
refrigeradores designados y utilizados con este único fin.
- Tampoco se debe hervir agua a los fines de preparar mate, café o te.

RECOMENDACIONES MÍNIMAS GENERALES DE BIOSEGURIDAD


PROTECCIÓN PERSONAL:
- Es importante que todos respeten las señales de advertencia, como lo son las
señales de riesgo eléctrico, temperaturas elevadas, radiaciones.
- Se usarán en todo momento batas o uniformes especiales para el trabajo en el
laboratorio.
- El personal deberá lavarse las manos después de manipular materiales y animales
infecciosos, así como antes de abandonar las zonas de trabajo del laboratorio.
- Se usarán gafas de seguridad, viseras u otros dispositivos de protección cuando sea
necesario proteger los ojos y el rostro de salpicaduras, impactos y fuentes de
radiación ultravioleta artificial.
- Estará prohibido usar las prendas protectoras fuera del laboratorio.
- No se usará calzado sin puntera.
- En las zonas de trabajo estará prohibido comer, beber, fumar, aplicar cosméticos o
manipular lentes de contacto.
- Estará prohibido almacenar alimentos o bebidas para consumo humano en las zonas
de trabajo del laboratorio.
- La ropa protectora de laboratorio no se guardará en los mismos armarios o taquillas
que la ropa de calle.
- Estará estrictamente prohibido pipetear con la boca.
- No se colocará ningún material en la boca ni se pasará la lengua por las etiquetas.

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- Todos los derrames, accidentes y exposiciones reales o potenciales a materiales


infecciosos se comunicarán al supervisor del laboratorio.
- Se elaborará y seguirá un procedimiento escrito para la limpieza de todos los
derrames.
- Los líquidos contaminados deberán descontaminarse (por medios químicos o
físicos) antes de eliminarlos por el colector de saneamiento.
- La ropa de trabajo debe estar abrochada en todo momento, evitando vestir mangas
anchas o colgantes, y tener los cabellos recogidos.
- Los desperdicios, manchas y residuos de sustancias peligrosas se eliminarán con
rapidez.
- El buen estado de los productos y materiales así como su etiquetado debe
comprobarse antes de su utilización.
- Todos los preparados deben estar etiquetados adecuadamente, estando prohibida
la reutilización de los envases vacíos sin la retirada de la etiqueta original.
- El laboratorio se mantendrá ordenado, limpio y libre de materiales no relacionados
con el trabajo.
- Las superficies de trabajo se descontaminarán después de todo derrame de material
potencialmente peligroso y al final de cada jornada de trabajo.
- Las ventanas que puedan abrirse estarán equipadas con rejillas que impidan el paso
de artrópodos.

MANIPULACIÓN DE SUSTANCIAS QUÍMICAS:


Productos químicos como factores de riesgo. Las sustancias químicas peligrosas, son
aquellos elementos químicos y sus compuestos, tal y como se presentan en su estado
natural o como se producen por la industria, que pueden dañar directa o indirectamente
a personas, bienes y/o medio ambiente.
Estas sustancias químicas, en función de su peligrosidad, se clasifican como:
a) Explosivas.- Sustancias y preparados que pueden explosionar por el efecto de una
llama o del calor, o que sean muy sensibles a los choques y a los roces.
b) Comburentes.- Sustancias y preparados, que en contacto con otros, particularmente
con los inflamables, originan una reacción fuertemente exotérmica.
c) Inflamables.- Sustancias y preparados cuyo punto de ignición es bajo. En función de
su mayor o menor inflamabilidad se distinguen tres grupos:
a. Extremadamente Inflamables
b. Fácilmente Inflamables
c. Inflamables

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d) Tóxicas.- Sustancias y preparados que por inhalación, ingestión o penetración


cutánea pueden alterar la salud de un individuo. El grado de toxicidad se establece
en tres categorías:
a. Muy Tóxicas
b. Tóxicas
c. Nocivas
e) Corrosivas.- Sustancias y preparados que en contacto con el tejido vivo pueden
ejercer una acción destructiva del mismo.
f) Irritantes.- Sustancias y preparados no corrosivos, que por contacto inmediato,
prolongado o repetido con la piel o las mucosas puedan provocar una reacción
inflamatoria.
g) Peligrosas para el medio ambiente.- Sustancias y preparados que, en caso de
contacto con el medio ambiente, pueden suponer un peligro inmediato o futuro
para uno o más componentes del mismo.
h) Cancerígenas.- Sustancias y preparados que, por inhalación o penetración cutánea,
pueden producir cáncer o aumentar su frecuencia.
i) Teratogénicas.- Sustancias y preparados que, por inhalación, ingestión o
penetración cutánea, pueden producir alteraciones en el feto durante su desarrollo
intrauterino.
j) Mutagénicas.- Sustancias y preparados que, por inhalación, ingestión o penetración
cutánea, pueden producir defectos genéticos hereditarios o aumentar su
frecuencia.
k) Alergénicas.- Sustancias y preparados que, por inhalación o penetración cutánea,
pueden ocasionar una reacción en el sistema inmunitario, de forma que la
exposición posterior a esa sustancia o preparado de lugar a una serie de efectos
negativos característicos.

