Ing.

Darwin J, Estacio Albornoz

UNIA
Crecimiento De
MicroorganismosTiempo Nº de bacterias

12:00 1
12:20 2
12:40 4
13: 00 8
14:00 64
15:00 512
16:00 4096

19:00 ¡ 2097152 !
MATEMATICA DEL CRECIMIENTO EXPONENCIAL
Cuando se inocula una bacteria en un medio y ha
transcurrido el tiempo de generación de este
microorganismo, se forman dos células, después de
otra generación cuatro células después de la tercera
generación ocho células. Es decir en cada generación
sucesiva se duplica la población. La relación que existe
entre el número de células y las generaciones de un
cultivo creciendo en forma exponencial, puede
deducirse matemáticamente de la manera siguiente:
Se designa como:

x = Nº de bacterias al tiempo 0
y = Nº de bacterias al tiempo t
t = tiempo en crecimiento exponencial
Al tiempo 0 y = x
Después de: 1 generación y = x.2
CONCEPTOS:
• Dado el pequeño tamaño de los microorganismos, la cantidad de información que
puede obtenerse de un individuo es muy limitada. Por ello es necesario el estudio de
poblaciones, que contienen miles o millones de individuos. Estas poblaciones se
obtienen al hacer crecer los microorganismos bajo condiciones más o menos bien
definidas, se conocen como cultivos.

• La mezcla de sustancias, naturales, sintéticas o ambas, que permite el crecimiento y

la reproducción de microorganismos o bien que permite mantener su viabilidad es
lo que conocemos como Medio de Cultivo
Medio
de
cultivo

Cultivo
• El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de
cultivo. Se licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al
enfriarse a 40 grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento
de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él.
 AGAR
DISUELTO

AGAR
PRESIPITADO
( SIN DISOLVER)
• También se añaden colorantes que
actúan como indicadores para detectar,
por ejemplo, la formación de ácido o
como inhibidores del crecimiento de unas
bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se
usa como indicador ya que es rojo en pH
básico y amarillo en pH ácido. La Violeta
de Genciana se usa como inhibidor ya
que impide el crecimiento de la mayoria
de las bacterias Gram-positivas).
CONDICIONES GENERALES PARA EL
CULTIVO DE MICROORGANISMOS
El desarrollo adecuado de los
microorganismos en un medio de cultivo
se ve afectado por una serie de factores
de gran importancia y que, en algunos
TEMPERATURA

casos, son ajenos por completo al propio

medio. NUTRIENTES Y
FACTORES DE
GRADO DE
HUMEDAD
CRECIMIENTO

ACIDEZ O PRESIÓN DE
ALCALINIDAD OXÍGENO
 • Un medio de cultivo adecuado ha de contener como mínimo, carbono, nitrógeno,
azufre, fósforo y sales inorgánicas, vitaminas y otras sustancia inductoras del
crecimiento; sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de
electrones para las reacciones químicas que tengan lugar.
DISPONIBILIDAD DE • Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es
NUTRIENTES utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de
ADECUADOS
nitrógeno y carbóno

• Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos

como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado semisólido
• Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad, su
inconveniente es que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente sino a
CONSISTENCIA
ADECUADA DEL MEDIO temperaturas inferiores al punto de fusión de este solidificante

• Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno
normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero los
microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en una
atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos
PRESENCIA (O microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias (tensión
AUSENCIA) DE OXÍGENO de oxígeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo
Y OTROS GASES capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.
 MEDIO DE CULTIVO SOLIDO MEDIO DE CULTIVO LIQUIDO

MEDIO DE CULTIVO
SEMI SOLIDO
 • Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es imprescindible para un buen desarrollo
de las células vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones
CONDICIONES mínimas en las estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la
ADECUADAS DE
HUMEDAD
humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el medio.

