CÓDIGO:

SGC.DI.505
GUIA PARA LAS PRÁCTICAS DE VERSIÓN: 2.0
FECHA ULTIMA REVISIÓN:

LABORATORIO, TALLER O CAMPO. 12/04/2017

Ciencias de la Vida y de la
DEPARTAMENTO: CARRERA: Biotecnologia
Agricultura
PERíODO Octubre a Febrero
ASIGNATURA: Inmunologia NIVEL: 7mo
LECTIVO: 2018
DOCENTE: Marbel Torres, PhD NRC: 5303/5305/5529 PRÁCTICA N°: 4

LABORATORIO DONDE SE DESARROLLARÁ LA PRÁCTICA Laboratorio de docencia de Biotecnología

TEMA DE LA
Manejo de Modelos Animales de laboratorio y obtención de células primarias
PRÁCTICA:
INTRODUCCIÓN:
Los modelos animales desde los años 1600 debido a sus características genómicas similares con el humano. Se han hecho varios
estudios de sus células inmunitarias para poder dilucidar mecanismos de defensa ante enfermedades o patógenos. Entre las células
inmunitarias se encuentran células peritoneales compuestas por leucocitos, macrófagos y linfocitos; esplenocitos y células
mononucleares de sangre periférica (PBMCs).
La ventaja del uso de ratones se debe a que su cuidado y mantenimiento son fáciles por su tamaño pequeño, el costo de
mantenimiento es bajo, eficiencia reproductiva, vida corta para realizar ensayos crónicos y corto tiempo de generación (Fuentes,
Mendoza, Rosales, & Cisneros, 2008). Además, existen cepas definidas, las cuales tienen genes iguales, un perfil genético propio y
son estables por largos periodos de tiempo, uniformes fenotípicamente, sensibles a cambios ambientales y son de distribución
mundial (Hernández, 2006). También presentan una diversidad de características específicas como modelo. Por ejemplo, el alto
grado de conservación entre los genomas de humanos y ratones (95%), permite estudios de cáncer, inmunología, toxicología,
metabolismo, biología del desarrollo, diabetes, obesidad, envejecimiento e investigaciones cardiovasculares (Hedrich & Hans,
2004).

El manejo de los de estos animales va más allá de los protocolos de investigación, ya que trato de los sujetos experimentales
influye en los resultados obtenidos. Por lo tanto es importante realizar una correcta manipulación, sujeción y mantenimiento para
precautelar el bienestar del animal, mejorar la investigación y la seguridad del personal (Mourelle, Herrero, & Ricca, 2013).
OBJETIVOS:
En esta práctica se lograran conocer el manejo y aislar células inmunitarias tales como macrófagos, esplenocitos, PBMCs a partir
de modelos animales de la cepa BALB/c sometidas a inmunización con Tioglicolato (0.2 ml), determinamos su viabilidad y
evaluamos si se encuentran dentro de los rangos normales al igual que el peso y el porcentaje de supervivencia.

MATERIALES:
INSUMOS:
REACTIVOS: Pipetas desechables
Alcohol Tubos de 50ml
PBS Tubos de 15ml
RPMI Cajas Petri
DMEM Viales de 2ml, 500ul
Azul de tripano Gradillas
Buffer lisis puntas de micropipetas de todoas los tamanos
Tioglicolato pipetas de 10ml
equipos de disección
Jeringas de 1ml
EQUIPOS Incubadora, centrifugadora, microscopio invertido, micropipetas, pipeteador automatico, microscopios opticos
MUESTRA: Modelos animales Ratones hembras
INSTRUCCIONES:
- Vacunación previa deacuerdo al MSP con el manejo de animales y muestras biologicas
- Mandil y medidas de precaucion
- Manejo de desechos biologicos

ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:

Manejo de Animales
 CÓDIGO: SGC.DI.505
GUIA PARA LAS PRÁCTICAS DE VERSIÓN: 2.0
FECHA ULTIMA REVISIÓN:

LABORATORIO, TALLER O CAMPO. 12/04/2017

1. Pesado de animales los dias de experiemntación
2. Marcaje de los animales de experiemntación
3. Inmunización con tioglicolato para estimular macrofagos a nivel peritoneal 3 dias antes

Obtención de Macrofagos

4. Lavar el peritoneo con medio RPMI 10ml para obtener células peritoneales y células adherentes.
5. Recuperación de medio 10ml de RPMI y centrifugar observar la formación del pellet homogeneización
6. conteo en cámara de Neubauer y observación de células adherentes en microscopio invertido después de 4horas de
adhesión en caja Petri

Obtención de Esplenocitos

7. Obtener el bazo de cada ratón y triturar el

bazo en caja Petri en una caja Petri
mediante el embolo de una jeringa
8. Obtener las células en tubos y lavar las
cajas
9. Centrifugar y eliminar los glóbulos rojos
con buffer lisis dos veces hasta un pellet
blanco
10. Contar las células para ver viabilidad con
azul de tripan

Obtención de PBMCs

11. Obtener los fémur y la tibia de los ratones limpiar bien el tejido muscular
12. Cortar las cabezas de los huesos y colocar en tubos de 0,5 ml y este en otro de 2ml y realizar un spin
13. El pellet eliminar de los globulos rojos con buffer lisis
14. Contar las células para ver viabilidad con azul de tripan
 CÓDIGO: SGC.DI.505
GUIA PARA LAS PRÁCTICAS DE VERSIÓN: 2.0
FECHA ULTIMA REVISIÓN:

LABORATORIO, TALLER O CAMPO. 12/04/2017

RESULTADOS OBTENIDOS:

Se indicará los resultados que debe obtener o presentar el estudiante, por ejemplo:
1. Calcule esl peso de ratones
2. Calcule la curva de sobrevivencia
3. Obtención de macrofagos por la prueba de adherencia
4. Elabore un informe en formato artículo científico con los datos de las 4 prácticas realizadas en la unidad
CONCLUSIONES:

Capacitación en el manejo de modelos animales

Obtención de células inmunitarias de ratones de la cepa BALB/c. En el peritoneo, en el bazo y en la medula osea
Determinar la viabilidad de cada celuas inmunes
Determinar las curvas de peso y de la supervivencia de los ratones
RECOMENDACIONES:
Manejar todas las muestras en Camara de bioseguridad para evitar la contaminación, uso de guantes en todo momento, control y
movimeintos del operador y firmeza en el manejo de animales de experimentación
FIRMAS

F: …………………………………………….
Nombre: MARBEL TORRES,PHD
DOCENTE RESPONSABLE
F: ……………………………………………….
Nombre: VALERIA OCHOA,PhD
COORDINADOR DE ÁREA DE
CONOCIMIENTO
F: …………………………………………………
Nombre: Patricia Jiménez, PhD
COORDINADOR/JEFE DE LABORATORIO DE
DOCENCIA