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INFORME N°1

BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

INTRODUCCIÓN:

CUESTIONARIO:
1. En forma de cuadernillo: Dibuje y describa cada uno de los signos químicos
(pictogramas) que se utilizan para clasificar el peligro de las sustancias químicas. De
cada signo químico mencione 3 ejemplos.
2. Realizar un esquema indicado el proceso que debemos seguir en una emergencia
en el laboratorio como son:
a. salpicadura de sustancias
b. inhalación de gases.
c. Heridas punzantes, cortes y abrasiones
d. Derrames sobre la mesada de trabajo.

BIBLIOGRAFÍA:

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PRACTICA N° 2
DIGESTIÓN DE CARBOHIDRATOS

El carbohidrato más importante en la alimentación es la glucosa, la cual ingerimos bajo la


forma de disacáridos (maltosa, sacarosa y lactosa) o de almidón, polisacáridos formados por
muchas moléculas de glucosa.
El almidón es el constituyente esencial de cereales, leguminoso, tubérculos y raíces. La
digestión de los carbohidratos se produce gracias a las enzimas digestivas producidas por la
glándula salivares, el páncreas y la pared intestinal. Estas enzimas son:
o La alfa amilasa salivar
o La alfa amilasa pancreática
o La amilo 1,6 glucosidasa de la pared intestinal

Las alfa amilasas son enzimas que actúan a pH neutro y en presencia de iones cloro. Rompen
los enlaces amilo 1,4 dando como resultado oligosacáridos y glucosa. Los carbohidratos se
comienzan a digerir en la boca por acción de la α-amilasa de la saliva líquido orgánico
segregado de modo reflejo ante la presencia de la comida. La α-amilasa también llamada
ptialina, cataliza la hidrólisis de las unidades glucosa a nivel del enlace glucosidico α-1,4.

Existen dos formas de evaluar la actividad enzimática e la amilasa:


o Por desaparición de sustrato: forma como desaparece el almidón el que se
aprecia por la reacción del lugol.
o Por formación de producto: forma como desaparece carbohidratos
reductores (glucosa) en el medio, los que se aprecian por reducción del
cobre.

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OBJETIVO
- Comprender la importancia de la acción de la α-amilasa.
- Realizar experimentalmente la digestión enzimática del almidón por acción de la α-
amilasa.
- Evaluar de forma experimental el efecto del cloruro de sodio y del pH sobre la
actividad enzimática de la amilasa.
- Identificar cualitativamente la presencia del sustrato de la reacción enzimática.
- Identificar cualitativamente los productos de la reacción enzimática.
- Fundamentar las resultados obtenidos.

TÉCNICA EXPERIMENTAL: Digestión del almidón por la amilasa salivar


Colección de la saliva: El donante de saliva no debe haber ingerido alimento durante
un mínimo de 2 horas, antes de la colección se procederá a un enjuague simple de
la cavidad oral con agua; luego, manteniendo la boca cerrada esperara entre 5 a 7
minutos. Evitando hablar y pasar la saliva.
La colección se realizara en un recipiente de boca ancha dejando caer por gravedad
la saliva, evitando la formación de espuma.

TECNICA EXPERIEMENTAL:
 Preparar un batería de tubos como sigue:
TUBOS
REACTIVOS
1 2 3 4
ml Almidón al 1% 1 1 1 1
ml Buffer Fosfato pH 6,6 5,2 6 6 6,8
ml Cloruro de sodio 1,6% 0.8 0.8 0.8 --
ml bicloruro de mercurio 1% 0.8 -- -- --
ml Solución Enzimática -- 0.2 -- --
Hervida
ml Solución Enzimática Fresca 0.2 -- 0.2 0.2
 Mezclar e incubar a B.M. a37 °C por 20 minutos, al término de los20 minutos
de incubar, efectuar
TUBOS
REACTIVOS
1 2 3 4
ml HCl 5 5 5 5
ml solución iodada 0.5 0.5 0.5 0.5
ml solución de tubos anteriore 0.5 0.5 0.5 0.5
 Mezclar y dejar en reposo 15 minutos. Interpretar los resultados.