• La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay
excepciones evidentes como sería el caso de los microorganismos fotosintéticos
LUZ AMBIENTAL

• La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos. La mayoría de
ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos.
No se debe olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano
pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metabólicos normales
pH

• Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y 43ºC. Otros como los psicrófilos
crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los
patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y los saprofítos
tienen rangos más amplios.
TEMPERATURA

• Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida que
puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especimenes
inoculados en dichos medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza
ESTERILIDAD DEL vapor de agua a presión como agente esterilizante)
MEDIO
 Tipos de medios de
cultivo

* MEDIOS DE CULTIVO * MEDIOS DE CULTIVO M EDIOS DE CULTIVO MEDIOS DE

GENERALES. SELECTIVOS. DIFERENCIALES. ENRIQUECIMIENTO.
• Permiten el •llevan incorporadas • incorpora •son aquellos medios en
crecimiento deuna determinadas determinadas los cuales a un medio
gran variedad de sustancias que sustancias que nos base se le añaden
microorganismos. inhiben el permiten diferenciar determinadas sustancias
Pertenecen a esta crecimiento de un entre dos tipos de nutritivas que son
categoría las microorganismo y microorganismos. Ej. necesarias para el
infusiones de facilita el crecimiento El agar de sal y crecimiento de un
extractos de carne y del microorganismo manitol: nos permite microorganismo
peptona, una mezcla que nos interesa. diferenciar en el caso exigente.. Por ejemplo el
de composición Pertenecen a esta de los staphylococos, caldo selenito cistina o el
similar a la de los categoría el caldo los que utilizan el caldo agar sangre.
líquidos orgánicos, lactosa bilis verde manitol en su
que se utiliza para brillanteo el agar metabolismo de los
muchas bacterias Salmonella-Shigella. que no.
patógenas
ALMACENAMIENTO DE LOS MEDIOS DE
CULTIVO
Los medios de cultivo deshidratados se
deben almacenar en envases sellados
bajo las condiciones que señale el
fabricante. Generalmente se almacenan
en un lugar fresco (entre 15 y 25°), con
Cada lote de medio de c
poca humedad y ultivo,
protegidos
una de la luz
vez preparado, esteriliza
solar directa. Nunca
do, se deben almacenar
revisado
y en su presentación
cerca de autoclaves,
final, sehornos,
identifica ni otra
mediante una etiqueta
fuente de calor o vapor.
con el nombre del medio
de
cultivo correspondiente,
el número de lote y la fe
cha de caducidad. Se
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
 PRUEBAS CONVENCIONALES PARA
IDENTIFICACION DE COCOS GRAM POSITIVOS
Y BACILOS GRAM NEGATIVOS

Ing. Darwin J Estacio Albornoz

UNHEVAL - CHAGLLA
• Coloración de Gram Cocos gram
positivos distribuidos en forma de
racimos

• Prueba de catalasa
Diferenciación entre Géneros
Staphylococcus y Streptococcus
Reactivo: peróxido de hidrógeno
 Pruebas de Diferenciación entre
Staphylococcus

Fermentación de Coagulasa
Manitol

DNAsa
Agar Triple Azúcar Hierro(TSI)

• Fermentación de Lactosa, Sacarosa y

Glucosa
• Producción de H2S
• Producción de gas

Agar Lisina Hierro (LIA)

• Desaminación de lisina
• Descarboxilación de lisina
• Producción de H2S
 Agar Citrato
• Consumo de citrato como única
fuente de carbono

Medio Sulfuro – Indol – Motilidad (SIM)

• Producción de H2S
• Producción de indol
• Producción de enzima triptofanasa
• Presencia de motilidad
Medio RM – VP
• Consumo de glucosa por vía de
fermentación de ácidos mixtos o vía
butelinglicólica

Caldo Urea
• Producción de enzima ureasa
• Agar TSI y LIA

Primero introducir asa en punta hasta el fondo del tubo.

Al retirar el asa, sembrar en estría sobre la superficie
inclinada
• Agar Citrato
Sembrar en estría sobre la
superficie inclinada con asa en punta

• Medio SIM
Introducir el asa en punta sin llegar al
fondo del tubo y retirar por el mismo
lugar donde se introdujo