Documenti di Didattica
Documenti di Professioni
Documenti di Cultura
GUIA DE PRATICA
BIOQUÍMICA II
DOCENTES:
ICA – PERÚ
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
PRÓLOGO
Es indudable que las relaciones entre el Laboratorio y la Bioquímica práctica son cada vez
más estrechas y se complementan de una forma más evidente cada día, como se pone de
manifiesto en esta “Guía Práctica de Bioquímica”.
Estos hechos benefician a nuestros alumnos siendo este nuestro objetivo desde siempre.
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
OBJETIVO GENERAL
Al final de semestre del curso práctico el estudiante será capaz de explicar cómo funcionan
los principales procesos metabólicos y los mecanismos moleculares que le subyacen a la
función fisiológica de células, tejidos, y órganos del cuerpo humano, bajo distintas
condiciones fisiológicas.
OBJETIVO ESPECIFICOS
- Que el estudiante entienda los fenómenos fisiológico desde el punto de vista
bioquímico y que sea capaz de integrar este conocimiento en la estructura
fisiológica de la célula, del tejido y del organismo.
- Que el estudiante conozca los mecanismos bioquímico del funcionamiento del
organismo humano de una manera dinámica e integral y, al mismo tiempo,
comprenda cómo esos mecanismos se encuentran alterados en la enfermedad.
- Que el estudiante aplique el método científico como una herramienta en la
identificación, el análisis y la solución de problemas médicos.
- Que el estudiante demuestre, mediante actividades, que ha podido integrar el
conocimiento a nivel bioquímico como una herramienta fundamental para la
comprensión de los procesos fisiológicos y de la fisiopatología y con ello entienda
los principios en los que se apoya la tecnología empleada en el diagnóstico de
enfermedades.
Las prácticas de Bioquímica son una parte esencial en la formación de un alumno en esta
materia. Para el buen aprovechamiento de las mismas es necesario leer con atención estas
notas y en particular, cada práctica antes de entrar en el laboratorio.
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
PRACTICA N° 1
OBJETIVO:
Establecer la normativa para proteger la salud de las personas que puedan estar expuestas
a riesgos relacionados con la exposición a agentes biológicos, químicos, físicos, en los
laboratorios de ensayo clínicos.
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
PRINCIPIOS DE BIOSEGURIDAD
1.- UNIVERSALIDAD. Las medidas de bioseguridad deben involucrar a todas las
dependencias de la institución. Todo el personal, pacientes (si los hubiera) y
visitantes deben cumplir de rutina con las normas establecidas para prevenir
accidentes.
Una vez establecido, el nivel de riesgo debe ser reevaluado y revisado permanentemente,
a fin de formular un plan de minimización.
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
BARRERAS DE BIOSEGURIDAD:
1.- EQUIPOS DE SEGURIDAD (BARRERAS PRIMARIAS): El concepto de barrera primaria
incluye elementos de protección personal, tales como: guantes, delantales, cobertores de
zapatos, botas, respiradores, máscaras faciales, anteojos de seguridad, propipetas y
cabinas de seguridad biológica.
- Se trabajará con guantes en caso de que las tareas así lo requieran o de que existan
lastimaduras o alguna erupción; es fundamental saber utilizarlos, esto implica que
el usuario deberá abstenerse de tocar otros elementos de uso común con la mano
enguantada (por ejemplo: teléfono, manijas de cajones o puertas, etc.).
- Se recomendará el uso de guantes, mandiles o uniformes de laboratorio a fin de
evitar que la ropa de calle se pueda contaminar o ensuciar.
- La protección ocular se llevará a cabo si existe el riesgo de que durante los
procedimientos se produzcan salpicaduras con microorganismos u otros materiales
peligrosos.
- Los equipos de protección personal se utilizarán en forma individual, según la
necesidad, o en combinación con las cabinas de seguridad biológica y otros
dispositivos que contengan los agentes, animales o materiales que se manipulan.
- En cada lugar de trabajo, se deberá conocer la ubicación de los elementos de
seguridad, tales como extintores, señales de salidas, mantas ignífugas, lavaojos, kits
para contener derrames, alarmas, duchas, etc.
- Bajo ninguna circunstancia se podrá correr en los laboratorios.