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EQUIPOS
- Baño de agua o baño maría
- Cocina Eléctrica
- Balanza Analítica

MATERIALES
- Probetas de 100m
- Probetas de 50 ml
- Pipetas de 2 ml
- Pipetas de 1 ml
- Pipetas de 5 ml
- Fiola 100 ml
- Vaso de precipitado
- Gradilla para tubos de ensayo
- Tubos de ensayo
- Propipetas
- Celda para espectrofotómetro
- Vasos descartables
- Materiales de limpieza

REACTIVO
- Almidón
- Buffer fosfato pH 6,6
- HCl
- Suero fisiológico
- Agua destilada
- Parafina

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INFORME N°2
DIGESTIÓN DE CARBOHIDRATOS

INTRODUCCIÓN:

OBJETIVO:

CUESTIONARIO: Mediante un esquema explique la digestión de carbohidratos, las


reacciones, las enzimas que intervienen.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS:

CONCLUSIÓN:

BIBLIOGRAFÍA:

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PRACTICA N° 3

GLICEMIA ENZIMÁTICA
DETERMINACIÓN DE GLUCOSA EN MUESTRA BIOLOGICA
La glucosa es la principal fuente de energía en los seres vivos. Por tal razón es un metabolito
fundamental en los procesos biológicos.

La determinación cuantitativa de este compuesto, ha sido objeto de muchos estudios y la


literatura ofrece diversas técnicas de análisis que varían de acuerdo con diferentes factores
como la naturaleza de la muestra, los contenidos de glucosa y la viabilidad experimental.
El Método enzimático para la determinación de glucosa en sangre y otros líquidos biológicos

Fundamento del método: El esquema de reacción es el siguiente:


Glucosa + O2 + H2 O ⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗
GOD Acido Gluconico + H2 O2

2 H2 O2 + 4 − AF + Fenol ⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗
POD Quinona Coloreada + 4 H2 O

OBJETIVO
- Determinar por espectrofotometría el contenido de la glucosa en suero y/o en plasma
sanguíneo humano.
- Comprender la importancia de la glucosa
- Determinar cuantitativamente la determinación de la glucosa

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EQUIPOS
Espectrofotómetro
Centrifugas
Micropipetas
Baño maría
Materiales

MATERIALES
Tubos de ensayos
Tubos de centrifugación
Pipetas graduadas 5 ml
Pipetas graduadas 2 ml
Gradilla para tubos ensayos
Varilla de vidrio y/o baguete
Propipetas
Jeringa de 5 cc
Aguja de 21
Ligadura
Algodón y alcohol
Materiales de limpieza

REACTIVOS
o Kit de glucosa:

TÉCNICA EXPERIMENTAL:

- RECOLECCIÓN DE MUESTRA: Se debe obtener suero o plasma de la manera


usual. También es posible realizar la determinación en líquido cefalorraquídeo.
Además, cuando no es posible extraer sangre venosa o en casos de extrema urgencia,
la determinación se puede realizar en sangre capilar.
o Aditivos: En caso de que la muestra a emplear sea plasma, se recomienda el
uso de anticoagulante G.
o Estabilidad e instrucciones de almacenamientos: los hematíes y leucocitos son
los responsables de la destrucción enzimática de la glucosa sanguínea, siendo
máxima a 37°C, razón por la debe centrifugarse la sangre dentro de las dos
horas posteriores a la extracción, hasta obtener un sobrenadante límpido y
trasferir a otro tubo para su conservación. En estas condiciones la glucosa es
estable 4 horas a temperatura ambiente o 24 horas refrigeradas (2- 10 ° C).En
caso de no poder procesarse la muestra de la forma antes indicada, deberá

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adicionarse un conservador en el momento de la extracción para inhibir la


glucolisis.

- Luego de obtener la muestra (plasma o suero).

- En tres tubos de ensayos marcados con B (blanco), S (Standard) y D (desconocido o


muestra), colocar según el siguiente esquema:

B S D
STANDARD - 10 ul -
MUESTRA - - 10ul
REACTIVO DE
1 ml 1ml 1ml
TRABAJO

- Incubar minutos en baño de agua a 37°C. luego leer en espectrofotómetro a 505 nm


o en fotocolorímetro con filtro verde (490 -530 nm) llevando el aparato a cero con el
blanco.
- CONDICIONES DE REACCIÓN:
o longitud de onda: 505 nm en espectrofotómetro o en fotocolorímetro con filtro
verde (490 – 530 nm).
o Temperatura de reacción : 37°C
o Tiempo de reacción: 10 minutos
o Volumen de muestra: 20ul
o Volumen de reactivo de trabajo: 2 ml.
o Volumen final de reacción: 2,02 ml.
- ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCIÓN FINAL: el color de reacción
final es estable 1 hora, por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de este lapso.

RESULTADO:
- El Tubo B se emplea para la calibración.
- El tubo S nos da la lectura del reactivo de trabajo y del factor.
- El tubo D nos da la lectura de las muestras.

GLICEMIA = D x f
Dónde:
D= es la absorbancia de la muestra (desconocido)
f= Concentración de estándar x 100
Absorbancia del estándar

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VALORES NORMALES
- Suero o plasma: 0,70 – 1,10 g/L
- En los niños péqueños se aceptan valores de 40 a 100 mg/ L.

DIAGNOSTICO POSIBLES EN VALORES ANORMALES DE GLUCEMIA:

- Puede aparecer la glucemia aumentada (hiperglicemia) en:


o Diabetes Mellitus
o Enfermedades Renales
o Feocromocitoma
o Hipertiroidismo
o Gkucagonona
o Pancreatitis aguda
o Síndrome de Cushing
o Tumores páncreas
o Estrés por enfermedades agudas (infarto cerebral, cardiaco, anestesia
general).
o Los tratamiento con sueros en vena, ya que contiene dextrosa (azúcar).
o Embarazo
o Medicamentos (antidepresivos, antihipertensivos, hormonas femeninas, etc.).

- Pueden aparecer la glucemia disminuida (hipoglucemia) en:


o Dieta excesivas
o Enfermedades hepáticas
o Enfermedades de Addison
o Exceso de insulina en diabéticos
o Hipotiroidismo
o Hipotituarismo
o Insulinoma
o Alcohol y analgésico puede disminuirla

INFORME N°3
GLICEMIA ENZIMÁTICA

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INTRODUCCIÓN:

OBJETIVO:

RESULTADOS:

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS:

CONCLUSIÓN:

CUESTIONARIO:
1) ¿cuáles son los valores de referencia de glucosa en la sangre, orina, suero?
2) Como interviene la glucolisis en la muestra problema (sangre). En el suero y
líquidos biológicos.
3) Que objeto tiene el diagnostico precoz y el control de los pacientes diabéticos.
4) Enumere las 3 categorías principales de diabetes mellitus (DM) y cuál es la más
común.
5) Realice las características diferenciales de la DM tipo 1 y la DM tipo 2.
6) Mencionar y explicar la triada diabética
7) Dibuje un gráfico señalando el mecanismo de acción de la glucosa, atreves de sus
hormonas catabólicas y anabólicas.
BIBLIOGRAFÍA:

CASOS CLINICOS

1. Paciente de 59 años, ingresa por guardia central con diagnóstico de Cetoacidosis


Diabética (CAD). Antecedentes Patológicos: Diabetes tipo 1 de 30 años de evolución.
Pancreatitis aguda un mes previo a la internación actual acompañada de CAD con
necesidad de asistencia respiratoria mecánica. Motivo de Consulta: Depresión del
sensorio acompañado de relajación de esfínteres. Antecedentes de la enfermedad
actual: Familiar refiere encontrar a la paciente tendida en el suelo, vigil, confusa con
relajación de esfínteres

2. Paciente de sexo femenino de 28 años de edad que consulta por consultorio externo
de diabetología. Motivo de consulta: Mareos con pérdida del conocimiento al pasar

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de la posición de pie a la posición sentada o parada. Ardor para orinar. Dolor


quemante continuo de ambos pies con imposibilidad en la deambulación.
Antecedentes personales patológicos: Diabetes tipo 1 de 18 años de evolución con
mal control metabólico, tratada en la actualidad con insulina NPH 20 UI/dia +
insulina regular pre prandial según glucemias a razón de 10UI/día. Con anterioridad
estuvo tratada con insulina Glargina por períodos cortos de tiempo, la paciente se
negaba a usar analágos.

DESARROLLAR EN CADA CASO CLÍNICO:


1. Explique las bases bioquímica del problema de salud, indicando los valores normales,
los síntomas y signos del paciente.
2. Realizar la posible solución para el problema de salud.