- Es fundamental que las rutas de escape o pasillos no estén bloqueadas con bancos,
sillas, equipos u otros elementos que entorpezcan la correcta circulación.
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
INFORME N°1
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO
INTRODUCCIÓN:
CUESTIONARIO:
1. En forma de cuadernillo: Dibuje y describa cada uno de los signos químicos
(pictogramas) que se utilizan para clasificar el peligro de las sustancias químicas. De
cada signo químico mencione 3 ejemplos.
2. Realizar un esquema indicado el proceso que debemos seguir en una emergencia
en el laboratorio como son:
a. salpicadura de sustancias
b. inhalación de gases.
c. Heridas punzantes, cortes y abrasiones
d. Derrames sobre la mesada de trabajo.
BIBLIOGRAFÍA:
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
PRACTICA N° 2
DIGESTIÓN DE CARBOHIDRATOS
Las alfa amilasas son enzimas que actúan a pH neutro y en presencia de iones cloro. Rompen
los enlaces amilo 1,4 dando como resultado oligosacáridos y glucosa. Los carbohidratos se
comienzan a digerir en la boca por acción de la α-amilasa de la saliva líquido orgánico
segregado de modo reflejo ante la presencia de la comida. La α-amilasa también llamada
ptialina, cataliza la hidrólisis de las unidades glucosa a nivel del enlace glucosidico α-1,4.
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
OBJETIVO
- Comprender la importancia de la acción de la α-amilasa.
- Realizar experimentalmente la digestión enzimática del almidón por acción de la α-
amilasa.
- Evaluar de forma experimental el efecto del cloruro de sodio y del pH sobre la
actividad enzimática de la amilasa.
- Identificar cualitativamente la presencia del sustrato de la reacción enzimática.
- Identificar cualitativamente los productos de la reacción enzimática.
- Fundamentar las resultados obtenidos.
TECNICA EXPERIEMENTAL:
Preparar un batería de tubos como sigue:
TUBOS
REACTIVOS
1 2 3 4
ml Almidón al 1% 1 1 1 1
ml Buffer Fosfato pH 6,6 5,2 6 6 6,8
ml Cloruro de sodio 1,6% 0.8 0.8 0.8 --
ml bicloruro de mercurio 1% 0.8 -- -- --
ml Solución Enzimática -- 0.2 -- --
Hervida
ml Solución Enzimática Fresca 0.2 -- 0.2 0.2
Mezclar e incubar a B.M. a37 °C por 20 minutos, al término de los20 minutos
de incubar, efectuar
TUBOS
REACTIVOS
1 2 3 4
ml HCl 5 5 5 5
ml solución iodada 0.5 0.5 0.5 0.5
ml solución de tubos anteriore 0.5 0.5 0.5 0.5
Mezclar y dejar en reposo 15 minutos. Interpretar los resultados.
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
EQUIPOS
- Baño de agua o baño maría
- Cocina Eléctrica
- Balanza Analítica
MATERIALES
- Probetas de 100m
- Probetas de 50 ml
- Pipetas de 2 ml
- Pipetas de 1 ml
- Pipetas de 5 ml
- Fiola 100 ml
- Vaso de precipitado
- Gradilla para tubos de ensayo
- Tubos de ensayo
- Propipetas
- Celda para espectrofotómetro
- Vasos descartables
- Materiales de limpieza
REACTIVO
- Almidón
- Buffer fosfato pH 6,6
- HCl
- Suero fisiológico
- Agua destilada
- Parafina
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
INFORME N°2
DIGESTIÓN DE CARBOHIDRATOS
INTRODUCCIÓN:
OBJETIVO:
CONCLUSIÓN:
BIBLIOGRAFÍA:
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
PRACTICA N° 3
GLICEMIA ENZIMÁTICA
DETERMINACIÓN DE GLUCOSA EN MUESTRA BIOLOGICA
La glucosa es la principal fuente de energía en los seres vivos. Por tal razón es un metabolito
fundamental en los procesos biológicos.
2 H2 O2 + 4 − AF + Fenol ⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗⃗
POD Quinona Coloreada + 4 H2 O
OBJETIVO
- Determinar por espectrofotometría el contenido de la glucosa en suero y/o en plasma
sanguíneo humano.