PRACTICA N° 4
EXTRACCIÓN Y AISLAMIENTO DE GLUCÓGENOS HEPÁTICO EN POLLO

Los hidratos de carbono son almacenados como sustancia de reserva por los seres vivos en
forma de polisacáridos; el almidón y la inulina son las formas de almacenamiento en
vegetales, mientras que el glucógeno es la reserva glucídica de los animales.
El glucógeno consta de unidades de glucosa unidas por enlace glucosídicoα(1-4) formando
cadenas; cada 8 ó 10 unidades de glucosa, la cadena presenta ramificaciones que se unen
mediante enlace α(1-6). El glucógeno es especialmente abundante en el hígado (entre 3-5 g
por 100 g de tejido fresco ) y en, en menor medida, el músculo. El ayuno disminuye las
reservas de glucógeno fundamentalmente hepático.

OBJETIVOS:
- Recordar la importancia del glucógeno
- Recordar las fuentes de glucógeno
- Es la extracción del glucógeno hepático
- Ser capaz de realizar la hidrolisis ácidas enzimática

MATERIAL BIOLOGICA
Una pollo bien alimentado durante unas semanas antes

EQUIPO
Centrifuga
Balanza analítica

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MATERIALES
Pipetas de 5 ml Probeta de 100 ml
Pipetas de 10 ml Vasos de precipitación de 250 ml
Tubos de ensayo Luna de reloj
Tubos de centrifuga Fiola de 100 ml
Mortero con pitón
Varilla de vidrio
REACTIVOS
KOH (30%)
alcohol etílico
SO4Na2
Etanol
Hielo
Solución de lugol

TÉCNICA EXPERIMENTAL

- Prepare el ácido tricloroacetico al 5% y al 10% en la fiola.


- Decapitarun pollo bien alimentado con una dieta alta en carbohidratos (una semana
antes).
- Extraiga el hígado con sumo cuidado.
- Inmediatamente colocar el hígado en una luna de reloj bien helada y pesar
(previamente realizar pesada de la luna de reloj para obtener el peso del material
biológico por diferencia)
- Cortar el hígado en trozos pequeños y dejarlo caer en un mortero muy frio, y adicionar
1 ml de TCA al 5 % por cada gramo de hígado.
- Pesar 0,5g de arena lavada y agregarlo al mortero para iniciar la trituración (mantener
el mortero en hielo) hasta obtener una masa liquida homogénea.
- Trasvasar el preparado a los tubos de ensayo equitativamente hasta las dos cuartas
partes de la capacidad.
- Llevar los tubos a centrifugar durante 5 minutos a 2000 RPM
- Decantar el líquido sobrenadante opalescente en la probeta de 1000ml
- Enjuagar el mortero con un volumen mayor de TCA al 10% con el objetivo de
conseguir una extracción más completa del glucógeno hepático.
- Verter el líquido de los lavados en los tubos y llevar a centrifugar durante 5 minutos
a 2000 RPM
- Decantar el sobrenadante uniendo al primer extracto TCA en la probeta y anotar el
volumen total.
- Repetir los pasos anteriores para mayor rendimiento
-

- Añadir con agitación a los extractos TCA, 2 volúmenes de etanol por cada volumen
de extracto.

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- Agitar la mezcla y dejar en reposo hasta que el precipitado flocule.


- Una vez observada la floculación agitar energéticamente y trasvasar el contenido en
el número mayor posible de tubos de ensayos, para llevar a la centrifuga por 5 minutos
a 2000 RPM
- Eliminar el sobrenadante trasparente
- Aislar en la luna de reloj el glucógeno de cada tubo de ensayo para su posterior
secado.

RECONCIMIENTO DEL GLUCOGENO:


o Tome una pequeña cantidad del glucógeno y disuélvalo en 2 ml de agua
destilada en un tubo de ensayo, agregue unas gotas de reactivo de lugol.
Observe el color.

INFORME N°4
EXTRACCIÓN Y AISLAMIENTO DE GLUCÓGENOS HEPÁTICO EN POLLO

INTRODUCCIÓN:

OBJETIVO:

RESULTADOS:

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS:

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CONCLUSIÓN:

CUESTIONARIO:
1. Compare las características del almidón, glucógeno, celulosa y quitina
2. Que factores pueden influir sobre el porcentaje del glucógeno en el hígado
3. Qué importancia tiene la saliva en la hidrolisis enzimática
4. Cuáles son las enzimas claves que participan en el metabolismo de los
carbohidratos.

BIBLIOGRAFÍA:

CASO CLINICO

Varón de raza blanca de 16 años de edad llegó a la sala de urgencias del hospital en estado
estuporoso. Al efectuar el examen físico se observó que presentaba respiración profunda
y taquipnea, su aliento tenía olor a frutas y su piel y membranas mucosas estaban secas.

Datos de laboratorio
 Sodio 128 mmol/L (138-145 mmol/L)
 Calcio 10 mg/dL (8-25 mg/dL)
 Potasio 6,1 mmol/L (3,1-5,5 mmol/L)
 Fósforo 3,6 mg/dL (3.0 -4.5 mg/dL)
 Cloruro 88 mmol/L (95-105 mmol/L)
 Bicarbonato 9 mmol/L (21-27 mmol/L)
 Urea en sangre 50 mg/dL (8-25 mg/dL)
 pH 7,12 (7,35-7,45)
 pCO2 28 mmHg (35-45 mmHg)
 Glucosa sérica 750 mg/dL (70-110 mg/dL)
 Acetona sérica 3+ (0)
 Hematocrito 53% (42-45%)
 Hemoglobina 17,6 g/d}L (14-16 g/dL)
 Recuento leucocitos 12000/mm3 (4.300-10000 mm3)
 Recuento eritrocitos 6 millones /mm3 (4,5-5,2/mm3)

Responde:
1. Identificar los datos de laboratorio y los signos y síntomas anormales

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2. Con base a los antecedentes clínicos de la paciente, las observaciones clínicas y


datos de laboratorio, el tipo de intolerancia a la glucosa se clasificaría como;
3. ¿Por qué aumentan los cuerpos cetónicos?
4. ¿Qué observaciones indican pérdida de agua?
5. Qué parámetro nos indica un buen control sobre los estados de glucemia en los
últimos 120 días.

PRACTICA N° 5
SCHOCK INSULINICO EN CONEJO
EFECTO DE LA INSULINA SOBRE LOS NIVELES DE GLUCOSA SANGUINEA
FENOMENOS DEL SHOCK INSULNICO

El término shock insulínico se utiliza para describir la hipoglicemia severa que


produce pérdida del conocimiento y otros trastornos. La hipoglicemia se produce
cuando la glucosa del cuerpo se gasta con demasiada rapidez, cuando ésta es
liberada en el torrente sanguíneo con mayor lentitud que lo requerido por el cuerpo,
o cuando se libera demasiada insulina en el torrente sanguíneo.

La insulina es una hormona producida por el páncreas en respuesta a mayores


niveles de glucosa en sangre, cuya función es reducir estos altos niveles de glucosa.
La hipoglicemia es relativamente común en las personas diabéticas. Se presenta
por un exceso de insulina oral o de medicamento oral antidiabético, cuando no se
come lo suficiente, o por un incremento repentino del ejercicio sin compensarlo con
una mayor ingesta de alimentos. La hipoglicemia relativa, es decir, cuando la
glucosa en la sangre de un recién nacido está baja, es bastante común. Un bebé
nacido de una madre diabética o con diabetes gestacional (causada por el
embarazo) puede presentar hipoglicemia severa. En estos casos el niño es llamado
"bebé de madre diabética". Si durante el embarazo el nivel de azúcar en la sangre
de la madre es persistentemente alto, el páncreas del feto interviene en el control
del exceso de azúcar produciendo insulina adicional. Cuando el niño nace, ya no
recibe más glucosa de la madre, pero aún produce -mayor cantidad de insulina, y
este exceso hace que el azúcar en la sangre del bebé descienda a niveles

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peligrosos. Esto es una emergencia médica que de no


tratarsepuede provocar convulsiones y daños al sistema nervioso del bebé.

OBJETIVOS

- Demostrar lo que pasa cuando se administra glucosa al conejo que se


encuentra en estado de shock.
- Ser capaz de describir los muchos cambios que ocurren como resultado de
la administración de la insulina.
- Observar los efectos de un exceso de insulina en los conejos
- Recordar los procesos bioquímicos que ocurren durante dicho proceso y
relacionarlo con episodios de la diabetes

EQUIPO

- Balanza analítica

MATERIALES BIOLÓGICO

- 1 conejos en ayunas durante 24 horas

MATERIALES

Fiola de 100 ml Jeringa de tuberculina


Tubos de ensayo Algodón y alcohol
Vaso de precipitación 100 ml Materiales de limpieza
Agitadores de vidrio Jeringa de 10 cc
Gradillas para tubos de ensayo

REACTIVOS

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Glucosa anhidra
Insulina de acción rápida
Agua destilada
Adrenalina