- Comprender la importancia de la glucosa
- Determinar cuantitativamente la determinación de la glucosa
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
EQUIPOS
Espectrofotómetro
Centrifugas
Micropipetas
Baño maría
Materiales
MATERIALES
Tubos de ensayos
Tubos de centrifugación
Pipetas graduadas 5 ml
Pipetas graduadas 2 ml
Gradilla para tubos ensayos
Varilla de vidrio y/o baguete
Propipetas
Jeringa de 5 cc
Aguja de 21
Ligadura
Algodón y alcohol
Materiales de limpieza
REACTIVOS
o Kit de glucosa:
TÉCNICA EXPERIMENTAL:
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
B S D
STANDARD - 10 ul -
MUESTRA - - 10ul
REACTIVO DE
1 ml 1ml 1ml
TRABAJO
RESULTADO:
- El Tubo B se emplea para la calibración.
- El tubo S nos da la lectura del reactivo de trabajo y del factor.
- El tubo D nos da la lectura de las muestras.
GLICEMIA = D x f
Dónde:
D= es la absorbancia de la muestra (desconocido)
f= Concentración de estándar x 100
Absorbancia del estándar
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
VALORES NORMALES
- Suero o plasma: 0,70 – 1,10 g/L
- En los niños péqueños se aceptan valores de 40 a 100 mg/ L.
INFORME N°3
GLICEMIA ENZIMÁTICA
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
INTRODUCCIÓN:
OBJETIVO:
RESULTADOS:
CONCLUSIÓN:
CUESTIONARIO:
1) ¿cuáles son los valores de referencia de glucosa en la sangre, orina, suero?
2) Como interviene la glucolisis en la muestra problema (sangre). En el suero y
líquidos biológicos.
3) Que objeto tiene el diagnostico precoz y el control de los pacientes diabéticos.
4) Enumere las 3 categorías principales de diabetes mellitus (DM) y cuál es la más
común.
5) Realice las características diferenciales de la DM tipo 1 y la DM tipo 2.
6) Mencionar y explicar la triada diabética
7) Dibuje un gráfico señalando el mecanismo de acción de la glucosa, atreves de sus
hormonas catabólicas y anabólicas.
BIBLIOGRAFÍA:
CASOS CLINICOS
2. Paciente de sexo femenino de 28 años de edad que consulta por consultorio externo
de diabetología. Motivo de consulta: Mareos con pérdida del conocimiento al pasar
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
PRACTICA N° 4
EXTRACCIÓN Y AISLAMIENTO DE GLUCÓGENOS HEPÁTICO EN POLLO
Los hidratos de carbono son almacenados como sustancia de reserva por los seres vivos en
forma de polisacáridos; el almidón y la inulina son las formas de almacenamiento en
vegetales, mientras que el glucógeno es la reserva glucídica de los animales.
El glucógeno consta de unidades de glucosa unidas por enlace glucosídicoα(1-4) formando
cadenas; cada 8 ó 10 unidades de glucosa, la cadena presenta ramificaciones que se unen
mediante enlace α(1-6). El glucógeno es especialmente abundante en el hígado (entre 3-5 g
por 100 g de tejido fresco ) y en, en menor medida, el músculo. El ayuno disminuye las
reservas de glucógeno fundamentalmente hepático.
OBJETIVOS:
- Recordar la importancia del glucógeno
- Recordar las fuentes de glucógeno
- Es la extracción del glucógeno hepático
- Ser capaz de realizar la hidrolisis ácidas enzimática
MATERIAL BIOLOGICA
Una pollo bien alimentado durante unas semanas antes
EQUIPO
Centrifuga
Balanza analítica
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
MATERIALES
Pipetas de 5 ml Probeta de 100 ml
Pipetas de 10 ml Vasos de precipitación de 250 ml
Tubos de ensayo Luna de reloj
Tubos de centrifuga Fiola de 100 ml
Mortero con pitón
Varilla de vidrio
REACTIVOS
KOH (30%)
alcohol etílico
SO4Na2
Etanol
Hielo
Solución de lugol
TÉCNICA EXPERIMENTAL
- Añadir con agitación a los extractos TCA, 2 volúmenes de etanol por cada volumen
de extracto.
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
INFORME N°4
EXTRACCIÓN Y AISLAMIENTO DE GLUCÓGENOS HEPÁTICO EN POLLO
INTRODUCCIÓN:
OBJETIVO:
RESULTADOS:
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
CONCLUSIÓN:
CUESTIONARIO:
1. Compare las características del almidón, glucógeno, celulosa y quitina
2. Que factores pueden influir sobre el porcentaje del glucógeno en el hígado
3. Qué importancia tiene la saliva en la hidrolisis enzimática
4. Cuáles son las enzimas claves que participan en el metabolismo de los
carbohidratos.
BIBLIOGRAFÍA:
CASO CLINICO
Varón de raza blanca de 16 años de edad llegó a la sala de urgencias del hospital en estado
estuporoso. Al efectuar el examen físico se observó que presentaba respiración profunda
y taquipnea, su aliento tenía olor a frutas y su piel y membranas mucosas estaban secas.
Datos de laboratorio
Sodio 128 mmol/L (138-145 mmol/L)
Calcio 10 mg/dL (8-25 mg/dL)
Potasio 6,1 mmol/L (3,1-5,5 mmol/L)
Fósforo 3,6 mg/dL (3.0 -4.5 mg/dL)
Cloruro 88 mmol/L (95-105 mmol/L)
Bicarbonato 9 mmol/L (21-27 mmol/L)
Urea en sangre 50 mg/dL (8-25 mg/dL)
pH 7,12 (7,35-7,45)
pCO2 28 mmHg (35-45 mmHg)
Glucosa sérica 750 mg/dL (70-110 mg/dL)
Acetona sérica 3+ (0)
Hematocrito 53% (42-45%)
Hemoglobina 17,6 g/d}L (14-16 g/dL)
Recuento leucocitos 12000/mm3 (4.300-10000 mm3)
Recuento eritrocitos 6 millones /mm3 (4,5-5,2/mm3)
Responde:
1. Identificar los datos de laboratorio y los signos y síntomas anormales
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
PRACTICA N° 5
SCHOCK INSULINICO EN CONEJO
EFECTO DE LA INSULINA SOBRE LOS NIVELES DE GLUCOSA SANGUINEA
FENOMENOS DEL SHOCK INSULNICO
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
OBJETIVOS
EQUIPO
- Balanza analítica
MATERIALES BIOLÓGICO
MATERIALES
REACTIVOS
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
Glucosa anhidra
Insulina de acción rápida
Agua destilada
Adrenalina
TÉCNICA EXPERIMENTAL
- El conejo es un animal muy sensible a la acción de la insulina, cuya respuesta
a esta hormona es muy diferente de la del perro. Por esta razón, el conejo es
el animal de elección en el ensayo biológico oficial de estandarización de las
preparaciones insulínicas. Efectivamente, la definición de la unidad estándar
de insulina está basada en la respuesta observada con este animal.
- El conejo deberá estar en ayunas 24 horas antes del experimento. Se
inyectan 0.3ml de insulina por vía subcutánea al comenzar la sesión de
laboratorio. No deben usarse preparados de insulina de absorción lenta
(Insulina-Zn, Insulina-Zinc-portaminas).
- Luego de media hora se le inyectan también por vía subcutánea de 0,2ml de
insulina.
- Mientras usted espera los dramáticos efectos de la insulina, prepare una
solución al 10 % de glucosa que se le administrará al animal y tenga lista
también una jeringa de 10 ml. Después de un tiempo variable, pero
seguramente cerca de una hora después de la segunda inyección de insulina,
el animal entrará en convulsiones. Antes de que esto ocurra el animal habrá
pasado por una serie de cambios característicos, los cuales recuerdan los
cambios que experimenta un individuo con shock insulínico.
- Si al animal no se le presta atención posterior, puede ocurrir que no se
observe el período de convulsiones sino el periodo en el cual, el conejo en
estado comatoso permanece tranquilo. Algunas veces la muerte sobreviene
durante este primer ciclo de convulsiones. Muy pronto sin embargo, se
establece otro período de convulsiones, durante el cual el animal parece
encontrarse al borde de la muerte. El animal puede sobrevivir sin embargo a
esta nueva crisis.
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
- Una vez que el animal ha superado esta primera crisis y estando, aún en
estado comatoso, se le administran 10 ml de la solución al 10% de glucosa
por vía intraperitoneal.