TÉCNICA EXPERIMENTAL
- El conejo es un animal muy sensible a la acción de la insulina, cuya respuesta
a esta hormona es muy diferente de la del perro. Por esta razón, el conejo es
el animal de elección en el ensayo biológico oficial de estandarización de las
preparaciones insulínicas. Efectivamente, la definición de la unidad estándar
de insulina está basada en la respuesta observada con este animal.
- El conejo deberá estar en ayunas 24 horas antes del experimento. Se
inyectan 0.3ml de insulina por vía subcutánea al comenzar la sesión de
laboratorio. No deben usarse preparados de insulina de absorción lenta
(Insulina-Zn, Insulina-Zinc-portaminas).
- Luego de media hora se le inyectan también por vía subcutánea de 0,2ml de
insulina.
- Mientras usted espera los dramáticos efectos de la insulina, prepare una
solución al 10 % de glucosa que se le administrará al animal y tenga lista
también una jeringa de 10 ml. Después de un tiempo variable, pero
seguramente cerca de una hora después de la segunda inyección de insulina,
el animal entrará en convulsiones. Antes de que esto ocurra el animal habrá
pasado por una serie de cambios característicos, los cuales recuerdan los
cambios que experimenta un individuo con shock insulínico.
- Si al animal no se le presta atención posterior, puede ocurrir que no se
observe el período de convulsiones sino el periodo en el cual, el conejo en
estado comatoso permanece tranquilo. Algunas veces la muerte sobreviene
durante este primer ciclo de convulsiones. Muy pronto sin embargo, se
establece otro período de convulsiones, durante el cual el animal parece
encontrarse al borde de la muerte. El animal puede sobrevivir sin embargo a
esta nueva crisis.

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- Una vez que el animal ha superado esta primera crisis y estando, aún en
estado comatoso, se le administran 10 ml de la solución al 10% de glucosa
por vía intraperitoneal.
- Como el animal había sido sobrecargado de insulina, la inyección de la
solución de glucosa sólo lo protegerá en una forma temporal. En las horas
siguientes es seguro que el animal caerá de nuevo en shock más de una vez.
Usted tendrá entonces la responsabilidad de protegerlo de la muerte.
Asegúrese de que haya alimento en la jaula del animal. Dos inspecciones
deben hacerse del animal, la primera a las 2 ó 3 horas y la segunda a las 6
horas. En cada una de estas visitas, como medida de protección, se inyectan
intraperitonealmente 10 ml de solución al 10% de glucosa.

SÍNTOMAS DE HIPOGLICEMIA:

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INFORME N°5
SHOCK INSULINICO EN CONEJO
INTRODUCCIÓN:

OBJETIVO:

RESULTADOS:

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS:

CONCLUSIÓN:

CUESTIONARIO:
1. Defina el concepto de : shock, shock hipo glicémico
2. ¿Qué cambios observó usted en la conducta del animal a medida que los
niveles de glucosa se acercaban al nivel del shock?
3. ¿A qué nivel estaba la glucosa sanguínea cuando el animal cayó en shock?
4. A cierto tipo de pacientes (esquizofrénicos) se les provoca shock insulínico
de un modo similar al que usted ha provocado en el conejo y parece que
estos pacientes son beneficiados por este tratamiento. ¿Cree usted que es
el efecto sobre los músculos y sus correspondientes conclusiones lo que
busca el psiquiatra? ¿Será acaso el efecto sobre el sistema nervioso lo cual
conduce a cambios en la conducta aún de un conejo?
5. Describa qué es lo que pasa cuando usted administra glucosa al animal que
se encuentra en estado de shock.
6. Usted debe ser capaz de describir los muchos cambios que ocurren en un
animal como resultado de la inyección de insulina.
7. ¿Para que utilizamos la adrenalina? ¿Cuál es su mecanismo de acción?

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BIBLIOGRAFÍA:
PRACTICA N° 6

INTERPRETACIÓN CLÍNICA
INTEGRACIÓN DE LAS RUTAS METABÓLICAS DE LOS HIDRATOS DE
CARBONOS

CASO CLÍNICO N°1


Una niña de 14 años de edad ingreso a un hospital infantil en estado de coma. La
madre refirió que la niña se encontraba con buena salud hasta dos semanas previas
al ingreso, cuando de forma repentina desarrollo fiebre moderada y una ulcera en
el cuello.
Subsecuentemente, disminuyó su apetito y presento malestar general. Varios días
antes de su ingreso había comenzado a quejarse de sed excesiva y a orinar muy
seguido por las noches. Su médico familiar se encontraba fuera de la ciudad y la
madre se mostró reace a consultar con otro médico; sin embargo, el día del ingreso
a la niña comenzó con vómitos, se encontraba en estado letárgico y era difícil
mantenerla despierta, por lo que fue trasladada de inmediato al servicio de
urgencias. A la exploración física se encontró deshidratada, con piel fría, respiración
profunda y suspiros (respiración de KASSMAUL), además de que su aliento tenía
un olor extraño a frutas. Su tensión arterial era e 90/60 mmHg y su pulso de 115/min;
no logro despertar.

Resultados de laboratorio:
A. En suero o plasma:
a. Glucosa 35mmol/L (3.6 a 6.1 mmol/L)
b. Β-Hidroxibutarato 13.0 mmol/L (<0.25 mmol/L)
c. Acetato 2.8 mmol/L (< 0.2 mmol/L)
d. Bicarbonato 5 mmol/L (24 a 28 mmol/L)
e. Nitrógeno ureico 12 mmol/L (2.9 a 8.9 mmol/L)
f. Potasio 5.8 mmol/L (3.5 a 5.0 mmol/L)

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g. Creatinina 160 ummol/L (6’ a 132 ummol/L)


B. En orina:
a. Glucosa ++++
b. Cuerpos cetonicos ++++

SEGÚN EL CASO CLÍNICO, DESARROLLE:


1. Signos y síntomas
2. Diagnostico
3. Base bioquímica
4. Discusión
5. Solución

CASO CLÍNICO N°2


La paciente era una niña de 12 años que presentaba una distensión abdominal muy
importante. Tenía antecedentes de episodios frecuentes de debilidad, sudoración y
palidez que desaparecían comiendo. Su desarrollo había sido algo lento se sentó al
año de edad y caminó sin ayuda a los 2 años y su rendimiento escolar era pobre.
La exploración física reveló presión arterial de 110/58 mmHg (14,7/7,7 kPa),
temperatura de 38 ºC, peso de 22,4 Kg. (bajo) y talla de 128 CMS (baja). La paciente
presentaba unas auscultaciones pulmonares y cardiacas normales. Se observó una
dilatación venosa leve en el abdomen distendido. El hígado estaba aumentando de
tamaño con una consistencia firme y lisa y llegaba hasta el pelvis. No se palpaba el
vaso ni los riñones. El resto de la exploración física estuvo dentro de los límites
normales, salvo por el “escaso desarrollo muscular.
Resultados de laboratorio:
A. En suero o plasma:
a. Glucosa 2,8 mmol/L (3,9 - 5,6 mmol/L)
b. Lactato 6.6 mmol/L ( 0.56- 2.0 mmol/L)
c. Piruvato 0.43 mmol/L (0.05 – 0.10 mmol/L)
d. Ácidos grasos libres 1.6 mmol/L (0.3- 0,8 mmol/L)

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e. Triglicéridos 3.15 g/l (0,3 -0,8 g/L)


f. Cuerpos cetonicos totales 400 mg/L (30 mg/L)
g. pH 7,25 (7.35 -7,44)
h. CO2 total 12 mmol/L (24-30 mmol/L)

SEGÚN EL CASO CLÍNICO, DESARROLLE:


1. Signos y síntomas
2. Diagnostico
3. Base bioquímica
4. Discusión
5. Solución

CASO CLÍNICO N°3

Varón de 35 años que es traído a urgencia de forma involuntaria tras llevar una
semana con importantes alteraciones conductuales en su domicilio. A su llegada
presenta mal estado general, aspecto muy deteriorado y agitación psicomotriz con
discurso incoherente. Los familiares con los que vive refieren que lleva unos días
con comportamientos extraños, se pasa el día tumbado en la cama, apenas se
mueve, se ríe y parece que habla solo, mostrándose agresivo hacia ellos. Refieren
que nunca ha hecho seguimiento ni tratamiento psiquiátrico, aunque perdieron el
contacto con él durante 10 años y lo han retomado hace 5 meses. Vivió en Piura
donde parece que tuvo un ingreso con posibles diagnóstico de esquizofrenia.
Niegan hábitos tóxicos. Parece que desde hace 5 años lleva una dieta estricta a
base de frutas y algunas verduras.
En la exploración física se pone a manifiesto palidez cutánea, no caquéctico,
sequedad de mucosas. Consciente y reactivo, afebril, no rigidez en la nuca, no
adenopatías. Presión arterial 110/70 mmHg. Abdomen blando depresible, no mase
ni megalias, no doloroso a la palpación.
Extremidades, pulsos conservafos, no edemas, no datos de trombosis venosa
profunda, moviliza las 4 extremidades.

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UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”

Resultados de laboratorio:

SEGÚN EL CASO CLÍNICO, DESARROLLE:


1. Signos y síntomas
2. Diagnostico
3. Base bioquímica
4. Discusión
5. Solución

BIOQUIMICA II - PRÁCTICA

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