- Como el animal había sido sobrecargado de insulina, la inyección de la
solución de glucosa sólo lo protegerá en una forma temporal. En las horas
siguientes es seguro que el animal caerá de nuevo en shock más de una vez.
Usted tendrá entonces la responsabilidad de protegerlo de la muerte.
Asegúrese de que haya alimento en la jaula del animal. Dos inspecciones
deben hacerse del animal, la primera a las 2 ó 3 horas y la segunda a las 6
horas. En cada una de estas visitas, como medida de protección, se inyectan
intraperitonealmente 10 ml de solución al 10% de glucosa.
SÍNTOMAS DE HIPOGLICEMIA:
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
INFORME N°5
SHOCK INSULINICO EN CONEJO
INTRODUCCIÓN:
OBJETIVO:
RESULTADOS:
CONCLUSIÓN:
CUESTIONARIO:
1. Defina el concepto de : shock, shock hipo glicémico
2. ¿Qué cambios observó usted en la conducta del animal a medida que los
niveles de glucosa se acercaban al nivel del shock?
3. ¿A qué nivel estaba la glucosa sanguínea cuando el animal cayó en shock?
4. A cierto tipo de pacientes (esquizofrénicos) se les provoca shock insulínico
de un modo similar al que usted ha provocado en el conejo y parece que
estos pacientes son beneficiados por este tratamiento. ¿Cree usted que es
el efecto sobre los músculos y sus correspondientes conclusiones lo que
busca el psiquiatra? ¿Será acaso el efecto sobre el sistema nervioso lo cual
conduce a cambios en la conducta aún de un conejo?
5. Describa qué es lo que pasa cuando usted administra glucosa al animal que
se encuentra en estado de shock.
6. Usted debe ser capaz de describir los muchos cambios que ocurren en un
animal como resultado de la inyección de insulina.
7. ¿Para que utilizamos la adrenalina? ¿Cuál es su mecanismo de acción?
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
BIBLIOGRAFÍA:
PRACTICA N° 6
INTERPRETACIÓN CLÍNICA
INTEGRACIÓN DE LAS RUTAS METABÓLICAS DE LOS HIDRATOS DE
CARBONOS
Resultados de laboratorio:
A. En suero o plasma:
a. Glucosa 35mmol/L (3.6 a 6.1 mmol/L)
b. Β-Hidroxibutarato 13.0 mmol/L (<0.25 mmol/L)
c. Acetato 2.8 mmol/L (< 0.2 mmol/L)
d. Bicarbonato 5 mmol/L (24 a 28 mmol/L)
e. Nitrógeno ureico 12 mmol/L (2.9 a 8.9 mmol/L)
f. Potasio 5.8 mmol/L (3.5 a 5.0 mmol/L)
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
Varón de 35 años que es traído a urgencia de forma involuntaria tras llevar una
semana con importantes alteraciones conductuales en su domicilio. A su llegada
presenta mal estado general, aspecto muy deteriorado y agitación psicomotriz con
discurso incoherente. Los familiares con los que vive refieren que lleva unos días
con comportamientos extraños, se pasa el día tumbado en la cama, apenas se
mueve, se ríe y parece que habla solo, mostrándose agresivo hacia ellos. Refieren
que nunca ha hecho seguimiento ni tratamiento psiquiátrico, aunque perdieron el
contacto con él durante 10 años y lo han retomado hace 5 meses. Vivió en Piura
donde parece que tuvo un ingreso con posibles diagnóstico de esquizofrenia.
Niegan hábitos tóxicos. Parece que desde hace 5 años lleva una dieta estricta a
base de frutas y algunas verduras.
En la exploración física se pone a manifiesto palidez cutánea, no caquéctico,
sequedad de mucosas. Consciente y reactivo, afebril, no rigidez en la nuca, no
adenopatías. Presión arterial 110/70 mmHg. Abdomen blando depresible, no mase
ni megalias, no doloroso a la palpación.
Extremidades, pulsos conservafos, no edemas, no datos de trombosis venosa
profunda, moviliza las 4 extremidades.
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA
UNIVERSIDAD NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA ”
Resultados de laboratorio:
BIOQUIMICA II - PRÁCTICA